對絡氣郁滯(束縛)型動脈粥樣硬化模型的綜合評價＊

何穗智 吳偉康 卓潛潛 劉素芳 歐順云鄧卓 曾百樂 淦楚明 吳以嶺

對絡氣郁滯(束縛)型動脈粥樣硬化模型的綜合評價＊

何穗智1吳偉康2△卓潛潛3劉素芳1歐順云1鄧卓1曾百樂1淦楚明1吳以嶺4

目的對9組絡氣郁滯(束縛)型動脈粥樣硬化模型(正常組、動脈粥樣硬化組、單純束縛組、束縛加動脈粥樣硬化組、辛伐他汀組、通心絡大劑量組、通心絡小劑量組、薤白四味組、薤白組)進行療效綜合評價。方法分別應用TOPSIS法、灰色關聯(lián)分析法、密切值法、優(yōu)序法對一氧化氮、內皮素等20項指標作綜合評價，并對評價排序結果采用KENDALL－W協(xié)和系數(shù)法進行一致性檢驗。結果TOPSIS法、灰色關聯(lián)分析法、密切值法和優(yōu)序法的評價結果具有一致性，從優(yōu)到劣排序:正常組＞通心絡大劑量組＞動脈粥樣硬化組＞通心絡小劑量組＞辛伐他汀組＞薤白四味組＞薤白組 ＞單純束縛組＞束縛加動脈粥樣硬化組。結論通心絡對束縛加動脈粥樣硬化Wistar雄性大鼠的療效優(yōu)于辛伐他汀、薤白四味、薤白。

動脈粥樣硬化 通心絡 辛伐他汀 綜合評價

1中山大學公共衛(wèi)生學院(廣州510080)

2中山大學中西醫(yī)結合研究所(廣州510080)

3廣東省佛山市南海區(qū)九江醫(yī)院(佛山528000)

4河北醫(yī)科大學醫(yī)藥研究院(石家莊050017)

＊國家重點基礎研究發(fā)展計劃(國家973計劃)項目(No.2005CB523305)

△通信作者

動脈粥樣硬化(AS)隨著生活水平提高和飲食習慣的改變，也成為我國主要死亡原因[1]。AS是一種累及全身動脈血管，特別是彈力型動脈的非炎癥性、退行性和增生性病變，對絡氣郁滯動脈粥樣硬化的治療尤為困難?，F(xiàn)將有關絡氣郁滯動脈粥樣硬化療效的多項指標作綜合評價并進行一致性檢驗報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級Wistar雄性大鼠，體質量180～200g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證編號:SCXK(京)2007－0001。

1.2 試藥 血清同型半胱氨酸檢測試劑盒，北京九強生物技術有限公司;小鼠α－actin單克隆抗體，美國Santa Cruz公司;Envision免疫組化試劑盒，丹麥Dako公司;膽固醇，北京鼎國生物技術有限公司;膽酸鈉，北京奧博星生物技術有限公司;丙基硫尿嘧啶，上海復星朝暈藥業(yè)有限公司;維生素D3，巴斯夫維生素有限公司;通心絡，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司;辛伐他汀(舒降之)，杭州默沙東制藥有限公司;蛋氨酸，美國Sigma公司。

1.3 造模 (1)大鼠AS模型:參照文獻[2]并加以改進:按70萬U/kg計算大鼠維生素D3灌胃總量，3d內用完，然后蛋氨酸灌胃2周，蛋氨酸灌胃的同時給予高脂飼料(4%膽固醇、1%膽酸鈉、0.5%丙基硫尿嘧啶、10%豬油、84.5%基礎飼料)喂養(yǎng)4周。AS模型評價采用檢測血脂、主動脈HE染色、MASSON染色、α－actin免疫組化、透射電鏡與掃描電鏡等指標評價。(2)絡氣郁滯動物模型:參照文獻[3]，將大鼠放入束縛盒內，調節(jié)前端活動部位至合適的位置，使大鼠不產生強烈反抗的緊張程度，每日6h(9:00－15:00)，連續(xù)6周，正常飼料飲食。(3)復合模型(絡氣郁滯型AS模型):先按70萬U/kg計算大鼠維生素D3灌胃總量，3d內用完，以束縛盒每日束縛6h，連續(xù)6周，同時蛋氨酸灌胃2周，給予高脂飼料喂養(yǎng)4周。

1.4 分組與給藥 108只Wistar大鼠適應性喂養(yǎng)7d后，隨機分為以下9組:(1)正常組;(2)AS組;(3)單純束縛組;(4)束縛加AS組;(5)辛伐他汀組;(6)通心絡大劑量組;(7)通心絡小劑量組;(8)薤白四味組;(9)薤白組。正常組給予標準飼料喂養(yǎng)，各用藥組均于復合模型動物造模第3周灌胃(不計維生素D3灌胃時間)，1次/d，連續(xù)4周。正常組、AS模型組和束縛加AS組于同期灌服等量生理鹽水。通心絡大劑量組以通心絡加生理鹽水配制成0.08g/mL混懸液，按0.82g干粉 (相當于1.2g生藥)/(kg·d)(相當于人臨床用量的16倍)灌胃。通心絡小劑量組以通心絡加生理鹽水配制成0.04g/mL混懸液，按0.41g干粉(相當于0.6g生藥)/(kg·d)(相當于人臨床用量的8倍)灌胃。薤白四味組以生理鹽水配制成含人參1.03g干粉 (相當于0.12g生藥)/mL、薤白0.05g干粉 (相當于0.12g生藥)/mL、水蛭0.64(ATU)/mL、蜈蚣 1.21g干粉(相當于 0.067g生藥)/mL 的混懸液，按人參 10.2864g干粉(相當于 1.2g 生藥)/(kg·d)、薤白 0.504g干粉(1.2g生藥)/(kg·d)、蜈蚣 12.06g干粉(相當于0.67g 生藥)/(kg·d)、水蛭 6.4ATU/(kg·d)。薤白組按 0.504g干粉(1.2g生藥)/(kg·d)給藥。辛伐他汀組以辛伐他汀片加生理鹽水配制成0.5mg/mL混懸液，按5mg/(kg·d)(相當于人臨床用量的8倍)灌胃。

1.4 指標檢測 實驗結束后麻醉大鼠經頸動脈插管采集血液標本，分離血漿或血清，檢測下列指標。下丘腦－垂體－腎上腺軸指標(HPAA):血漿促腎上腺皮質激素釋放激素(CRH)、血漿促腎上腺皮質激素(ACTH)和血清皮質酮(CORT)。交感腎上腺髓質:血清去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)。腎素－血管緊張素－醛固酮系統(tǒng)(RAAS):血漿腎素活性(PRA)、醛固酮(ALD)、血漿血管生成素Ⅱ(AngⅡ)。細胞因子:血清白介素－6(IL－6)(放射免疫分析法)、干擾素γ(IFN－γ)。內皮功能指標:一氧化氮(NO)、內皮素(ET)

1.5 統(tǒng)計學處理 分別應用TOPSIS法、灰色關聯(lián)分析法、密切值法、優(yōu)序法對NO、ET等指標進行綜合評價，再對評價排序結果采用KENDALL－W協(xié)和系數(shù)法進行一致性檢驗。

2 結果

2.1 原始數(shù)據(jù)處理 將20個評價指司法按9個評價對象分組，均服從正態(tài)分布，故采用算術均數(shù)作為原始數(shù)據(jù)進行分析。見表 1，表 2。

2.2 對評價排序結果采用KENDALL－W協(xié)和系數(shù)法進行一致性檢驗 該檢驗通過協(xié)和系數(shù)W顯示出樣本數(shù)據(jù)中的實際符合與最大可能符合之間的分歧程度，計算得W=0.96875，統(tǒng)計量 χ2=31.0000 ＞ 21.95，P ＜ 0.005，有統(tǒng)計學意義，可認為這4種方法的評價結果具有一致性。將每一種評價方法所得的各樣本評分值進行標準化，并匯總各評價方法的評分值重新排序即得最后評價結果。從優(yōu)到劣排序:正常組＞通心絡大劑量組＞AS組＞通心絡小劑量組＞辛伐他汀組＞薤白四味組＞薤白組＞單純束縛組＞束縛加AS組。見表3。

表1 原始數(shù)據(jù)

表2 原始數(shù)據(jù)

表3 各組數(shù)據(jù)一致性檢驗結果

3 討論

劇烈或慢性心理和情緒應激是AS和血栓性疾病的重要致病因子。血管內皮是血管內源性NO產生的主要部位。給予一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)抑制劑或敲除NOS基因的小鼠可出現(xiàn)明顯的高血壓[4]，而束縛應激可降低NO供體引起的舒血管反應。血小板產生的NO可抑制血小板的活化、黏附和聚集;而束縛應激可導致血小板聚集功能增加[5]。本實驗結果顯示:束縛加AS模型最劣，即使分別采用薤白四味、辛伐他汀、薤白干預，均未恢復到單純AS模型組的水平。

采用辛伐他汀、薤白、通心絡治療AS已有文獻報道[6－8]，但是以往的研究僅限于分別作單一指標或單一的方法的比較。本文提出綜合多種方法對藥物試驗進行系統(tǒng)綜合評價，并對評價結果序列作一致性檢驗，以盡可能減少單一方法評價產生的片面性，充分、準確地利用各種方法所揭示的評價信息，使評價結果更為客觀、可靠和符合實際。本實驗說明，對束縛加AS模型大鼠進行藥物治療后，通心絡組最接近正常組，提示通心絡對束縛加動脈粥樣硬化模型大鼠的療效優(yōu)于辛伐他汀、薤白四味、薤白。

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Synthetic Evaluation of the Animal Model of Atherosclerotic Origin with the Syndrome of Stagnancy of Collateral-Qi in a Depressed Condition(Astriction)

HE Sui-zhi1， WU Wei-kang2， ZHUO Qian-qian3， et al
1 School of Public Health，SUN Yat-sen University(Guangzhou 510080)
2 Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，SUN Yat-sen University(Guangzhou 510080)
3 Jiujiang Hospital of Nanhai District， Foshan City， Guangdong Province(Foshan 528000)

Objective:To evaluate synthetically effects of animal models in nine groups including the normal group， the AS group， the pure astriction group， the AS plus astriction group， the simvastatin group， the large dose Tongxinluo group，the small dose Tongxinluo group，the Xiebaisiwei Decoction group and the Xiebai group.MethodsThere were 20 in dices to be evaluated such as the TOPSIS method，the gray relative analysis method，the osculating method， the order method.These ranking evaluationResultswere used to be consistency test by KENDALL－W coefficient of concordance.ResultsTheResultswere consistent from the TOPSIS method， the gray relative analysis method， the osculating method and the order method.The order was the normal group ＞ the large dose Tongxinluo group＞the AS group＞the small dose Tongxinluo group＞the simvastatin group＞the Xiebaisiwei Decoction group＞the Xiebai group＞the pure astriction group＞the simvastatin group＞the Xiebaisiwei Decoction group＞the Xiebai group＞ the pure astriction group＞ the AS plus astriction group.ConclusionThese effects of the Tongxinluo group on Wistar male rats with AS plus astriction is better than that of the simvastatin，the Xiebaisiwei Decoction and Xibai.

Atherosclerosis;Tongxinluo;Simvastatin;Synthetic evaluation

R543.5

A

1004－745X(2010)09－1548－03

2010－05－28)