Cx43、ILK蛋白的表達與卵巢上皮性腫瘤生物學行為的關系

李勝水 盧智 張紅艷 劉巖 李雙標 張鳳梅 高秀敏 許華

(河北省滄州中西醫(yī)結合醫(yī)院病理科 河北滄州 061001)

近來研究表明,間隙連接蛋白(connexin,Cx)43、整合素連接激酶(Integrin-linked,ILK)與腫瘤的形成和發(fā)展關系密切。我們采用免疫組織化學S-P法檢測正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、交界性腫瘤和卵巢癌組織中Cx43,ILK的表達。

表1 Cx43、ILK表達情況[例（%）]

表2 卵巢癌Cx43、ILK表達與組織學類型、病理分級的關系[例（%）]

1 臨床資料

1.1 標本

收集6家醫(yī)院病理科存儲蠟塊標本,卵巢腫瘤標本139例,其中良性腫瘤37例,交界性腫瘤33例,卵巢癌69例(漿液性癌29例,粘液性癌22例,子宮內膜樣癌18例)制成5μm厚切片待檢。正常卵巢標本取自22例子宮平滑肌瘤手術切除標本。

1.2 免疫組織化學染色

采用鏈菌素生物素-過氧化物酶法(S-P法),S-P試劑盒。結果判定:表達部位均在細胞漿,以細胞漿呈清晰棕色為表達陽性。高倍鏡下(放在200倍)隨機選取4個不同視野,計數(shù)細胞總數(shù)及陽性細胞數(shù),按陽性細胞所占百分比計分:陽性細胞率≤25%為1分;陽性細胞率＞25%且≤50%為2分;陽性細胞率>50%且≤75%為4分。染色強弱程度計分:陰性1分;弱染色2分;中等強度染色3分;強染色4分。根據(jù)二者的乘積判斷結果:≤4分為(-);>4分且≤8分為(+);>8分且≤12分為(++);>12分且≤16分為(+++)。統(tǒng)計分析時(-)為陰性表達,(+)、(++)和(+++)均為陽性表達。

1.3 結果統(tǒng)計分析

采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 Cx43、ILK蛋白在卵巢上皮性腫瘤的表達

卵巢癌與正常卵巢組織、良性和交界性卵巢腫瘤比較,Cx43蛋白表達下降,ILK表達增強,均有顯著差異(P<0.01),后三者之間無統(tǒng)計學意義,見表1。

2.2 Cx43、ILK蛋白表達與卵巢癌組織學類型和病理分級的關系

Cx43蛋白表達在不同組織學類型和分化程度的卵巢癌中無顯著差異(P>0.05);ILK的表達中,粘液性癌與漿液性癌和子宮內膜樣癌比較有顯著差異(X=6.298,P<0.05),后兩者之間無統(tǒng)計學意義。在不同分化程度的卵巢癌中,ILK表達顯著差異,見表2。

2.3 Cx43、ILK表達與卵巢癌分期的關系

69例卵巢癌中,按FIGO標準分期且臨床和病理資料完整者56例。Cx43在不同分期的卵巢癌均有表達,而Ⅲ～Ⅳ期癌的表達陽性率(38.7%,12/31)低于Ⅰ～Ⅱ期癌(68.0%,17/25),兩者差異有顯著意義(X=4.757,P<0.05)。ILK在Ⅰ～Ⅱ期癌的表達陽性率(64.5%,20/31)低于Ⅲ～Ⅳ期癌(88.0%,22/25),差異顯著(X=4.073,P<0.05)。

3 討論

Cx43是分子量為43KD的含有378個氨基酸的單肽[1],Cx43表達減少或缺失可造成卵巢癌等多種細胞間隙連接及其連接通迅結構和功能異常,影響細胞間傳遞信號和能量、調控細胞的生長、增殖分化和形態(tài)發(fā)生等內環(huán)境的穩(wěn)定,為腫瘤細胞惡性轉化、增殖提供必要條件,并與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移相關[2～4]。本研究結果表明,卵巢癌Cx43蛋白表達陽性率顯著低于正常卵巢、良性和交界性腫瘤(P<0.01)。而不同類型卵巢癌組織中Cx43蛋白陽性率無明顯差異(P>0.05)。提示不同類型的卵巢上皮癌可能都存在Cx43蛋白下降。另外不同分期的卵巢癌中Cx43在Ⅲ～Ⅳ期癌的表達陽性率低于Ⅰ～Ⅱ期癌(P<0.05),即晚期卵巢癌Cx43蛋白表達陽性率下降更顯著,由此可以推論Cx43失活不但在卵巢癌的發(fā)生中起一定作用,而且對其發(fā)展也有一定作用。

研究發(fā)現(xiàn),ILK能通過介導細胞與ECM的跨膜信號轉導,調控整合蛋白、生長因子介導的信號轉導以及Wnt信號通路[5～8],調節(jié)細胞的生長增殖、分化、調亡、粘著和侵襲[9～11]。ILK的表達和活性增加時,細胞顯示高度的侵襲表型,表明ILK是一個癌基因。本研究結果顯示,ILK在卵巢癌表達陽性率高于正常卵巢、良性和交界性腫瘤(P<0.01),在粘液性癌的表達與漿液性癌和子宮內膜樣癌比較,差異顯著(P<0.05)。由此說明ILK在不同類型卵巢癌的發(fā)生過程中所起的作用可能不同。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中,細胞的癌變是多基因、多步驟在時間和空間上協(xié)同作用的結果。ILK的表達陽性率Ⅲ～Ⅳ期癌的表達陽性率高于Ⅰ～Ⅱ期癌(P<0.05)。

通過對卵巢癌組織中Cx43、ILK蛋白表達比較,可能在卵巢癌進展中ILK的表達的增加伴隨E-cadherin表達的下降,導致細胞-細胞間粘著的喪失和ECM相互作用的減弱,使上皮細胞間粘附、連接抑制,細胞易于脫落,連接通迅不利于建立,抑制了Cx43的表達,使周圍一些調節(jié)細胞生長、分化的信號不易于通過;而Cx43表達缺失,細胞GJIC功能下降,不利于Ca2+等第二信使物質通過,使E-cadherin表達下降或缺失,從而促使腫瘤的生長和轉移,二者協(xié)同促進了卵巢癌的進展,這可能也是導致上述負相關的原因。在卵巢癌的發(fā)生進展過程中,Cx43和ILK是否存在類似的關系或作用,有待進一步研究。

[1]Solan JL,Lampe PD.Connexin43 phosphorylation: structural changes and biological effects[J].Biochem J,2009,419(2):261～272.

[2]Simon KW, Roberts PC, Vespremi MJ.Regulation of beta-catenin and connexin-43 expression: targets for sphingolipids in colon cancer prevention[J].Mol Nutr Food Res,2009,53(3):332～340.

[3]Gershon E, Plaks V, Dekel N.Gap junctions in the ovary: expression,localization and function[J].Mol Cell Endocrinol,2008,282(1～2):18～25.

[4]McLachlan E, Shao Q, Laird DW.Connexins and gap junctions in mammary gland development and breast cancer progression[J].J Membr Biol,2007,218(1～3):107～121.

[5]Wang S,Basson MD.Integrin-linked kinase:a multi-functional regulator modulating extracellular pressure-stimulated cancer cell adhesion through focal adhesion kinase and AKT[J].Cell Oncol,2009,31(4):273～289.

[6]McDonald PC,Fielding AB,Dedhar S.Integrin-linked kinase--essential roles in physiology and cancer biology[J].J Cell Sci,2008,121(19):3121～3132.

[7]Durbin AD, Hannigan GE, Malkin D. Oncogenic ILK, tumor suppression and all that JNK[J].Cell Cycle,2009,8(24):4060～4066.

[8]Eke I,Hehlgans S,Cordes N.There's something about ILK[J].Int J Radiat Biol,2009,85(11):929～936.

[9]Wang S, Basson MD. Integrin-linked kinase: a multi-functional regulator modulating extracellular pressure-stimulated cancer cell adhesion through focal adhesion kinase and AKT[J].Cell Oncol,2009,31(4):273～289.

[10]McDonald PC,Dedhar S,Keller C.Integrin-linked kinase:both Jekyll and Hyde in rhabdomyosarcoma[J].J Clin Invest,2009,119(6):1452～1455.

[11]Haase M, Gmach CC, Eke I,et al. Expression of integrin-linked kinase is increased in differentiated cells[J].J Histochem Cytochem,2008,56(9):819～829.

[12]Lal H,Verma SK,Foster DM,et al. Integrins and proximal signaling mechanisms in cardiovascular disease[J].Front Biosci,2009,1(14):2307～2334.