豬偽狂犬病的診斷和治療研究

劉陸軍 郭成亮 莊曉薇 王小偉

（①山東省臨朐縣畜牧局 262600 ②青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院）

豬偽狂犬病自1947年報(bào)道首例貓感染病例以來已蔓延到我國20多個(gè)省市，給畜牧業(yè)發(fā)展造成巨大的損失[1]。

豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)是引起多種家畜和野生動(dòng)物發(fā)病以發(fā)熱、奇癢(豬除外)及腦脊髓炎為主要特征的一種疾病。本病最早于1902年由匈牙利學(xué)者Aujeszky發(fā)現(xiàn)。在皰疹病毒科中豬偽狂犬病病毒感染動(dòng)物范圍廣泛且致病性較強(qiáng)。在自然條件下，豬、牛、羊、兔、貓、犬、鼠等多種動(dòng)物和許多野生動(dòng)物如水貂、北極熊、銀狐等都可以感染發(fā)病。大量的實(shí)驗(yàn)表明，豬和大部分鼠類是自然界中病毒的主要儲存宿主和疫源動(dòng)物。也就是說，其它家畜是由于接觸了這兩種帶毒動(dòng)物或病死尸體才感染發(fā)病的。豬既是本病的原發(fā)感染宿主，又是病毒長期儲存和排出者，在豬偽狂犬病的傳播上起著甚為重要的作用[2]。據(jù)國外研究表明，除了在自然條件下通過吃食病死鼠的尸體豬感染發(fā)病外，在大量喂食殘剩廢棄食物的豬場，經(jīng)常有本病的暴發(fā)流行。豬只發(fā)病時(shí)間因傳播途徑而異，最短36h，最長10d，一般多為3～6d。主要是通過飛沫、攝食和創(chuàng)傷感染傳播。

為了進(jìn)一步了解該病的一些基本情況，筆者對豬偽狂犬病進(jìn)行了診斷與治療方面的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 臨朐縣某發(fā)病豬場的病豬、死豬及其豬群。

1.1.2 藥物 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的偽狂犬病弱毒凍干疫苗；氨芐青霉素、磺胺－6－甲氧嘧啶鈉等抗菌素和磺胺類藥；5%糖鹽水、維生素C；2%～3%的燒堿；1:200的百菌消－30。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 研缽、 離心機(jī)、試管、移液管、過濾器、濾膜、膠頭滴管、保溫柜、注射器、手術(shù)刀、鑷子、平板、打孔器、37℃濕盒、培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 臨床癥狀的觀察 分別測量發(fā)病仔豬、斷奶前后仔豬、成年豬、育肥豬、懷孕母豬和種用公豬的體溫，并觀察精神狀況、食欲狀況、神經(jīng)狀況、呼吸狀況、叫聲以及病程[3]。

1.2.2 剖檢病理變化的觀察 剖檢病死豬，肉眼觀察上呼吸道、扁桃體、腦膜、心外膜、腎臟、膀胱、肺臟、脾臟、肝臟、胃、腸腔等各內(nèi)臟組織器官的病變(包括黏膜的充血、出血點(diǎn)及各臟器的壞死灶等)。

1.2.3 細(xì)菌學(xué)檢測 取自然病死豬的心血、內(nèi)臟、淋巴和死胎胃內(nèi)容物接種布氏桿菌選擇培養(yǎng)基，普通肉湯和瓊脂斜面，置37℃經(jīng)2～7d培養(yǎng)。

1.2.4 接種試驗(yàn)動(dòng)物 取自然發(fā)病仔豬腦、脾，用滅菌生理鹽水制成1:10的懸濁液，加青霉素、鏈霉素1000U/ml，置4℃冰箱保存8h，以3000r/min離心，取上清液作接種物[4]。將臨床健康、體重為1.2～1.5kg的家兔6只平均分成試驗(yàn)組和對照組。試驗(yàn)組兔每只在右后腿股部外側(cè)皮下注射上述懸浮液2ml，對照組兔子相同部位皮下注射生理鹽水2ml。

1.2.5 血清學(xué)檢測 待檢血清：死亡仔豬肝、脾和肺新鮮病料，加5倍生理鹽水研磨成組織懸液，10000r/min離心20min，取上清經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，加雙抗至1000U/ml，37℃作用30min。

檢測方法：按曹澍澤報(bào)道的方法，分別取病料組織上清和細(xì)胞培養(yǎng)液上清同抗偽狂犬病高免陽性血清、抗豬細(xì)小病毒高免陽性血清，做雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)。以1.2%瓊脂澆筑平板并打梅花孔，中央孔加陽性血清，周邊孔加入待測病料，其中2個(gè)周孔分別加入陰性血清作對照，于37℃濕盒中保存48h，發(fā)病豬病料組織上清和細(xì)胞培養(yǎng)上清同偽狂犬高免陽性血清和發(fā)病豬血清反應(yīng)24h后觀察結(jié)果[5]

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀觀察的結(jié)果

2.1.1 哺乳仔豬的臨床癥狀 發(fā)病的哺乳仔豬呈現(xiàn)眼眶發(fā)紅，眼皮水腫，精神高度沉郁等癥狀，其體溫上升達(dá)41℃以上，食欲廢絕，并伴有明顯的神經(jīng)癥狀，精神極度頹萎，昏睡，發(fā)抖，運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)，痙攣，嘔吐，流涎，呼吸加快，叫聲嘶啞，腹瀉，有的病豬倒地側(cè)臥，頭向后仰，四肢做劃動(dòng)游泳狀運(yùn)動(dòng)。有的病豬作圓圈運(yùn)動(dòng)或后退，最后昏迷衰竭死亡，極少康復(fù)，病程1～2d，發(fā)病日齡越小，病程越短，最快發(fā)病5h即死亡。

2.1.2 斷奶前后仔豬的臨床癥狀 斷奶前后仔豬主要為呼吸系統(tǒng)癥狀，表現(xiàn)呼吸困難，咳嗽，流鼻涕等，也有部分豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、拉稀和嘔吐等，發(fā)病率和死亡率明顯低于新生仔豬。

2.1.3 成年豬的臨床癥狀 成年豬表現(xiàn)癥狀極為輕微，只表現(xiàn)一般性發(fā)熱，精神沉郁等輕微癥狀，有的病豬出現(xiàn)嘔吐、咳嗽，一般多于4～8d后康復(fù)。

2.1.4 育肥豬的臨床癥狀 育肥豬主要表現(xiàn)為生長遲緩和日增重下降。

2.1.5 母豬的臨床癥狀 母豬則表現(xiàn)為不育癥、返情率高和屢配不孕。妊娠母豬常發(fā)生流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎，其中以產(chǎn)死胎為主，產(chǎn)出的弱胎通常在3～4d死亡。且無論是頭胎母豬還是經(jīng)產(chǎn)母豬都發(fā)病。

2.1.6 公豬的臨床癥狀 公豬發(fā)生睪丸鞘膜炎，表現(xiàn)為睪丸腫脹、萎縮等，種用性能降低或喪失。根據(jù)臨床癥狀初步判定為豬的偽狂犬病。通過不同豬只的臨床癥狀可以看出，各種年齡的豬只都易感染該病毒，但臨床癥狀，隨著豬年齡的不同而不同，豬只發(fā)病癥狀和死亡率有顯著差別；隨著仔豬月齡的增加，患病仔豬病程延長，癥狀減輕，死亡率呈下降趨勢；而成年豬感染后常不呈現(xiàn)可見的臨床癥狀或僅表現(xiàn)為輕微體溫升高，一般不會(huì)導(dǎo)致豬死亡。由于仔豬發(fā)病快，病程短，癥狀急，染病仔豬不易救治；而成年豬臨床癥狀不甚明顯，易造成染病豬只的誤診誤治。

2.2 剖檢病理變化的結(jié)果

可見大部分病死豬上呼吸道粘膜及扁桃體出血、水腫，腦膜充血或有出血點(diǎn)，腎表面有針尖大出血點(diǎn)，部分病死豬心外膜、膀胱粘膜有少許針尖大出血點(diǎn)，肺小葉出血，脾邊緣有梗死灶，腸腔充盈氣體。胃腸粘膜可見卡他性炎癥，胃底部有明顯的出血區(qū)。肝臟和脾臟有特征性多發(fā)性壞死灶，中央灰白色，外周有紅色暈圈。豬只日齡大病程長的病變較嚴(yán)重，日齡小的病豬和死胎一般外表和內(nèi)臟無明顯變化，個(gè)別死胎頭尾兩端呈灰黑色，內(nèi)臟有腐敗病變。內(nèi)臟器官的病理變化符合豬偽狂犬病的病理特征。

2.3 細(xì)菌學(xué)檢測的結(jié)果

經(jīng)2～3d培養(yǎng)后，未見細(xì)菌生長。并做涂片染色鏡檢，未見細(xì)菌。取上述腦、淋巴和脾按常規(guī)方法接種兔，取典型劇癢癥致死兔的心血，內(nèi)臟和淋巴做細(xì)菌培養(yǎng)和涂片染色鏡檢均呈陰性。排除細(xì)菌感染確定為病毒感染。

2.4 生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

試驗(yàn)組兔子接種后42～86h相繼死亡，對照組兔觀察10d均健活。試驗(yàn)組接種后，體溫升高但不穩(wěn)定，在0.2～0.5℃范圍內(nèi)波動(dòng)，食欲逐漸減退至拒食，精神轉(zhuǎn)差，3只分別在63h、70h和75h出現(xiàn)特征性巨癢，最初舔咬接種部位，使被毛脫落、皮肉破裂，隨后用嘴撕咬肌肉，以至連同股部皮肉全部撕脫，可見因血染紅的股骨，到晚期四肢抽搐，角弓反張，后軀軟癱不能站立，到地側(cè)臥，后退伸直，此時(shí)仍竭力撕咬注射部位，最后閉眼昏睡，呼吸微弱，2～3d內(nèi)死亡。剖檢見腦膜充血、出血，大腦半球溝回內(nèi)積滿血液；咽喉黏膜充血、潮紅，氣管內(nèi)有多量白灰色泡沫，肺淤血呈暗紅色；脾被膜下有大量出血點(diǎn)；肝稍腫脹，質(zhì)地變硬，色澤變暗；腎皮質(zhì)點(diǎn)狀出血；淋巴結(jié)出血。

接種的兔子表現(xiàn)出了豬偽狂犬病的劇癢、體溫升高[6]以及神經(jīng)癥狀。用病料接種兔后，兔的注射部位發(fā)生劇癢。

2.5 血清學(xué)檢測的結(jié)果

血清學(xué)檢測結(jié)果表明病例樣品與豬偽狂犬病高免陽性血清反映呈陽性；而與豬細(xì)小病毒高免陽性血清和豬瘟高免陽性血清反應(yīng)呈陰性。通過抗原抗體相結(jié)合的方法說明病死豬的血清中存在豬偽狂犬病抗體。通過上述試驗(yàn)確診豬場所染病為豬偽狂犬病。

2.6 治療措施和結(jié)果

2.6.1 群體接種 豬場采用中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的偽狂犬病弱毒凍干疫苗對全場后備公、母豬、生產(chǎn)公豬、哺乳母豬、臨產(chǎn)前1個(gè)月懷孕母豬、育肥豬頸部肌注2ml，斷奶仔豬頸部肌注1ml，哺乳仔豬頸部肌注0.5ml，種豬第1次注射后，4～6周加強(qiáng)免疫1次。

2.6.2 隔離治療（1）使用氨芐青霉素、磺胺-6-甲氧嘧啶鈉等抗菌素和磺胺藥進(jìn)行防止繼發(fā)感染，同時(shí)用病毒靈等抗毒藥物進(jìn)行治療[7]。（2）防止病豬脫水，每天用5%糖鹽水20ml加維生素C 2ml，進(jìn)行腹腔注射，并輔以安鈉，地塞米松等藥物進(jìn)行對癥治療，提高病豬機(jī)體自身抵抗力，加快其恢復(fù)。對發(fā)病豬采取上述治療措施，早期治療的病豬均取得顯著的療效，治愈康復(fù)。

3 討論

3.1 診斷方法的應(yīng)用

（1）臨床癥狀的觀察方法方便快捷，但很多疾病的暴發(fā)會(huì)出現(xiàn)相似的臨床癥狀，如發(fā)生豬的細(xì)小病毒病的母豬會(huì)出現(xiàn)與豬偽狂犬病相似的死胎木乃伊胎，因而臨床癥狀的觀察只能作為輔助的初診判斷。（2）病理變化的剖檢，典型的病理變化可判斷為豬的偽狂犬病，但有些豬內(nèi)臟組織器官的病變并不具有典型癥狀，尤其是發(fā)病急死亡快的豬，剖檢病理變化并不明顯，所以病理變化的觀察只有當(dāng)具有典型癥狀是才可確診。（3）細(xì)菌學(xué)診斷可以區(qū)分細(xì)菌病和病毒病，但區(qū)分范圍太廣只可做為一個(gè)普通的實(shí)驗(yàn)室診斷。有根據(jù)性但無依賴性。（4）血清學(xué)診斷通過抗原抗體相結(jié)合的方法可直接判斷出病豬的血清中是否有豬的偽狂犬病病原抗體，暴發(fā)過豬偽狂犬病的豬場，血清學(xué)診斷是一個(gè)可靠而準(zhǔn)確的判斷方法。但如果豬場以前暴發(fā)過豬偽狂犬病現(xiàn)在仍存在帶毒豬或豬場注射過豬偽狂犬病疫苗，血清學(xué)診斷則變的沒有意義了。

3.2 防制措施

防制豬偽狂犬病應(yīng)采取一系列措施，逐步凈化豬場，根除豬偽狂犬病。

3.2.1 凈化措施（1）隨機(jī)抽取豬場的20頭3月齡仔豬的血清，用PRV-g IELISA試劑盒檢測，確定其感染情況[8]。（2）對豬場內(nèi)種豬每4個(gè)月進(jìn)行1次免疫接種，對仔豬每隔30～35日免疫接種1次[9]。（3）對新引進(jìn)的種豬，用偽狂犬病基因缺損弱毒疫苗免疫，并隔離飼養(yǎng)30d，經(jīng)檢測PRV-g I抗體陰性后并入生產(chǎn)群。（4）嚴(yán)格按上述措施實(shí)施8個(gè)月，再次對種豬群檢測PRV-g I抗體，對檢測出的陽性豬只強(qiáng)制淘汰，以后每隔4個(gè)月檢測1次[10]。（5）在連續(xù)3次檢測不出PRV-g I抗體陽性豬后，隨機(jī)抽檢1%的3月齡仔豬，檢測PRV-g I抗體，并對體溫升高的病豬血清用PCR方法檢測PRV抗原，檢測結(jié)果是否均為陰性。

3.2.2 疫苗接種 從豬場暴發(fā)豬偽狂犬病可以看出，豬偽狂犬病一旦暴發(fā)很不容易控制，而且因?yàn)樵摬Ф矩i臨床癥狀不明顯，不容易根除，給防制帶來很大困難。但可以積極的做好預(yù)防措施，防患于未然。最切實(shí)可行的辦法就是有計(jì)劃的對豬群進(jìn)行疫苗免疫。疫苗免疫可降低感染機(jī)率，降低感染后的野毒排放量，縮短排野毒時(shí)間，減少隱性感染、持續(xù)感染或潛伏感染。但是疫苗免疫也不是萬能的。一些豬場雖然實(shí)施了豬偽狂犬病疫苗的免疫，臨床病豬也沒有明顯癥狀的出現(xiàn)，母豬的繁殖性能也較過去有很大提高，但由于疫苗的差異以及偽狂犬病陽性豬的存在，造成豬群間免疫抗體的不均一，部分低抗體豬仍會(huì)發(fā)生感染從而造成豬偽狂犬病在豬場內(nèi)持續(xù)流行[11]。在實(shí)施偽狂犬病凈化計(jì)劃時(shí)，除了應(yīng)用基因缺失苗外，豬群生產(chǎn)管理中的全進(jìn)全出單向流動(dòng)和嚴(yán)格的消毒隔離、滅鼠工作等生物安全措施是必不可少的，可有效地阻止病原在不同生產(chǎn)階段的豬群間傳播，結(jié)合淘汰陽性豬的措施，才能達(dá)到凈化的目的[12]。

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