高效液相色譜法測定香連片中鹽酸小檗堿含量

黃玲 王明霞

香連片［1］是由《中國藥典》(2005年版)一部收載的傳統(tǒng)中成藥香連丸經(jīng)改變劑型而得。組方由中藥黃連，木香組成。具有清熱燥濕，行氣止痛功效。用于濕熱痢疾，里急后重，腹痛泄瀉;菌痢，腸炎。中國藥典2005版對香連片中鹽酸小檗堿的含量測定采用薄層掃描法。為改進(jìn)制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，筆者建立了高效液相色譜法測定香連片中鹽酸小檗堿含量方法。利用超聲波提取法提取供試樣品，優(yōu)選提取時間，本方法操作簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于香連片的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥Agilent 1200型高效液相色譜儀;CP225D型電子分析天平;KQ-400DB超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);鹽酸小檗堿對照品(購于中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純，水為重蒸餾水;香連片(湖北某制藥有限公司生產(chǎn)，批號:080318、080514、080822);其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［2］固定相為十八烷基鍵合硅膠，色譜柱:ODS(250 mm ×4．6 mm，5μm);流動相:每100 ml加十二烷基磺酸鈉0.1 g的乙腈-0.1%磷酸溶液(49:51);，檢測波長:265nm;柱溫:室溫;流速:1 ml/min;進(jìn)樣量:10 μl;理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)應(yīng)不低于4000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取在100℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.65 mg的溶液，即得。

2.3 樣品供試液的制備［3］取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于鹽酸小檗堿60 mg)，置具塞錐形瓶中，加鹽酸-甲醇(1:100)100 ml，密塞，精密稱定重量，超聲處理20 min、30 min、40 min，放冷，精密稱定，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，精密量取濾液5.0 ml置50 ml量瓶中．用甲醇稀釋至刻度，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得.比較三次不同時間的回收率，20 min＜30 min=40 min，樣品供試液的制備以超聲處理30 min為宜。

2.4 線性關(guān)系考察 取2.2項(xiàng)下對照品溶液，分別精密吸取 3、5、10、15、20 μl進(jìn)樣分析，測定峰面積，以峰面積值(A)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程A=481.92C-12.43，r=0.9995。結(jié)果表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在1.95～13.0μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 取同一批樣品供試品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定鹽酸小檗堿的峰面積。結(jié)果RSD=1.92%(n=5)，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份樣品供試品溶液，于0，2，4，6，8，10，12 h時，測定鹽酸小檗堿峰面積。計(jì)算RSD=1.87%(n=7)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取香連片(批號:080514)，按供試品溶液的制備方法制備5份供試品溶液分別測定鹽酸小檗堿含量。結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為22.34 mg/片，RSD=2.13%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)考察 取已知含量的樣品約0.25 g，加入鹽酸小檗堿對照品溶液(c=065 mg/ml)9 ml，按供試品溶液制備操作，進(jìn)樣測定含量，計(jì)算回收率，平均回收率(%)=98.84，RSD(%)=1.47，測定結(jié)果見表1。結(jié)果表明:本方法回收率良好。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測定 取 3批(分別為 080318、080514、080822批次)樣品，分別按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣10 μl，按上述色譜條件測定，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。

表2 不同批號中鹽酸小檗堿含量測定結(jié)果(n=5)

3 討論

近年來采用超聲波作為一種新技術(shù)在提取中草藥有效成分方面，應(yīng)用已日趨廣泛。超聲波是指振動頻率大于20KHZ，在自然環(huán)境中無法聽到和感受到的一種彈性機(jī)械振動波。它具有空化效應(yīng)，熱效應(yīng)，機(jī)械攪拌，強(qiáng)化擴(kuò)散，乳化，凝聚，機(jī)械粉碎等作用。超聲波提取法的原理是利用其空化效應(yīng)和強(qiáng)化擴(kuò)散所產(chǎn)生的彈性波，給媒質(zhì)質(zhì)點(diǎn)以很大的速度和加速度，將植物體快速穿透，使溶劑能和植物中的有效成分充分接觸，有利于有效成分向提取溶劑轉(zhuǎn)移，提高提取效率，該方法操作簡單，副產(chǎn)品較少。

本試驗(yàn)采用超聲波提取供試樣品，比較了超聲20、30、40 min不同時間鹽酸小檗堿的提取率，結(jié)果30 min提取的得率與40 min的相同，因此確定提取時間為30 min。由于鹽酸小檗堿屬堿性較強(qiáng)的季胺型類生物堿，用普通流動相，色譜圖會產(chǎn)生嚴(yán)重拖尾。本文采用離子對色譜條件，并能較好地解決色譜峰拖尾現(xiàn)象。

［1］國家藥典委員會．中國藥典2005年版一部．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:522．

［2］張芳．高效液相色譜法測定黃柏八味膠囊中鹽酸小檗堿含量．中國藥業(yè)，2008，17(17):28．

［3］吳建龍，簡炎林．高效液相色譜法測定香連片中小檗堿的含量．廣東藥學(xué)，2004，14(4):14．