新生兒血培養(yǎng)出凝固酶陰性葡萄球菌的分析

李天嬌,鐘海英,郭紅荔,黃 濤

(海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,海南?？?570311)

新生兒血培養(yǎng)出凝固酶陰性葡萄球菌的分析

李天嬌,鐘海英,郭紅荔,黃 濤

(海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,海南?？?570311)

新生兒血培養(yǎng)中分離出凝固酶陰性的葡萄球菌(CNS)一直都占居新生兒血培養(yǎng)分離菌的第一位,但由于CNS是人皮膚正常菌群,在臨床新生兒采血過(guò)程中由于操作時(shí)間延長(zhǎng)或是消毒不充分以及采用使用各種侵入性醫(yī)療器械時(shí)都會(huì)造成污染,因此導(dǎo)致血培養(yǎng)中分離出的CNS常見是污染菌,但又由于CNS可以產(chǎn)生毒力因子而具有嚴(yán)重的致病性,并且隨著CNS耐藥性的不斷增加,對(duì)于抵抗力弱的新生兒群體,它的致病性更顯突出。因此,在臨床工作中新生兒血培養(yǎng)中分離出CNS是污染菌還是病原菌一直困擾著很多臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室工作者;根據(jù)菌血癥病原菌的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)包括血培養(yǎng)在入院后48小時(shí)內(nèi)陽(yáng)性和多次血培養(yǎng)為同一細(xì)菌判斷為病原菌,3天以上陽(yáng)性的CNS,或培養(yǎng)出多種皮膚寄居菌,或血培養(yǎng)雖多次呈陽(yáng)性,但屬不同種的CNS或其他細(xì)菌等提示為污染[1,2]。我們綜合文獻(xiàn)推薦的標(biāo)準(zhǔn),制定出一套實(shí)驗(yàn)室評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),并對(duì)血培養(yǎng)分離出CNS以評(píng)估為病原菌或是污染菌;

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選擇我2007年1月到2009年12月我實(shí)驗(yàn)室新生兒科血培養(yǎng)樣品1 789份,并對(duì)分離出113株CNS作為研究對(duì)象。

1.2 采血方法 在患兒住院抗感染藥物使用前或非感染性疾病患兒在住院過(guò)程中懷疑感染時(shí)進(jìn)行血培養(yǎng),對(duì)患兒進(jìn)行局部消毒后在無(wú)菌操作下經(jīng)橈動(dòng)脈或股靜脈取血2-5 ml加入Bact/Alert-120儀器配套的需氧血瓶中半小時(shí)內(nèi)送檢實(shí)驗(yàn)室。

1.3 儀器 Bact/Alert-120全自動(dòng)光電比色微生物檢測(cè)儀。其特點(diǎn)為檢測(cè)微生物濃度所致的酸堿度變化,該變化反映在瓶底的感光板上,進(jìn)而被瓶外的光束捕獲,通過(guò)電腦的連續(xù)監(jiān)測(cè),分析判定,隨時(shí)報(bào)警。

1.4 鑒定 實(shí)驗(yàn)采用法國(guó)梅里埃(VETIK-32)進(jìn)行鑒定。對(duì)陽(yáng)性培養(yǎng)瓶及時(shí)取樣作革蘭染色涂片及分離培養(yǎng)。分離培養(yǎng)后對(duì)鏡檢呈葡萄狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌的菌落進(jìn)行血漿凝固酶陰性初步鑒定,繼之采用法國(guó)梅里埃VETIK-32系統(tǒng)作進(jìn)一步鑒定。

1.5 質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923,購(gòu)自“衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心”。

1.6 血培養(yǎng)分離出CNS如何區(qū)分病原菌或是污染菌

1.6.1 血培養(yǎng)分離出CNS實(shí)驗(yàn)室評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)(圖1)

1.6.2 菌血癥臨床評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[1,2]

菌血癥臨床標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)符合以下至少一項(xiàng)條件:初次血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本采集的當(dāng)日體溫≥38℃,膿毒性休,白細(xì)胞升高或核左移,具有彌散性血管內(nèi)凝血病變;具有由皮膚菌群引起感染的危險(xiǎn)因素如長(zhǎng)期靜脈插管或異體移植物;抗生素(包括萬(wàn)古霉素或菌株敏感的抗生素)治療有效,或拔除導(dǎo)管或異物,感染得到控制。實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)符合以下至少一項(xiàng)條件:從其他感染部位或?qū)Ч芗舛朔蛛x到相同的病原菌,且耐藥譜也相同;多次血培養(yǎng)為同一種細(xì)菌。

污染菌的臨床標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合以下至少一項(xiàng)條件:無(wú)明顯發(fā)熱及危險(xiǎn)因素(如免疫功能低下或侵襲性操作);雖有上述危險(xiǎn)因素但隨后多次血培養(yǎng)證明為其他病原菌;使用敏感抗生素治療無(wú)效;發(fā)熱可由其他原因解釋,且無(wú)明顯的感染征象。同時(shí)還應(yīng)當(dāng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn),如長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后陽(yáng)性;連續(xù)多次多日培養(yǎng),僅1次為CNS;1次血培養(yǎng)分離出2種以上的皮膚菌群;收集CNS陽(yáng)性標(biāo)本的72 h內(nèi)又分離出另1種細(xì)菌或真菌,卻沒有再分離到CNS。

1.6.3 結(jié)合臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù),最終評(píng)估出分離出的CNS是病原菌還是污染菌。

1.7 統(tǒng)計(jì)處理 使用Bact/Alert分析軟件對(duì)每例的血培養(yǎng)次數(shù)、陽(yáng)性次數(shù)、檢出時(shí)間等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 2007年1月到2009年12月共收到新生兒科血培養(yǎng)1 789份血標(biāo)本,分離出143例菌株,其中G-桿菌14例占9.8%;G+葡萄球菌120例占83.9%,其中CNS 113例占79.0%(污染菌 89占78.8%,病原菌24占21.2%),金黃色葡萄球菌7例占4.9%;真菌5例占3.5%;其它細(xì)菌 4例占2.8%。

2.2 實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù) Bact/Alert分析軟件分析血培養(yǎng)分離出CNS 113例;24小時(shí)內(nèi)儀器報(bào)警為22例(占19.5%)25-48小時(shí)報(bào)警24例(占21.2%),49-168小時(shí)報(bào)警分離出67例(占59.3%),經(jīng)分析24 h內(nèi)報(bào)警有8例(36.3%)為污染菌,25-48 h報(bào)警有14例(58.3%)為污染菌,48 h以后全為污染菌。見圖2;

圖1 血培養(yǎng)分離出CNS實(shí)驗(yàn)室評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

圖2 血培養(yǎng)中病原菌及污染菌的檢出時(shí)間比較

2.3 根據(jù)CNS實(shí)驗(yàn)室評(píng)估113例CNS中24株為病原菌占分離 CNS的 21.2%,血樣本污染 89例78.8%,與文獻(xiàn)[3,4,5]70-90%之間報(bào)導(dǎo)相符,除去被污染分離出的CNS,新生兒科致病性CNS占總菌血癥病原菌44.4%(24/54)為感染病原菌的首位。

3 討論

近年來(lái)隨著抗生素的廣泛應(yīng)用,新生兒病原菌種類也發(fā)生了變遷,國(guó)內(nèi)外資料顯示新生兒CNS感染呈增多趨勢(shì),2003年西班牙學(xué)者進(jìn)行一項(xiàng)對(duì)新生兒病房感染的前瞻性研究發(fā)現(xiàn),革蘭陽(yáng)性菌占首位(76.4%),CNS占其中的72.5%,居新生兒細(xì)菌感染的第一位[6];汪復(fù)等人研究的新生兒CNS感染也居新生兒細(xì)菌感染的首位[7],本組數(shù)據(jù)新生兒科血培養(yǎng)除去分離出的污染菌,CNS引起的敗血癥為24例,占總的血培養(yǎng)分離出的病原菌的44.4%(24/54)位于新生兒菌血癥的第1位,與文獻(xiàn)相符。

新生兒敗血癥是威脅新生兒生命的危重疾病、尤其在低體重兒,早產(chǎn)兒較易感染,是新生兒死亡的重要疾病,而血培養(yǎng)分離出病原菌是新生兒敗血癥診斷和治療的主要依據(jù)。但在血培養(yǎng)中卻經(jīng)常因各種原因造成血樣本的污染,因此在血培養(yǎng)中如果分離出CNS,那么如何辨別是病原菌還是污染菌尤其重要,需結(jié)合臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室信息來(lái)綜合分析,如果僅依靠實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)來(lái)判定,就出現(xiàn)誤報(bào)的現(xiàn)象。例如,實(shí)驗(yàn)室確定菌血癥的標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性報(bào)警時(shí)間在48 h以內(nèi)和多個(gè)血培養(yǎng)瓶陽(yáng)性,而本研究結(jié)果顯示雖然病原菌陽(yáng)性報(bào)警時(shí)間短于污染菌,但48 h以內(nèi)血培養(yǎng)CNS仍有36.3-58.3%為污染菌,因此CNS菌血癥應(yīng)當(dāng)依據(jù)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)和微生物學(xué)三方面的資料來(lái)判定。

總之,CNS在新生兒菌血癥中感染率高,而在血培養(yǎng)時(shí)血樣本污染率也高,因此應(yīng)減少操作時(shí)造成血培養(yǎng)瓶污染,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提高判斷血培養(yǎng)中分離出的CNS是病原菌還是污染菌的能力,這對(duì)于給臨床提供準(zhǔn)確有意義的血培養(yǎng)報(bào)告單有著至關(guān)重要的意義。

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1007-4287(2010)09-1451-03

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2010-02-14)