ROC曲線評(píng)價(jià)甲胎蛋白異質(zhì)體對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值

曹 立 ，孫華寶，敖琴芳 ，梁 青 ，葉德強(qiáng) ，呂定英，羅 芳

(南昌市第九醫(yī)院，1、檢驗(yàn)科；2、質(zhì)控科；3、感染科，江西 南昌 330002)

原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)為全球第5大常見(jiàn)惡性腫瘤，我國(guó)肝癌的死亡居惡性腫瘤死亡率的第2位，占全世界肝癌死亡人數(shù)的45%。PHC病程發(fā)展快、預(yù)后差、死亡率高，及時(shí)準(zhǔn)確的診斷和治療是提高生存率的關(guān)鍵，而早期PHC多無(wú)明顯的臨床癥狀和體征，且病灶直徑小于5cm，一般不易被發(fā)現(xiàn)。甲胎蛋白(AFP)是一種具有特征性的寡糖鏈蛋白，由于其癌胚性作為原發(fā)性肝癌(PHC)的輔助診斷及療效觀察指標(biāo)應(yīng)用多年，但臨床上仍有30～40%的PHC患者血清AFP含量在正常范圍內(nèi)[1]。根據(jù)糖鏈類(lèi)型不同的AFP與植物凝集素親和性不同的特性，可將其分為幾種不同類(lèi)型的AFP異質(zhì)體[2]。我們對(duì)150例肝病患者和25例健康體檢者進(jìn)行了小扁豆凝集素親和性甲胎蛋白異質(zhì)體和AFP等8種腫瘤腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)，采用ROC曲線以評(píng)價(jià)其對(duì)PHC的診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 150例各型肝病患者均為2007年5月至2009年5月我院住院患者，臨床診斷均符合2000年第十次全國(guó)病毒性肝炎與肝病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的“病毒性肝炎防治方案”的標(biāo)準(zhǔn)[3]，男122例，女28例，年齡25～70歲。其中急性肝炎(AH)25例，慢性肝炎 (CHB)25例，肝硬化 (LC)25例，原發(fā)性肝癌(PHC)50例，重型肝炎(SH)25例，原發(fā)性肝癌患者均經(jīng)病理學(xué)或影像學(xué)檢查證實(shí)。正常對(duì)照組(NC)25例，男17例，女8例，年齡20～66歲，均為同期我院體檢正常并排除其他慢性疾病的健康者作為對(duì)照。

1.2 試劑 AFP-L3試劑由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，AFP、CEA、SF、CA199 試劑盒為羅氏公司產(chǎn)品，GGT、ALP、AFU的試劑盒為維坊三維公司產(chǎn)品。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 AFP、CEA、SF、CA199 檢測(cè)采用電化學(xué)發(fā)光免疫法，操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)，使用儀器為羅氏E2010電化學(xué)發(fā)光儀。

1.3.2 AFP-L3的分離采用微量離心柱法，離心柱內(nèi)裝有耦聯(lián)了小扁豆凝集素(LCA)的瓊脂糖，可以特異結(jié)合AFP-L3，當(dāng)血清流過(guò)離心柱時(shí)，與LCA結(jié)合力強(qiáng)的甲胎蛋白異質(zhì)體就結(jié)合于柱中，經(jīng)過(guò)清洗洗去不結(jié)合的甲胎蛋白，再經(jīng)過(guò)離心洗脫后獲得AFP-L3，其后檢測(cè)方法同AFP。

1.3.3 GGT、ALP、AFU檢測(cè)采用酶速率法，操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)，使用儀器為OLYMPUS AU640全自動(dòng)生化分析儀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 16.0軟件進(jìn)行ROC分析及單因素方差分析，組間均數(shù)兩兩比較用S-N-K法；率的比較用χ2檢驗(yàn)；用四格表法計(jì)算靈敏度(Se)、特異度(Sp)、Youden 指數(shù)、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(PV+)、陰性預(yù)測(cè)值(PV-)、準(zhǔn)確度(AC)特征參數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 肝病組與正常對(duì)照組8種腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表1。組間均數(shù)兩兩比較結(jié)果是AFP、AFPL3、CEA、AFU、GGT 指標(biāo)，PHC 組與其它各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CA199指標(biāo)，PHC組、SH組與NC組，PHC組與AH組、CHB組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SF指標(biāo)，NC 組與 PHC、AH、CHB、LC、SH 組，PHC 組與CHB組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ALP指標(biāo)，PHC組與其它各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，AH組與NC組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 肝病組與正常對(duì)照組8種腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果

2.2 8種腫瘤標(biāo)志物ROC分析結(jié)果及特征參數(shù)中，AFP-L3 的 AUCROC最大，Youden 指數(shù)、PV-、AC最高；SF 的 AUCROC最小，Youden 指數(shù)、PV+最低；Se指標(biāo)中GGT的最高，CEA最低，Sp指標(biāo)中ALP-L3最高，CA199最低，AC指標(biāo)中AFP-L3最高，AFU最低，見(jiàn)表2。

表2 8種腫瘤標(biāo)志物ROC分析結(jié)果及特征參數(shù)

2.3 PHC組8種腫瘤標(biāo)志物的ROC曲線，見(jiàn)圖1。

圖1 PHC組8種腫瘤標(biāo)志物的ROC曲線

2.4 PHC組不同AFP濃度患者AFP-L3的檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表3。

3 討論

受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)是一種以信息檢出理論為基礎(chǔ)，廣泛應(yīng)用的數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法，ROC曲線描述了診斷試驗(yàn)區(qū)分患者與非患者的固有能力，不受患病率的影響，綜合了靈敏度、特異度兩個(gè)指標(biāo)，而且考慮了所有可能的診斷界值的影響，因而能更客觀全面地評(píng)價(jià)診斷試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，可用于診斷臨界點(diǎn)的正確選擇，對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室工作尤為重要[4]。本研究結(jié)果顯示，用于鑒別診斷PHC腫瘤標(biāo)志物中，AUC≥O.7的指標(biāo)有AFP、AFP-L3、CA199、CEA、AFU、GGT、ALP，表明其有一定的準(zhǔn)確性，可作為預(yù)測(cè)PHC的單項(xiàng)指標(biāo)[5-7]。

表3 不同AFP濃度AFP-L3測(cè)定結(jié)果

3.1 AFP-L3在8種原發(fā)性肝癌標(biāo)志物中診斷價(jià)值

1970年P(guān)urves[8]等首次應(yīng)用淀粉凝膠電泳分離人AFP異質(zhì)體，因AFP分子存在異質(zhì)性，尤其是糖鏈的差異較大，導(dǎo)致一些PHC患者AFP檢測(cè)陰性或持續(xù)低濃度陽(yáng)性。在本研究中PHC組AFP-L3百分比均數(shù)為 (18.2±10.1)顯著高于非PHC肝病組(6.7±3.2)(P=0.00)，也顯著高于慢性肝炎組(5.8±2.2)(P=0.00)與肝硬化組(8.2±3.6)(P=0.00)；慢性肝炎組、肝硬化組及PHC組AFP-L3的陽(yáng)性率分別為0%、12%、76%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，從表 2可見(jiàn)，AFP-L3的 AUCROC最大， 其 Sp、Youden指數(shù)、PV-、AC也最大，AFP-L3檢測(cè)提高了PHC診斷檢出率和正確率，在8種PHC標(biāo)志物中單項(xiàng)診斷價(jià)值最高。

3.2 AFP-L3在PHC診斷中早期預(yù)警作用

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，AFP-L3陽(yáng)性對(duì)PHC正確預(yù)警率達(dá)94%[9]，而且與影像學(xué)相比較,AFP-L3在早期PHC的診斷可提前3～28個(gè)月[10]。本研究中，在臨床診斷、B超診斷均為陰性，AFP-L3為陽(yáng)性的13例患者中，3～18個(gè)月后11例被診斷為肝癌。可見(jiàn)，在影像學(xué)檢查尚未發(fā)現(xiàn)肝癌特征性占位性病變時(shí)，對(duì)AFP低濃度陽(yáng)性病例進(jìn)行AFP-L3檢測(cè)可以早期預(yù)警肝癌發(fā)生。

3.3 AFP-L3在低濃度AFP陽(yáng)性良、惡性肝病的鑒別作用

AFP、AFP-L3對(duì)PHC的敏感性分別為84%和76%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.0，P=0.317)，由表 3可見(jiàn)，AFP＜400ng/ml時(shí)，AFP-L3 陽(yáng)性率為 30%，AFP＞400ng/ml時(shí)，AFP-L3陽(yáng)性率為100%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=31.52，P=0.00)，而不同AFP濃度患者的AFP-L3濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)，AFPL3與AFP濃度無(wú)相關(guān)性。因此,AFP-L3更適用于AFP低濃度陽(yáng)性良、惡性肝病的鑒別診斷，與鄭穎[11]等報(bào)道一致，適合向臨床廣泛推廣。

我國(guó)是肝炎病毒感染較重的國(guó)家之一，尤其HBV、HCV感染與PHC的發(fā)生關(guān)系密切。在高危人群中，早期監(jiān)測(cè)和發(fā)現(xiàn)PHC，可贏得手術(shù)治療時(shí)間，提高生存率。但因PHC細(xì)胞生物學(xué)特性具有復(fù)雜性及多態(tài)性，不同時(shí)期的癌細(xì)胞在生長(zhǎng)速率、表面受體、免疫特性、浸潤(rùn)性、轉(zhuǎn)移性、對(duì)藥物毒性方面均可能不同。臨床上現(xiàn)有的PHC標(biāo)志物眾多，尚無(wú)單一標(biāo)志物能夠診斷所有PHC，隨著生物科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，正確合理使用血清標(biāo)志物，有很大臨床價(jià)值，每一種血清腫瘤標(biāo)志物在診斷價(jià)值上都有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，也有它的局限性。因此，聯(lián)合檢測(cè)幾種血清PHC血清標(biāo)志物可以?xún)?yōu)勢(shì)互補(bǔ)，提高診斷效率，這也是近年原發(fā)性肝癌實(shí)驗(yàn)診斷的發(fā)展趨勢(shì)。

[1]湯釗猷.現(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].第2版,上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,2001:553.

[2]Philip JJ,Stephen H,Phil M,et al.Germ cell tumors express a specific alpha-fetoprotein variant detectable by isoelectric focusing[J].Cancer,1995,75(7):1663-1668.

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì),肝病學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案[J].中華傳染病雜志,2001,19(1):56-62.

[4]劉萃紅.應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)5項(xiàng)生化指標(biāo)對(duì)肝炎的診斷價(jià)值[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2008,43(6):1236-1238.

[5]王永忠,羅立波,吳國(guó)祥,等.微量離心柱法分離檢測(cè)甲胎蛋白異質(zhì)體及其臨床意義[J].中華實(shí)驗(yàn)和病毒學(xué)雜志,2007,21(2):135-137.

[6]商志遠(yuǎn),盧永剛,張 潔,等.多腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的應(yīng)用價(jià)值分析[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,29(4):157-159.

[7]洪錫田,張瑞麗,王 丹.血清AFP、CA19-9、SF檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用[J].臨床肝膽病雜志,2007,23(1):57.

[8]Domingue GJ.Cell wall-deficient bacteria[M].Massachusetts:Addison-Wesley,1982,121.

[9]Tu ZX,Yin ZF,Wu MC.Prospective study on the diagnosis of hepatocellular carcinoma by using alpha fetoprotein reactive to Lentil lectin[J].Chin Med Sci J,1992,7(4):191-195.

[10]殷正豐.甲胎蛋白異質(zhì)體作為肝癌標(biāo)志物的臨床應(yīng)用[J].實(shí)用腫瘤雜志,2004,19(1):1-4.

[11]鄭 穎,單曉潔,任茗睿,等.微量離心柱法檢測(cè)甲胎蛋白異質(zhì)體對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的意義[J].浙汀實(shí)用醫(yī)學(xué),2009,14(1):3-4.