MIF和VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及臨床意義

劉晶華,冷維春,劉俊寶*,王 微

(1.上海市公共衛(wèi)生臨床中心,上海 201508;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院婦產(chǎn)科;3.吉林大學(xué)第四醫(yī)院)

MIF和VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及臨床意義

劉晶華1,冷維春2,劉俊寶2*,王 微3

(1.上海市公共衛(wèi)生臨床中心,上海 201508;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院婦產(chǎn)科;3.吉林大學(xué)第四醫(yī)院)

目的探討巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在子宮內(nèi)膜異位癥(Ems)組織中的表達(dá)情況及其兩者的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)50例EMs組織中的MIF和VEGF蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行研究。結(jié)果MIF在Ems中異位內(nèi)膜的表達(dá)明顯高于在位內(nèi)膜(P＜0.05),在位內(nèi)膜中的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照內(nèi)膜(P＜0.05);VEGF在Ems中異位內(nèi)膜的表達(dá)同樣明顯高于在位內(nèi)膜(P＜0.05),在位內(nèi)膜中的表達(dá)高于正常對(duì)照內(nèi)膜(P＜0.05);MIF和VEGF表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論MIF和VEGF在異位內(nèi)膜中的表達(dá)呈明顯的正相關(guān),提示MIF與VEGF協(xié)同促進(jìn)異位內(nèi)膜的生長(zhǎng)。

Ems;MIF;VEGF

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1405)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)是指具有生長(zhǎng)功能的子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì))出現(xiàn)在子宮腔被覆內(nèi)膜及宮體肌層以外的其他部位[1],屬良性疾病,但具有侵襲、擴(kuò)散等惡性腫瘤的生長(zhǎng)特征。MIF可從多方面促進(jìn)子宮內(nèi)膜在異位組織的生長(zhǎng)。VEGF通過參與異位內(nèi)膜組織的周圍新生血管的形成,對(duì)EMS的發(fā)生、發(fā)展起重要作用。本文利用免疫組織化學(xué)的方法,研究MIF及VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥的異位及在位內(nèi)膜組織及正常內(nèi)膜組織中的表達(dá),探討MIF及VEGF與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生、發(fā)展的作用及兩者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 資料

選取2006年3月-2007年12月期間吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院子宮內(nèi)膜異位癥患者50例,患者年齡23-46歲,平均年齡33.8歲。取典型異位內(nèi)膜組織50例,刮取在位內(nèi)膜40例,另取同期非子宮內(nèi)膜異位癥(并排除其它婦科疾病)的正常人自愿刮宮所取正常子宮內(nèi)膜組織30例作為對(duì)照,患者年齡26-49歲,平均年齡37.5歲。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,4 μ m連續(xù)切片,每一標(biāo)本取3張切片,其中1張做HE染色明確病理診斷,其余兩張行MIF及VEGF免疫組化染色,試劑盒內(nèi)已知陽性片作陽性對(duì)照。所有切片均經(jīng)病理學(xué)專家盲法認(rèn)定。

1.2 方法

采用SP免疫組織化學(xué)方法,DAB顯色,蘇木素復(fù)染細(xì)胞核。MIF(FL-115)為兔抗人多克隆抗體,購自美國Santa Cruz公司,兔抗人多克隆抗體VEGF、SP試劑盒和DAB顯色液均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 結(jié)果判定

MIF免疫組化染色以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為其陽性判定標(biāo)準(zhǔn);VEGF免疫組化染色以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕黃色顆粒為其陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占面積積分之和進(jìn)行判斷。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):不著色為0分,黃色為1分,棕黃色為2分,黃褐色為3分。染色面積評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):無細(xì)胞染色為0分,＜25%為1分,26%-50%為2分,＞50%為3分。兩種評(píng)分相加,0-1分為(-),2分為(+),3-4分為(++),5-6分為(+++)?！?分的定為陰性,＞2分的定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

顯著性檢驗(yàn)采用 χ2檢驗(yàn)。MIF和VEGF的相關(guān)性應(yīng)用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)中Spearman等級(jí)相關(guān)進(jìn)行分析。所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均在SPSS11.5軟件上進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 MIF在正常子宮內(nèi)膜組織及EMs患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜中的表達(dá)情況(見表1)。在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜表達(dá)率均有顯著性差異(P＜0.05)。

表1 MIF在正常子宮內(nèi)膜及EMs在位、異位內(nèi)膜中的表達(dá)

2.2 VGEF在正常子宮內(nèi)膜組織及EMs患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜中的表達(dá)情況(見表2)。異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜表達(dá)率均有顯著性差異(P＜0.05)。

表2 VEGF在正常子宮內(nèi)膜及EMs在位及異位子宮內(nèi)膜中的表達(dá)

2.3 MIF及VEGF在50例EMs異位內(nèi)膜中表達(dá)的關(guān)系。

如表3所示,MIF陽性表達(dá)與VEGF陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.307,P＜0.05),提示兩者具有協(xié)同作用,可能通過某種調(diào)控機(jī)制共同調(diào)控異位內(nèi)膜的生長(zhǎng)。

表3 MIF和VEGF在EMs異位內(nèi)膜中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是Bloom和Bennett等研究遲發(fā)性超敏反應(yīng)時(shí)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)細(xì)胞因子,是可溶性的淋巴因子[2]。參與多種生理生化過程,如:炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖、血管生成以及腫瘤形成等過程。子宮內(nèi)膜的異位生長(zhǎng)必須依賴新生血管提供營養(yǎng),新生血管的形成是內(nèi)膜種植及發(fā)展的必要條件。研究發(fā)現(xiàn),MIF可能通過以下兩種途徑促進(jìn)血管生成:一是直接通過刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖發(fā)揮作用;二是通過聚集巨噬細(xì)胞并分泌各種血管生成因子間接發(fā)揮血管生成作用。Eiji[3]等研究也證實(shí),MIF能刺激內(nèi)皮細(xì)胞形成內(nèi)皮血管。另有研究[4]發(fā)現(xiàn)MIF在早期病變中表達(dá)增多,提示MIF可能在子宮內(nèi)膜異位癥早期血管形成中起重要作用。單志新[5]等通過分子克隆,定量PCR的方法在大腸桿菌中表達(dá)出MIF,MIF能特異性誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞中血管生成相關(guān)基因(VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF-a、PDGF-a等)的表達(dá),參與血管形成。另MIF通過多種途徑促進(jìn)子宮內(nèi)膜組織在異位的種植。MIF通過提高M(jìn)MPs的能力,增強(qiáng)了內(nèi)膜細(xì)胞的侵襲力,使內(nèi)膜細(xì)胞易于植入。Harada[6]等進(jìn)行了EMs在位及異位內(nèi)膜與正常女性子宮內(nèi)膜對(duì)凋亡敏感性的比較實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),EMs患者在位及異位內(nèi)膜對(duì)凋亡的敏感性均明顯下降,異位者較在位者下降更明顯,且無周期性變化。因此,MIF在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展中起作用,其可通過多種機(jī)制參與內(nèi)異癥的發(fā)生發(fā)展。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的促血管生成因子,在體內(nèi)外均有特異性促進(jìn)血管發(fā)生的作用。研究發(fā)現(xiàn)VEGF是一種多功能的血管生成因子,可直接刺激內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng),促使血管生成;也可誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)多種組織蛋白酶,降解細(xì)胞外基質(zhì),從而介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移和浸潤,誘導(dǎo)血管生成;同時(shí)VEGF可以與其受體特異性結(jié)合,通過降解血管內(nèi)皮細(xì)胞的基質(zhì)、削弱血管的屏障作用,致使新生血管基底膜缺損加重,從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位癥的異位種植。血管生成在EMs的發(fā)生發(fā)展中占有重要位置[7],異位內(nèi)膜在盆腔局部的種植與病灶的進(jìn)一步發(fā)展需要新生血管提供營養(yǎng)[8,]Goteri等[9]通過研究得出血管新生(angiogenesis)在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥中發(fā)揮重要作用;Oosterlynack等[10]研究顯示:EMs患者腹腔液中VEGF等一些血管活性物質(zhì)水平增高,使腹壁微血管生成增多,導(dǎo)致盆腔局部對(duì)異位內(nèi)膜種植的接受能力增強(qiáng)。可見血管生成與EMs發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),腹腔局部微環(huán)境內(nèi)新生血管的形成為異位的子宮內(nèi)膜的種植發(fā)展提供了營養(yǎng)和物質(zhì)基礎(chǔ)。

我們的研究發(fā)現(xiàn),MIF與VEGF這兩種因子在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用,間接提示了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展是多因素共同作用的結(jié)果,且兩者在異位內(nèi)膜中的表達(dá)水平呈明顯的正相關(guān)性,提示這兩個(gè)因子可能通過促進(jìn)新生血管形成的途徑協(xié)同促進(jìn)了異位內(nèi)膜的種植和生長(zhǎng),為以后進(jìn)一步治療MES提供了理論基礎(chǔ)。

[1]豐有吉,沈 鏗,等.子宮內(nèi)膜異位癥及子宮腺肌病.婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:357-366.

[2]Sun H W,Bernhagen J,Bueala R,et al.Crystal structure at 2.6 a resolution of human macrophage inhibitory factor[J].Proc Natl Acad Sci USA,1996,93(1):5191.

[3]Eiji H,Takashi O,Dipok K D.Over expression of macrophage migration inhibitory facforinduces angiogenesis and dete-riorates prognosis after radical resection for hepato-cellular carcinoma[J].Cancer,2005,103:588.

[4]Yang Y,Degranpre P,Kharfi A,et al.Identification of macrophagc migration inhibitory factor as a potent endothclial cell growth-promoting agent released by ectopic human endomctrial cells[J].J Clin Endocrinol Mcta,2000,85(12):4721.

[5]單志新,余細(xì)勇,等.巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子誘導(dǎo)血管成生相關(guān)基因的表達(dá)[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào),2005,11,26(6):617.

[6]Harada T,Kaponis A,Iwabe T,et al,Apoptosis in human endomertium and endometriosis[J].Hum Reprod Update,2004,10(1):29.

[7]SlevinM,K rupinskiJ,Slow ik A,etal.Serialm easurement of Vascularendothelial growth factor and transforming growth factor-beta1 in serum of patients with acute ischemic stroke[J].Stroke,2000,31(8):1863.

[8]Guidi AJ,Abu-Jawdeh G,Tognazzi K,etal.Expression of vascular permeability factor(vascular endothelial growth factor)and its receptors in endometrial carcinoma[J].Cancer,1996,78:454.

[9]Goteri,G,Lucarini,G,Filosa,A,etal.Immunohistochemical analysis of vascular endothelial growth factor cellularexpression in ovarian endometriomata[J].Fertil Steril,2004,81(6):1528.

[10]Oosterlynack DJ,Menleman C,Sobis H,et al.Angiogenic activity of peritonealfluid from women with emdometriosis[J].Fertitl Steril,1993,59(4):779.

The Expression and clinical significance of MIF and VEGF in the the Occurence and Progress of Endometriosis

LIU Jinghua,LEN Wei-chun,LIU Jun-bao,et al.(Department of Obstetrics and Gynecology,Shanghai Public Health Clinical Center Affiliated toFudan University,Shanghai201508,China)

ObjectiveTo discussthe expression of macrophage migration inhibitory factor(MIF)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in endometriosis(Ems)tissues and the correlation between MIF and VEGF.MethodsA research is conducted on the protein expressions of MIF and VEGF in 50 cases of EMs organizationswith the immunohistochemis-trical SP method.ResultsThe expression of MIF in the eutopic endometrial endometrial was significantly higher than that in the ectopic endometria in endometriosis(P＜0.05);the expression of MIF in the ectopic endometria in endometriosis was higher than that in the normal endometrium(P＜0.05);the expression of VEGF in the eutopic endometrial was also significantly higher than that in the ectopic endometria in endometriosis(P＜0.05);the expression of MIF in the ectopic endometria in endometriosis was higher than that in the normal endometrium(P＜0.05);so there was a positively correlation between MIF and VEGF.ConclusionThe expression of MIF and VEGF in ectopic endometrial was significantly positively correlated,suggesting thatMIF and VEGF playing an important role in the growth of ectopic endom.

EMs;MIF;VEGF

R392

A

1007-4287(2010)09-1405-03

*通訊作者

2009-11-15)