中藥提取物和鹽酸左旋咪唑免疫調(diào)節(jié)作用的研究

李登國 （山東省鄒城市獸醫(yī)站 273500） 柳風(fēng)祥 （山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院）

中藥的免疫增強作用早有報道，中藥不但能提高禽流感和豬瘟疫苗免疫后的特異性抗體水平[1，2]，也可抵消免疫抑制劑環(huán)磷酰胺造成的中樞免疫器官的萎縮[3]。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上選用黃芪、當(dāng)歸、白術(shù)和甘草組成復(fù)方制劑，模擬商品代雞群中自然發(fā)生的免疫抑制狀態(tài)，建立一個動物模型測試藥物特別是中藥制劑的免疫調(diào)節(jié)作用，并與鹽酸左旋咪唑比較，探討復(fù)方中藥制劑的免疫增強作用，及鹽酸左旋咪唑?qū)υ撁庖咭种埔蛩氐拿庖哒{(diào)節(jié)作用。

1 材料和方法

1.1 試驗用藥物 黃芪(Radix Astragali)、當(dāng)歸(Radix Codonopis)、白術(shù)(Herba Epimedii)、甘草(Radix GlycyrrIzae)，均購自泰安市藥材公司，經(jīng)山東省獸藥監(jiān)察所鑒定；鹽酸左旋咪唑(Lev)購自陜西漢江藥業(yè)有限公司，含量99.3%，生產(chǎn)批號：20060710；環(huán)磷酰胺(CY)購自山東新寶鑫藥業(yè)有限公司，含量99.7%，生產(chǎn)批號：20070502。

試驗中中藥提取物由45%黃芪、20%當(dāng)歸、20%白術(shù)、15%甘草(以各中藥的漢語拼音的第一個字母組合表示HDBG，下同)混合物提取而來。取8倍量的自來水浸泡過夜，煮沸2h后過濾，濾渣加5倍量自來水煮沸2h，合并2次濾液，濃縮至含中藥材1g/ml。

1.2 試驗設(shè)計 180只1日齡海蘭褐公雞，購自泰安市東岳種禽場，隨機分為6組。1～3組為健康組，不使用環(huán)磷酰胺；4～6組為使用環(huán)磷酰胺組，1日齡時在飲水中按25mg/kg的濃度添加環(huán)磷酰胺，連用7d。7日齡時所有雞均免疫Lasota(齊魯動物保健品有限公司生產(chǎn))、NDV滅活疫苗(英特威公司生產(chǎn))、H5-AIV滅活疫苗(齊魯動物保健品有限公司生產(chǎn))，各種疫苗按說明書使用。14、21、28日齡所有雞用IBDV飲水免疫(英特威公司生產(chǎn))。1組為對照組，2、5組在1日齡時在飲水中按2%的濃度添加中藥提取物，3、6組在1日齡時在飲水中按50mg/kg的濃度添加鹽酸左旋咪唑，自由飲水，直至試驗結(jié)束。

在35、42、49日齡時所有雞翅靜脈采血測雞NDV、H5-AIV抗體效價。用血凝抑制(HI)微量法測定NDV、H5-AIV抗體效價。

2 結(jié)果

2.1 中藥提取物和鹽酸左旋咪唑?qū)﹄u體液免疫反應(yīng)的影響

表1 中藥提取物和鹽酸左旋咪唑?qū)﹄u的NDV HI抗體滴度(Log2)的影響

表1的結(jié)果顯示，環(huán)磷酰胺(CY)明顯造成雞對NDV滅活油苗的免疫抑制。試驗數(shù)據(jù)還顯示，不論是在健康雞還是在飲用環(huán)磷酰胺(CY)雞，添加鹽酸左旋咪唑?qū)DV抗體水平都沒有影響，與對照雞差異不顯著(P>0.05)。中藥提取物對健康雞抗體水平也沒有影響(P>0.05)。但是，在1日齡飲用環(huán)磷酰胺(CY)導(dǎo)致免疫功能下降的雞，中藥提取物可顯著改善體液免疫反應(yīng)。在1周齡接種NDV的滅活油乳疫苗后4周、5周和6周，雖然應(yīng)用中藥提取物的免疫抑制雞感染雞對NDV仍達(dá)不到健康對照組，卻顯著高于同樣飲用感染但未添加中藥的對照組，對NDV HI抗體滴度的差異極顯著(P<0.01)。

表2 中藥提取物和鹽酸左旋咪唑?qū)﹄u的H5-AIV HI抗體滴度(Log2)的影響

中藥提取物和鹽酸左旋咪唑?qū)Σ煌庖吖δ軤顟B(tài)下雞的H5-AIV抗體水平的影響與NDV相似。這一結(jié)果表明，左旋咪唑不論對臨床健康雞還是對飲用環(huán)磷酰胺(CY)誘發(fā)免疫抑制狀態(tài)下的雞，對NDV或H5-AIV滅活疫苗的體液免疫反應(yīng)都沒有任何增強作用，而該4種中藥提取物雖然在臨床健康雞對NDV或H5-AIV的HI抗體反應(yīng)沒有影響，但對在環(huán)磷酰胺(CY)誘發(fā)的免疫功能低下的雞，該中藥提取物確實能提高對NDV及H5-AIV的HI抗體反應(yīng)。

3 討論

很多研究表明，中藥提取物可提高小鼠、雞、兔或豬的特異性和非特異性免疫反應(yīng)[4-6]。其中王福傳等[7]和李宏全等[8]更是在很大數(shù)量雞的對比試驗中證明了，用黃芪多糖提取物注射或以某些復(fù)方中藥添加于飼料中，可顯著提高雞群對NDV或IBDV疫苗免疫后的抗體反應(yīng)，張樂翠等[3]以化學(xué)藥物環(huán)磷酰胺誘發(fā)全身性免疫抑制，也證明了黃芪多糖和香菇多糖可抵消環(huán)磷酰胺誘發(fā)的法氏囊和脾臟的萎縮。本研究以環(huán)磷酰胺感染雛雞，造成一定程度的免疫抑制，作為一種試驗動物模型，比較了在飼料中添加一些復(fù)方中藥浸出物后的免疫增強作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由黃芪、當(dāng)歸、白術(shù)和甘草組成的方劑添加到飼料中后，對正常健康雞體液免疫反應(yīng)沒有任何影響，但確可顯著增強處于環(huán)磷酰胺(CY)誘發(fā)的免疫抑制狀態(tài)的雞群對NDV和AIV滅活疫苗免疫后的特異性抗體反應(yīng)。

近幾年研究發(fā)現(xiàn)鹽酸左旋咪唑在免疫調(diào)節(jié)上有重要作用[9,10]。該藥可增強細(xì)胞功能[11]，它還有胸腺激素的類似作用，誘導(dǎo)T細(xì)胞成熟，增強外周T巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的活性。Hassan曾報道[12]ND免疫前應(yīng)用左旋咪唑，HI抗體明顯升高，而免疫后應(yīng)用無此作用。韓雪清報道雛雞免疫前用左旋咪唑，可使IBD+ND疫苗聯(lián)合免疫時抗ND、IBD抗體水平明顯升高。劉玉堂報道[13]蛋雞免疫ND疫苗同時飲用左旋咪唑，結(jié)果HI抗體明顯升高，抗體上升快，持續(xù)時間延長5個月以上。Palanskii報道[14]ND疫苗免疫前應(yīng)用左旋咪唑，T細(xì)胞絕對值和相對值升高，而抗體滴度無明顯變化，抗人工感染能力增強。但是在本試驗中，不論是在正常健康雞還是REV感染后免疫抑制的雞，左旋咪唑卻沒有表現(xiàn)出任何免疫增強作用。由此推測左旋咪唑在有些條件下對有些抗原的刺激有免疫增強作用，但在另一種條件下對其他抗原的刺激卻沒有免疫增強作用。

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