母豬早期妊娠常用診斷技術(shù)及新技術(shù)研究進(jìn)展

萬積成 唐曉賓 張麗麗 （北京萬華生物工程有限公司 100081）

母豬的早期妊娠診斷是提高母豬繁殖效率和畜牧業(yè)生產(chǎn)效益的重要技術(shù)措施，尤其是配種后20d前后的早期妊娠診斷是母豬繁殖技術(shù)中十分重要的內(nèi)容。通過診斷，可以盡早的確定為妊娠母豬，以便及時采取措施，如未妊娠再進(jìn)行配種，使之妊娠。這對于縮短母豬的產(chǎn)仔間隔、減少空懷期、提高繁殖率具有重要意義，經(jīng)濟(jì)價值很大。本文總結(jié)歸納了母豬妊娠診斷的技術(shù)，并對各種技術(shù)的優(yōu)勢與弊端進(jìn)行分析說明，對母豬妊娠診斷的新技術(shù)及發(fā)展方向加以展望。

1 臨床診斷法

1.1 觀察配種后的表現(xiàn) 詢問畜主豬何時發(fā)情、配種、人工授精或本交、以往妊娠配種次數(shù)、本次配種次數(shù)、最后一次何時配種、最后一次配種是否再發(fā)情、配種后食欲是否增加等；看母豬的腹部下垂與否、乳房是否腫脹等。如果母豬配種21d后不再發(fā)情或者配種后性情變得溫順、安靜，食欲逐漸增加，膘情好轉(zhuǎn)，皮毛變得光亮緊湊，腹圍增大，行動變得小心穩(wěn)重，陰戶下聯(lián)合處逐漸收縮緊閉，明顯的向上翹，配種10d后，陰道顏色變白并附有濃稠粘液，觸之澀而不潤，這些都是母豬已經(jīng)妊娠的表現(xiàn)[1,2]。此法不需要任何儀器與試劑，完全靠檢驗者的經(jīng)驗來進(jìn)行判斷，雖然簡便，但是準(zhǔn)確率不高。

1.2 外部接觸法 先進(jìn)行抓癢，使其臥下。用左手挾住最后兩對乳房之上的兩側(cè)腹壁，并上、下、左、右滑動。妊娠2個月時最易摸清胎兒，母豬過肥則難以奏效[1]。

1.3 直腸檢查 根據(jù)豬在妊娠期子宮角、子宮頸以及子宮壁等的變化情況來進(jìn)行診斷。盡管此法準(zhǔn)確率高，但由于豬較牛體格小，很難將手伸入直腸，且保定困難，費(fèi)時費(fèi)力，所以此方法在實(shí)踐中意義不大[1]。

1.4 掐壓腰背部法 母豬配種21d后，掐第9胸椎到第2腰椎之間，用拇指和食指掐壓母豬出現(xiàn)凹背反射而無凹屈反射，說明已經(jīng)妊娠；母豬出現(xiàn)凹屈反射而無凹背反射，說明沒有妊娠。此方法是憑借經(jīng)驗，準(zhǔn)確率不高。

1.5 尿液檢查法 在母豬配種10d后，取清晨尿液10ml置于玻璃杯中，加入5%～7%碘酊1ml，煮沸后，如尿液呈現(xiàn)紅色，說明已經(jīng)妊娠；出現(xiàn)淺黃色或褐色，且冷卻后顏色很快消失，說明未妊娠[2,3]。

1.6 激素法 母豬妊娠后，卵巢上的周期黃體維持下來且分泌孕酮的功能增強(qiáng)，因而體內(nèi)孕激素水平很高，不會被外源的雌性激素誘發(fā)發(fā)情，因此在母豬配種后通過注射各種激素：孕馬血清促性腺激素、已烯雌酚、雌二醇等，注射后妊娠母豬不會表現(xiàn)發(fā)情，而未懷孕母豬則會表現(xiàn)發(fā)情征兆[4,5]。此種方法確診率高，不會造成母豬流產(chǎn)，母豬產(chǎn)仔數(shù)及仔豬發(fā)育均正常，但是需要專業(yè)人員操作，農(nóng)村散養(yǎng)戶對藥劑的使用量及注射方法都沒有很好的把握，不適合小型養(yǎng)殖規(guī)模的農(nóng)戶使用。

1.7 超聲波診斷法 超聲波診斷法是以高頻聲波對動物的子宮進(jìn)行探查，然后將其回波放大后以不同形式轉(zhuǎn)化成不同的信號顯示出來，目前應(yīng)用的診斷儀主要有A超、B超、多普勒超聲三種。A超在70年代備受青睞，目前應(yīng)用較少。B超是目前使用最多最先進(jìn)的超聲波診斷儀。超聲波診斷妊娠具有無損傷、安全、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，但是價格昂貴，且損壞后不易修理，需要專業(yè)人員操作，目前只能在規(guī)?；i場應(yīng)用。（1）A超：是利用超聲波來檢查充滿積液的子宮，聲波從妊娠的子宮反射回來，并被轉(zhuǎn)換成聲音信號或示波器屏幕上的圖像，或通過二極管形成亮線。這種儀器體積較小，操作簡便，幾秒鐘便可得出結(jié)果，適合基層豬場使用。但膀胱積液、子宮積膿和子宮內(nèi)膜水腫容易造成假陽性診斷結(jié)果。另外，這種診斷儀應(yīng)注意其應(yīng)用的對象，一些對大家畜使用的診斷儀應(yīng)用于豬時，可能會使所有的被測對象都呈陽性。（2）B超：B型超聲診斷儀可通過探查胎體、胎水、胎心搏動及胎盤等來判斷妊娠階段、胎兒數(shù)、胎兒性別及胎兒狀態(tài)等。具有時間早、速度快、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)，但價格昂貴、體積大，只適用于大型豬場定期檢查。（3）多普勒：該儀器可通過測定胎兒和母體血流量、胎動等做較早期診斷。當(dāng)周圍環(huán)境中有噪音干擾或直腸探查部位有糞便阻塞時會出現(xiàn)假陰性診斷。此種方法一般需要用不同妊娠期探查的錄音進(jìn)行比照[6]。

2 實(shí)驗室診斷方法

2.1 血漿孕酮測定 未妊娠而有發(fā)情周期的母豬，在發(fā)情期的第16d左右，外周血漿孕酮濃度下降，因此可在配種后16～24d檢測，若血漿孕酮含量仍很高，則為妊娠的征象。豬妊娠22d時血漿孕酮含量一般在5mg/mL以上。但此方法不利于推廣的原因為采集血樣困難[7]。

2.2 血漿和尿中雌激素測定 豬妊娠25～30d以后，血液和尿中雌激素含量大大高于未妊娠豬，故可用來診斷妊娠。尿中雌激素可用化學(xué)方法測定；血液內(nèi)雌激素則用放射免疫法。雖然應(yīng)用這些方法準(zhǔn)確率高，但由于儀器設(shè)備費(fèi)用太大，操作技術(shù)復(fù)雜，且采集血、尿樣品不便，所以在實(shí)踐中很難被推廣[8]。妊娠30d就能從血中測出硫酸雌酮，未妊娠豬則測不出來。血液中硫酸雌酮含量最高的時間是配種后24～26d，這時測定效果最好。

2.3 陰道活組織檢查 上皮細(xì)胞的層數(shù)和形態(tài)與內(nèi)分泌狀況有密切關(guān)系。妊娠第26d上皮細(xì)胞平行排列成兩行，細(xì)胞核濃縮，染成黑色，無乳頭間栓。未妊娠豬有許多層次的上皮細(xì)胞，有大量的乳頭間栓，制作組織切片檢查。雖然該方法準(zhǔn)確率在90%以上，但操作復(fù)雜，檢查費(fèi)時，不能立即獲得結(jié)果，實(shí)用性不大[1]。

2.4 血小板計數(shù)法 文獻(xiàn)報道，血小板顯著減少是早孕的一種生理反應(yīng)，根據(jù)血小板是否顯著減少就可對配后數(shù)小時至數(shù)天內(nèi)的母畜作出超早期妊娠診斷[9,10]。該方法具有時間早、操作簡單、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)。尤其是為胚胎附植前的妊娠診斷開辟了新的途徑，易于在生產(chǎn)實(shí)踐中推廣和應(yīng)用。在母豬發(fā)情配種前(當(dāng)天)和配種后第1～11d從耳緣靜脈采血20μl，置于盛有0.4ml血小板稀釋液的試管內(nèi)，輕輕搖勻，待紅細(xì)胞完全破壞后再用吸管吸取一滴充入血細(xì)胞計數(shù)室內(nèi)，靜置15min后，在高倍鏡下進(jìn)行血小板計數(shù)。配種后第7d是進(jìn)行超早期妊娠診斷的最佳血檢時間。血小板數(shù)在第7d降到最低點(diǎn)(250±91.13)×103mm3試驗?zāi)肛i經(jīng)過2個月后進(jìn)行實(shí)際妊娠診斷，判定與血小板計數(shù)法診斷的妊娠符合率為92.59%，未妊娠符合率83.33%，總符合率93.33%[9]。馬群山等試驗符合率為89.53%[10]。李玉龍等所得總符合率為93.85%[9]。

該方法雖有時間早，準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)，但應(yīng)排除某些疾病所導(dǎo)致的血小板減少。例如，肝硬化，貧血，白血病及原發(fā)性血小板減少性紫癜等癥。

3 新技術(shù)的研究

根據(jù)母豬妊娠期孕酮周期性變化的規(guī)律，利用膠體金免疫層析法原理，以孕酮作為檢測目標(biāo)物，以孕酮水平判斷母豬是否妊娠。在母豬配種后19、20、21、22d要密切觀察豬的行為表現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)豬有發(fā)情的表現(xiàn)應(yīng)立即進(jìn)行檢測，試劑板出現(xiàn)一條紅線為陰性，確定為未懷孕，要及時配種，可避免假發(fā)情情況如果沒有發(fā)情表現(xiàn)則第23d為最后檢測時間，配在試劑板出現(xiàn)一條紅線為陰性，表示未懷孕，可避免由于乏情延誤診斷，出現(xiàn)兩條紅線為陽性，可確定豬已懷孕，應(yīng)進(jìn)入妊娠期管理。此方法具有準(zhǔn)確率高、操作簡便、檢測迅速、常溫儲存、攜帶方便、對母體和胎兒安全無害等特點(diǎn)，而且只取豬尿進(jìn)行檢測，取樣方便，結(jié)果讀取簡單，不需要專業(yè)人員操作，因此特別適合小規(guī)模豬場和散養(yǎng)戶使用，實(shí)用性強(qiáng)，推廣應(yīng)用前景良好。

綜上所述，母豬早期妊娠診斷的方法很多，也各有利弊，各種養(yǎng)殖戶要根據(jù)自己的養(yǎng)殖規(guī)模與特點(diǎn)選擇適合自己的診斷方法。日本學(xué)者菅原七郎曾提出家畜早期妊娠診斷的5條原則[11,12]：（1）在妊娠后不久的時間內(nèi)盡早地進(jìn)行診斷；（2）妊娠和未妊娠母畜診斷的準(zhǔn)確率應(yīng)達(dá)到85%以上；（3）方法簡便；（4）對妊娠母畜和仔畜安全無害；（5）經(jīng)濟(jì)實(shí)用。所以簡便而有效的進(jìn)行早期妊娠診斷，是畜牧工作者長期以來試圖解決的問題之一，因為盡早發(fā)現(xiàn)空懷，盡早采取措施復(fù)配，才不致錯過配種季節(jié)。對母豬而言，每耽誤5.5個發(fā)情周期就少產(chǎn)1窩。母豬配種后20d前后的早期妊娠診斷，是母豬繁殖技術(shù)中十分重要的研究內(nèi)容。因此早期妊娠診斷技術(shù)在養(yǎng)豬生產(chǎn)中具有很大的研究應(yīng)用價值和推廣價值。

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