蜂王漿對(duì)低鈣條件下離體蟾蜍心臟心率和心肌收縮力的影響

傅 雷 關(guān) 升王冬梅 林 原付 娟唐澤耀(大連醫(yī)科大學(xué)機(jī)能實(shí)驗(yàn)室,遼寧 大連 6044)

蜂王漿對(duì)低鈣條件下離體蟾蜍心臟心率和心肌收縮力的影響

傅 雷 關(guān) 升1王冬梅 林 原2付 娟3唐澤耀2(大連醫(yī)科大學(xué)機(jī)能實(shí)驗(yàn)室,遼寧 大連 116044)

目的 觀察不同濃度蜂王漿溶液對(duì)離體蟾蜍心率和心肌收縮力的影響。方法 30只蟾蜍隨機(jī)分為任氏液組、任氏液 +蜂王漿組和低鈣任氏液 +蜂王漿組,每組 10只。采用斯氏法制備離體蛙心灌流標(biāo)本。對(duì)照組離體蟾蜍心臟只灌流任氏液,任氏液 +蜂王漿組在離體蟾蜍心臟的灌流任氏液中加入蜂王漿溶液,低鈣任氏液 +蜂王漿組在離體蟾蜍心臟灌流低鈣任氏液中加入蜂王漿溶液。通過(guò)蟾蜍心室外采用心室收縮波動(dòng)、心室吸收藥物的方法給藥,心室外容積固定為 1.0m l,根據(jù)所需蜂王漿濃度計(jì)算出加入原漿蜂王漿的容積,每次加入蜂王漿后記錄 10～20m in。應(yīng)用BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄的離體蟾蜍心肌收縮曲線,并進(jìn)行心肌收縮力和心率的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 任氏液 +蜂王漿組與任氏液組比較,在 1∶5 000濃度時(shí)蜂王漿能明顯抑制離體蟾蜍心臟的心率和心肌收縮力(P<0.05);在 1∶500濃度時(shí),蜂王漿可顯著抑制離體蟾蜍心臟的心率和心肌收縮力,甚至心臟停止跳動(dòng)呈劑量依賴關(guān)系;低鈣任氏液 +蜂王漿組與任氏液組比較,在 1∶10 000濃度時(shí)蜂王漿明顯抑制離體蟾蜍心臟的心率和心肌收縮力(P<0.05);在 1∶1 000濃度時(shí),蜂王漿顯著抑制離體蟾蜍心臟的心率和心肌收縮力,甚至心臟停止跳動(dòng)呈劑量依賴關(guān)系。低鈣任氏液 +蜂王漿組與任氏液 +蜂王漿組比較,在 1∶5 000濃度蜂王漿能明顯抑制離體蟾蜍心臟的心率和心肌收縮力(P<0.05)。結(jié)論 在低鈣條件下,蜂王漿對(duì)離體蟾蜍心臟活動(dòng)的抑制比在正常鈣任氏液條件下更容易出現(xiàn)。

蜂王漿;低鈣;心肌收縮力;心率

蜂王漿為蜜蜂科中華蜜蜂及意大利蜜蜂之工蜂咽腺分泌的乳白色膠狀物,具有滋補(bǔ)、強(qiáng)壯、益肝和健脾之功能,而且在抗菌、抗癌、抗衰老、抗氧化、提高機(jī)體免疫功能等方面具有獨(dú)特的療效,在機(jī)能恢復(fù)上卓有成效〔1,2〕。研究表明,蜂王漿通過(guò)對(duì)脂肪代謝的調(diào)節(jié),降低血脂和膽固醇,從而治療高血脂,并對(duì)血壓有雙向調(diào)節(jié)作用,始終將血壓向正常范圍調(diào)節(jié)〔3〕。本研究著重探討蜂王漿的保健作用及不同劑量對(duì)心臟功能的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 中華蟾蜍 30只,體重 80～100 g,由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。所有蟾蜍隨機(jī)分為對(duì)照組、任氏液 +蜂王漿組和低鈣任氏液 +蜂王漿組,每組 10只。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 蜂王漿由大連鑫毅蜂產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)(批號(hào) GB9697)。任氏液 (1 000m l蒸餾水中 NaC l6.50 g,KC l 0.14 g,CaC l20.12 g,NaHCO30.20 g,NaH2PO40.01 g),低鈣任氏液(1 000m l中 CaC l20.06 g,其余成分同任氏液),BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟公司)和張力換能器。

1.2.2 模型制備 取 1只蟾蜍破壞其腦和脊髓后,仰臥位固定于蛙板上,剪開(kāi)胸壁,暴露心臟,在兩個(gè)主動(dòng)脈下穿兩根絲線,在主動(dòng)脈球上端向心臟方向剪一斜向的切口,將盛有少量任氏液的玻璃蛙心插管先插入動(dòng)脈球,后在心縮期插入心室,將其中的一根絲線結(jié)扎,并固定;另一根絲線遠(yuǎn)離靜脈竇結(jié)扎其余的動(dòng)靜脈。若插管的管尖在蟾蜍的心室內(nèi),則見(jiàn)管中液面隨著心搏而升降。將心臟連同靜脈竇一起剪下,吸去管內(nèi)的血液,并用任氏液反復(fù)沖洗心室內(nèi)的血液。

1.2.3 給藥方法 對(duì)照組離體蟾蜍心臟只灌流任氏液,任氏液 +蜂王漿組在離體蟾蜍心臟的灌流任氏液中加入蜂王漿溶液,低鈣任氏液 +蜂王漿組在離體蟾蜍心臟灌流低鈣任氏液中加入蜂王漿溶液。通過(guò)蟾蜍心室外采用心室收縮波動(dòng)、心室吸收藥物的方法給藥。心室外容積固定為 1.0m l,根據(jù)所需蜂王漿濃度計(jì)算出加入原漿蜂王漿的容積,每次加入蜂王漿后記錄10～20m in。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo) 將玻璃蛙心插管的上端用試管夾固定于鐵支架臺(tái)上,將蛙心夾上的絲線連接于張力換能器的黃片上,換能器的輸出線與計(jì)算機(jī)的輸入接口相連。待蟾蜍心臟插管穩(wěn)定 1h左右,采用計(jì)算機(jī)描記心肌收縮曲線,應(yīng)用 BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄蟾蜍的心肌收縮曲線,固定心臟外容積為1.0m l,調(diào)節(jié)張力換能器與蟾蜍心臟之間連線的張力至 7g左右,固定放大器靈敏度、時(shí)間常數(shù)和濾波等參數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 蜂王漿對(duì)離體蟾蜍心率的影響 見(jiàn)表 1。任氏液 +蜂王漿組與任氏液組離體蟾蜍心臟的心率在蜂王漿 1∶5 000時(shí)開(kāi)始有抑制,分別為 25.58±1.4和 28.56±1.9(P<0.05),在1∶1 000時(shí)分別為 22.38±1.1和 28.36±1.4(P<0.05),在1∶500時(shí)心臟停止跳動(dòng)。低鈣任氏液 +蜂王漿組與任氏液組離體蟾蜍心臟的心率在蜂王漿 1∶10 000時(shí)開(kāi)始有抑制,分別為26.28±1.4和 28.61±1.2(P<0.05),在 1∶2 000時(shí)分別為21.7±1.8和 28.14±0.9(P<0.05),在 1∶1 000時(shí)心臟停止跳動(dòng)。低鈣任氏液 +蜂王漿組與任氏液 +蜂王漿組離體蟾蜍心臟的心率在蜂王漿 1∶5 000時(shí)開(kāi)始有明顯抑制,分別為23.86± 1.6和 25.58±1.4(P<0.05)。

2.2 蜂王漿對(duì)任氏液或低鈣任氏液灌流離體蟾蜍心肌收縮力的影響 見(jiàn)表 2。任氏液組 +峰王漿組與正常任氏液組離體蟾蜍心臟的心肌收縮力在蜂王漿 1∶5 000時(shí)開(kāi)始有抑制,分別為5.25±0.4和 7.05±0.7(P<0.05),在 1∶1 000時(shí)分別為3.54±0.4和 6.89±0.7(P<0.01),在 1∶500時(shí)心臟停止跳動(dòng)。低鈣任氏液 +蜂王漿組與任氏液組離體蟾蜍心臟的心肌收縮力在蜂王漿 1∶10 000時(shí)開(kāi)始有抑制,分別為 5.1±0.6和6.85±0.7(P<0.05),在 1∶2 000時(shí)分別為 3.34±0.4和6.85±0.6(P<0.01),在 1∶1 000時(shí)心臟停止跳動(dòng)。低鈣任氏液 +蜂王漿組與任氏液 +蜂王漿組離體蟾蜍心臟的心肌收縮力在蜂王漿1∶10 000時(shí)開(kāi)始有明顯抑制,分別為 5.1±0.6和7.08±0.7(P<0.05)。

表 1 蜂王漿對(duì)離體蟾蜍心率的影響(±s,n=10)

表 1 蜂王漿對(duì)離體蟾蜍心率的影響(±s,n=10)

與正常任氏液組比較:1)P<0.05;與任氏液 +蜂王漿組比較:2)P<0.05;下表同

組別濃度 1∶500 1∶1 000 1∶2 000 1∶5 000 1∶10 000正常任氏液組 28.46±2.1 28.36±1.4 28.14±0.9 28.56±1.9 28.61±1.2任氏液+蜂王漿組 0 22.38±1.11)25.36±2.1 25.58±1.41)27.91±2.1低鈣任氏液+蜂王漿組 0 0 21.7±1.81)23.86±1.62)26.28±1.41)

表 2 蜂王漿對(duì)離體蟾蜍的心肌收縮力的影響(±s)

表 2 蜂王漿對(duì)離體蟾蜍的心肌收縮力的影響(±s)

組別濃度 1∶500 1∶1 000 1∶2 000 1∶5 000 1∶10 000正常任氏液組 7.10±0.6 6.89±0.7 6.85±0.6 7.05±0.7 6.85±0.7任氏液+蜂王漿組 0 3.54±0.41)4.68±0.5 5.25±0.51)7.08±0.7低鈣任氏液+蜂王漿組 0 0 3.34±0.41)3.78±0.42)5.1±0.61)2)

3 討 論

研究表明,蜂王漿具有降血壓、抗疲勞、抗變態(tài)反應(yīng)、抗菌、性激素樣作用、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化、對(duì)實(shí)驗(yàn)性 П型糖尿病大鼠心肌的保護(hù)、抗病毒性心肌炎等作用〔4～7〕。另外,蜂王漿中還含有豐富的乙酰膽堿,是蜂王漿中的活性物質(zhì),在體內(nèi)可直接被吸收利用,是記憶和神經(jīng)信息傳遞的重要介質(zhì),對(duì)腦力、思維能力、記憶能力的提高起到重要作用。乙酰膽堿能與心肌細(xì)胞膜的M型膽堿能受體結(jié)合,增加膜對(duì) K+的通透性,降低膜對(duì) Ca2+的通透性,使膜電位更接近于 K+的平衡位點(diǎn),抑制心肌細(xì)胞的收縮,當(dāng)蜂王漿溶液達(dá)到一定濃度產(chǎn)生心肌細(xì)胞收縮力起到抑制作用。本研究顯示,離體蟾蜍心臟在正常任氏液灌流中加入蜂王漿,當(dāng)蜂王漿濃度達(dá)到 1∶5 000時(shí),離體蟾蜍心臟開(kāi)始明顯抑制,與有關(guān)報(bào)道〔8〕基本相似。有研究表明,老年人低鈣能夠引起心力衰竭〔9〕,細(xì)胞外液中 Ca2+濃度下降可以觸發(fā)心肌細(xì)胞收縮對(duì)Ca2+敏感性增強(qiáng)。本研究亦顯示,離體蟾蜍心臟在低鈣任氏液灌流中蜂王漿濃度達(dá)到 1∶10 000時(shí),離體蟾蜍心臟開(kāi)始明顯抑制,比在正常鈣任氏液灌流中加入蜂王漿離體蟾蜍心臟開(kāi)始明顯抑制的濃度明顯降低,并且停止心臟跳動(dòng)的濃度也下降,說(shuō)明蜂王漿對(duì)離體蟾蜍心臟活動(dòng)的抑制在低鈣條件下比在任氏液條件下更容易發(fā)生。對(duì)于老年人特別是易患低鈣血癥的老年婦女,在服用蜂王漿時(shí)應(yīng)注意控制劑量,并對(duì)心臟并發(fā)癥進(jìn)行監(jiān)測(cè)。此外,蜂王漿中還存在其他多種活性組分,如組織胺、5-羥色胺、心臟肽、微量元素硒等,但對(duì)心肌、平滑肌的影響可能只起到從屬地位。蜂王漿對(duì)心肌的抑制作用可能通過(guò)對(duì) ATP酶活性的影響,保持機(jī)體的能量?jī)?chǔ)備的機(jī)制發(fā)揮作用〔10〕。

蜂王漿對(duì)心肌收縮力的具體作用機(jī)制涉及到更微觀的領(lǐng)域(細(xì)胞和分子生物學(xué)等),目前尚未有相關(guān)報(bào)道,蜂王漿含有的具體成分對(duì)心肌收縮作用尚有待于進(jìn)一步研究。

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(編輯 牛鐵兵)

Effect of roya l jelly on exsom a tize toad hear t ra te andm yocard ia l con traction force under lower Ca2+cond ition

FU L ei,GUAN Sheng,W ANG Dong-M ei,et a l.
Function Labora tory of Da lian M ed ica l Un iversity,Da lian 116044,L iaon ing,Ch ina

O b jective To observe the effectof different concentration of royal jelly on exsom atize toad heart rate(HR)andm yocard ial contraction fo rce under lowerCa2+cond ition.M ethod s Conven tional irrigated exsom atize frog heartwas used.The toadswere divided into:norm alRen so lution,norm alRen so lution+royal jelly and low calcium Ren so lution+royal jelly groups.Resu lts Royal jelly supp ressed exsom atize toad HR andm yocardial contraction force??when the concentration of royal jellywas1∶5 000 in norm alRen solution+ royal jelly group comparisonw ith those in norm alRen so lution(P<0.05);Royal jelly significantly supp ressed exsom atize toad HR andm yocardial contraction forcewhen the concentration of royal jellywas1∶500,even heartarrest,in them annerof dosage dependence.Royal jelly supp ressed the exsom atize toad HR andm yocardial contraction forcewhen the concentration of royal jellywas1∶10 000 in low calcium Ren so lution+royal jelly group comparisonw ith those in norm alRen so lution group(P<0.05);Royal jelly significantly supp ressed the exsomatize toad HR andm yocardial contraction forcewhen the concentration of royal jellyw as1∶1 000,even the heartarrest,also in them anner of dosage dependence.Royal jelly significan tly supp ressed the exsom atize toad HR andm yocard ial con traction fo rcewhen the concen tration of royal jellywas1∶5 000 in low calcium Ren so lu tion+royal jelly group com parisonw ith those in no rm alRen so lution+royal jelly group(P <0.05).Conclusion s Exsom atize toad cardiac activity is inhibited by royal jelly under the low calcium condition compared to norm alRen so lution condition.

Royal jelly;Low calcium;M yocardial contraction force;Heart rate

book=30,ebook=1

R737.31

A

1005-9202(2010)01-0044-03

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30772601)

1 大連醫(yī)科大學(xué)七年制2005級(jí) 2 大連醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院

3 大連海王星辰醫(yī)藥有限公司

唐澤耀(1963-),男,副教授,博士,主要從事藥理學(xué)研究。

傅 雷(1965-),男,碩士,主要從事生殖生理學(xué)研究。