血清RBP、CysC測定在肝、腎疾病診斷中的應(yīng)用

王永卿，李春蕓，楊 瑤

（?？谑腥嗣襻t(yī)院，海南 海口 570208）

近年來，研究表明血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(CysC)和血清視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)能較好地反映腎小球濾過率，能早期監(jiān)測腎小球功能輕微受損情況。血清CysC和RBP的濃度與腎臟疾病嚴重程度呈顯著正相關(guān)；RBP還是反映肝合成功能受損的一個敏感的指標。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

1.1.1 病例組 收集我院2009年11月1日至2010年3月31日腎內(nèi)科、消化內(nèi)科、內(nèi)分泌科的住院病人和門診病人130例。按照第二屆全國腎臟病學術(shù)會議腎臟疾病的臨床分類法將腎病組分為腎小球腎炎30例，糖尿病腎病14例，慢性腎功能衰竭10例。按照肝臟疾病的病變程度將肝病組分為急性肝炎21例，肝硬化42例，肝惡性腫瘤13例。

1.1.2 健康對照組 收集同期我院健康體檢者37例，年齡21-78歲，平均40歲，其中女20例，男17例。經(jīng)B超、心電圖和臨床各項檢查無肝病、腎病、冠心病、腫瘤、糖尿病等病史和疾病。

1.2 實驗原理 利用抗原血清視黃醇結(jié)合蛋白（RBP）和胱抑素C（Cys C）和特異性抗體（羊抗人RBP、CYS C血清）相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液產(chǎn)生混濁，其濁度高低（即透光度減少、吸光度增加）反映血清樣品中RBP、Cys C的含量。通過與校準品吸光度比較，算出血清中RBP和Cys C的濃度。

1.3 實驗儀器 日立HI7600全自動生化分析儀。

1.4 實驗試劑 RBP試劑為上海北加生化試劑有限公司試劑盒，產(chǎn)品標準編號：YZB/滬4301-40-2009；Cys C試劑為寧波美康生物技術(shù)有限公司試劑盒，產(chǎn)品標準編號：YZB/國1390-2006.

1.5 實驗方法 免疫比濁法（二點終點法）。待測血清，加試劑R1后，37℃孵育5 min，讀測第1點（A1），加入試劑R2，37 ℃孵育5 min，讀測第2點（A2），待測血清A=A2-A1。

1.6 結(jié)果計算 待測樣本RBP/Cys C濃度（mg/L）=[樣本吸光度(A2-A1)/校準品吸光度（A2-A1）]×RBP/Cys C校準濃度（mg/L）。

1.7 統(tǒng)計分析 采用Microsoft Excel2009和SPSS13.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。濃度用（±s）表示，顯著性檢驗用方差分析。

2 結(jié)果

對照組血清RBP含量為（49.7±13.2）mg/L，腎小球腎炎血清RBP含量為（95.1±32.8）mg/L，慢性腎功能衰竭血清RBP含量為（78.2±37.7）mg/L，糖尿病腎病血清RBP含量為（82.8±36.1）mg/L，腎病組總的血清RBP含量為（88.8±34.1）mg/L，腎病組與對照組比較P均＜0.01，差異有統(tǒng)計學意義，腎病組內(nèi)比較P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表1。

肝病組肝炎血清RBP含量為（25.8±10.2）mg/L，肝硬化血清RBP含量為（16.9±11.40）mg/L，肝惡性腫瘤血清RBP含量為（20.3±10.0）mg/L，肝病組總的血清RBP含量為（19.7±11.4）mg/L，肝病組與對照組比較P均＜0.01，差異有統(tǒng)計學意義，肝病組內(nèi)比較P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表2。

表1 腎病患者血清RBP與對照組比較（±s）

表1 腎病患者血清RBP與對照組比較（±s）

組別 例數(shù)RBP值(mg/L)P對照組腎病組(總)慢性腎功能衰竭糖尿病腎病慢性腎小球腎炎375410143049.7±13.288.8±34.178.2±37.782.8±36.195.1±32.8-＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01

表2 肝病患者血清RBP與對照組比較（±s）

表2 肝病患者血清RBP與對照組比較（±s）

組別對照組肝病組(總)肝炎肝硬化肝惡性腫瘤例數(shù)3776214213 RBP值(mg/L)49.7±13.219.7±11.425.8±10.216.9±11.420.3±10.0 P-＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01

對照組血清Cys C含量為（0.92±0.61）mg/L；腎病組腎小球腎炎血清Cys C含量為（3.78±3.36）mg/L，糖尿病腎病血清Cys C含量為（2.63±1.19）mg/L，慢性腎功能衰竭血清Cys C含量為（2.89±1.20）mg/L，腎病組總的血清Cys C含量為（3.30±2.00）mg/L，腎病組與對照組比較P均＜0.01，差異有統(tǒng)計學意義，腎病組內(nèi)比較P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表3。

表3 腎病患者血清Cys C與對照組比較（±s）

表3 腎病患者血清Cys C與對照組比較（±s）

組別 例數(shù)Cys C值(mg/L)P對照組腎病(總)慢性腎功能衰竭糖尿病腎病慢性腎小球腎炎37541014300.92±0.613.30±2.003.78±3.362.63±1.192.89±1.40-＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01

肝病組肝炎血清Cys C含量為（1.14±0.05）mg/L，肝硬化血清Cys C含量為（0.99±0.04）mg/L，肝惡性腫瘤血清Cys C含量為（0.92±0.05）mg/L，肝病組總的血清Cys C含量為（0.92±0.25）mg/L，肝病組內(nèi)比較P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義，肝病組與對照組比較P均＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表4。

表4 肝病患者血清RBP與對照組比較（±s）

表4 肝病患者血清RBP與對照組比較（±s）

組別 例數(shù)RBP值(mg/L)P對照組肝病組(總)肝炎肝硬化肝惡性腫瘤37762142130.92±0.610.92±0.251.14±0.050.99±0.040.92±0.05-＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05

3 診斷試驗

由于腎病組內(nèi)和肝病組血清RBP和Cys C均無顯著性差異，故我們在討論診斷試驗時，只分對照組和腎病組、肝病組。

3.1 正常對照37人，血清RBP結(jié)果增高9人，占24.3%，結(jié)果降低2人，占5.4%，結(jié)果在正常范圍內(nèi)26人，占70.2%；血清Cys C結(jié)果增高2人，占5.4%，結(jié)果在正常范圍35人，占94.6%。

腎病組54例，RBP結(jié)果增高42例，占77.8%，結(jié)果降低4例，占7.4%；結(jié)果在正常參考范圍內(nèi)8例，占14.8%；Cys C結(jié)果增高47例，占87.0%，結(jié)果在正常范圍7例，占13.0%。腎病RBP、Cys C同時陽性41例，占75.9% 同時陰性6例，占11.1%。

肝病組76例，RBP結(jié)果降低57例，占75.0%，結(jié)果在正常范圍18例，占23.7%。Cys C檢測結(jié)果在肝病組與正常對照組無顯著差異。結(jié)果見表5。

表5 各組檢測結(jié)果[例(%)]

3.2 腎病組12例RBP不升高者原因分析

3.2.1 結(jié)果降低4人，其中Cys C升高的3人，肝功能異常（有1人轉(zhuǎn)氨酶升高，2人血清蛋白降低），另外1人RBP、Cys C結(jié)果均降低，肝功能均正常。

3.2.2 結(jié)果在正常參考范圍內(nèi)8人，其中2人轉(zhuǎn)氨酶升高，6人血清蛋白降低。結(jié)果見表6。

表6 腎病組RBP不升高者原因分析（例）

由以上分析可知肝功能損傷，特別是肝臟合成功能損傷是引起腎臟疾病病人血清RBP結(jié)果不升高的主要原因。

4 討論

Cys C是體內(nèi)有核細胞產(chǎn)生的一種血漿內(nèi)源性小分子微量蛋白，生產(chǎn)較穩(wěn)定，不受個體、肌肉量、性別、年齡、腎前因素和慢性炎癥的影響。相對分子質(zhì)量低，能自由濾過腎小球，在近端腎小管上皮細胞被分解代謝，不被腎小管重吸收和分泌，血液中的濃度主要由腎小球濾過率(GFR)決定，能理想地反映GFR。

RBP是由肝臟合成的轉(zhuǎn)運視黃醇(維生素A)的蛋白，體內(nèi)90%的RBP與視黃醇結(jié)合為holo-RBP，85%holo RBP可與TTR結(jié)合成大分子，不被腎小球濾過，而剩下的15%可部分經(jīng)腎小球濾過。因此，腎臟濾過功能受損害時，RBP濃度水平會顯著升高。

本實驗表明，血清CysC和RBP的濃度與腎臟疾病呈顯著正相關(guān)，能早期監(jiān)測腎小球功能輕微受損情況。從表5可以看出，單項檢測最高陽性率為87%，兩項聯(lián)合檢測陽性率達88.9%。同時我們發(fā)現(xiàn)腎臟疾病合并有肝功受損特別肝臟合成功能低下者血清RBP不升高，所以在分析結(jié)果時必須綜合考慮。

在肝病診斷方面，通過本實驗，我們發(fā)現(xiàn)Cys C在肝病診斷方面并無臨床意義，這與一些報道說肝硬化病人Cys C血清含量升高不相符；由于RBP是由肝臟合成的，所以，所有類型的肝病病人血清RBP都顯著降低（肝病合并腎病時RBP要依據(jù)病情綜合分析），RBP是反映肝合成功能受損的一個敏感的指標。

綜上所述，測定血清RBP一個項目可以診斷肝腎兩種疾病，但同時患有這兩種疾病時血清RBP含量依病情變化而變化。測定血清Cys C可診斷腎臟疾病，特異性較強，RBP和Cys C同時測定可提高腎臟疾病的診斷率。

[1]Berggard I.Stuides on the plasma protein in normal human urine[J].Clin Chim Acta,1961,6:413.

[2]Kanai M,Paz A,Cadman DS,et al.Retinol-binding protein for vitamin A in human plasma[J].J Chin Invest,1968,47:2025.

[3]Vahlquist A,Rask L,Peterson P,et al.The retinol-binding protein[J].Scan J Clin Lab Invest Suppl,1980,154:45.

[4]Bernard AM,Vyskocil AA,Mahieu P,et al.Assessment of urinary retinol-binding protein as an index of proximal tubular injury[J].Clin Chem,1987,33:775.

[5]Smith FR,Gondmon DS.The effects of disease of the liver,thyroid and kidneys on the transport of vitamin A in human plasma[J].J Clin Invest,1971,25:2426.

[6]Bankson DD,Rifai N,Silverman LM.Immunoturbidimetric measurement of serum retinol-binding protein in renal and hepatic disease[J].Ann Clin Biochem,1988,25:246.

[7]Winkler MF,Gerrior SA,Pomp A,et al.Use of retinol-binding protein and prealbumin as indicators of response to nutrition therapy[J].JAm Diet Assoc,1989,89:684.

[8]范列英,沈新義,耿培蘭,等.視黃醇結(jié)合蛋白的放射免疫分析[J].中華核醫(yī)學雜志,1994,14（1）:46-47.

[9]謝鑫友,朱永良,林 潔.視黃醇結(jié)合蛋白的快速酶聯(lián)免疫法測定[J].上海免疫學雜志.1998,18（6）:363-364.

[10]韓振武,趙 然,邵樹茂,等.血清胱抑素C用以評估腎小球率過濾的價值[J].中國誤診學雜志,2007,7(18):4222.

[11]侯 巍,楊述紅,宣 萍.視黃醇結(jié)合蛋白測定的臨床意義[J].中國實驗診斷學,2002,6(5):348.