高效液相色譜法測(cè)定紅花龍膠囊中蛻皮甾酮的含量

周鋼 李維義

紅花龍膠囊根據(jù)中醫(yī)理論結(jié)合強(qiáng)直性脊柱炎的臨床癥狀由:紅花、地龍、牛膝、黃芪、附子、五加皮、巴戟天、甘草、白花蛇、羌活、獨(dú)活、川芎等十多味中草藥經(jīng)醇提和水煎等方法而組成的復(fù)方膠囊制劑。紅花龍膠囊具有:益氣補(bǔ)腎、活血通絡(luò)、溫經(jīng)止痛的功效，經(jīng)臨床部分應(yīng)用，對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎有確切的臨床療效。為保障制劑質(zhì)量對(duì)紅花龍膠囊中牛膝的有效成分蛻皮甾酮用高效液相色譜法測(cè)定含量以控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

日本Jasco UV-975型高效液相色譜儀，色譜工作站(日本)。中藥材采購(gòu)于GMP生產(chǎn)企業(yè)，其中中藥飲片牛膝經(jīng)蘭州大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室鑒定為莧科植物牛膝Achyranthes bidentata BL的干燥根。甲醇為色譜純，無(wú)水乙醇、正丁醇為分析純?cè)噭?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Bondapak TMC18色譜柱(3.9 mm×300 mm，8 ～10 μm)沃特世公司，流動(dòng)相:甲醇-水(45:35);流速:0.8 ml/min，柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)243 nm，檢測(cè)靈敏度0.08AUFS，理論塔板數(shù)以蛻皮甾酮(C27H44O7)計(jì)不低于4800，此條件下，樣品中蛻皮甾酮與相鄰成分達(dá)基線分離，且對(duì)陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2 對(duì)照品溶液的配制取于105℃下干燥至恒重的對(duì)照品蛻皮甾酮約5.5 mg，用水飽和的正丁醇定量轉(zhuǎn)溶于5 ml量瓶并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 ml置于10 ml量瓶中，加水飽和的正丁醇稀釋至刻度，搖勻即得對(duì)照品溶液(0.11 mg/ml)。

2.3 供試品溶液的配制 精密秤取紅花龍膠囊內(nèi)容物5 g(相當(dāng)于10粒量)置100 ml索氏提取器中，加無(wú)水乙醇60 ml，回流提取16 h，回收乙醇，蒸干，加蒸餾水10 ml微溫溶解。濾入分液漏斗中，以10 ml微溫蒸餾水分次洗滌儀器和殘?jiān)Ｓ盟柡偷恼〈济看?0 ml洗滌，共5次提取，合并提取液，回收提取液。定量轉(zhuǎn)入10 ml容量瓶中，以水飽和的正丁醇稀釋至刻度作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 分別吸取對(duì)照品溶液6，9，12，15和20 μl，注入高效液相色譜儀測(cè)定，將所測(cè)得的蛻皮甾酮峰面積與進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行回歸，得方程У=147696.4X-16935.8，r=0.9997(n=5)，結(jié)果表明蛻皮甾酮進(jìn)樣量在0.66～2.2 μg線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取蛻皮甾酮對(duì)照品溶液(0.11 mg/ml)5 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得蛻皮甾酮峰面積平均值為2378915，RSD 1.5%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.6 重線性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品5份，分別制備5份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定蛻皮甾酮含量，5份平均值為每粒0.92 mg，RSD 2.9%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試品溶液5 μl，分別于0，2，4，8 和 12 h 進(jìn)樣測(cè)定，其峰面積均值為 1569645，RSD 1.5%，結(jié)果表明供試品溶液中蛻皮甾酮至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。2.8 回收率試驗(yàn) 精密秤取已知含量的紅花龍膠囊6份，分別精密加入一定的蛻皮甾酮對(duì)照品，按樣品測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 紅花龍膠囊中蛻皮甾酮加樣回收率測(cè)定(n=6)

2.9 樣品測(cè)定 取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5 μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算3批樣品結(jié)果分別為每粒 0.89 mg，1.02 mg，1.13 mg。

3 討論

3.1 牛膝在紅花龍膠囊組成中所占份額是比較小的量(平均0.92 mg/粒)，以此微量的蛻皮甾酮檢測(cè)作為產(chǎn)品質(zhì)量的控制標(biāo)準(zhǔn)更有利于監(jiān)控紅花龍膠囊的質(zhì)量。

3.2 在制備供試品溶液時(shí)由于耗時(shí)過(guò)長(zhǎng)(16 h)，因此，必須控制好水浴溫度和索氏提取器的密閉性，以防止意外事故的發(fā)生。

3.3 紅花龍膠囊(紅花、地龍、附子、牛膝、五加皮、黃芪、巴戟天、甘草、白花蛇、羌活、獨(dú)活、川芎等十多味中草藥組成)治療AS獲得了較好的療效?，F(xiàn)代藥理研究表明:黃芪、巴戟天、五加皮等增強(qiáng)免疫作用［1］，紅花、牛膝、白花蛇等有鎮(zhèn)痛作用［2、3、4］。紅花龍膠囊具有:益氣補(bǔ)腎、活血通絡(luò)、溫經(jīng)止痛的功效。

［1］喬智勝.巴戟天對(duì)小鼠胸腺萎縮的影響.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1991，11(7):415.

［2］劉愛(ài)靜.五加皮提取物對(duì)小鼠血清抗體的研究.中成藥研究，1985，7(4):41.

［3］黃正良.紅花黃色素的鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜研究.中草藥，1984，15(8):34..

［4］史玉芬.牛膝注射液對(duì)巴豆油引起的小鼠耳腫的抑制作用.中國(guó)中藥雜志，1988，13(7):44.