母豬早孕膠體金檢測(cè)試紙法與其它方法的比較

劉 薇

（北京萬華生物工程有限公司，北京 102200）

母豬的早期妊娠診斷是提高母豬繁殖效率和養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)效益的重要技術(shù)措施，母豬配種后，能夠盡早地妊娠確診，能夠減少母豬的空懷期或非繁殖天數(shù)，可以提高母豬的平均年產(chǎn)仔窩數(shù)，并有利于對(duì)繁殖障礙母豬的及早治療處理。目前普遍采用的母豬早期妊娠診斷技術(shù)方法很多，本文就當(dāng)前較成熟、簡(jiǎn)便、普遍應(yīng)用的早期妊娠診斷技術(shù)綜述如下。

1 返情觀察法

母豬的發(fā)情周期為18～22天，依據(jù)母豬的發(fā)情周期來判斷配種后母豬是否出現(xiàn)發(fā)情現(xiàn)象。多采用公豬試情與人工查情相結(jié)合，每天固定時(shí)間讓公豬與母豬接觸，如果母豬對(duì)公豬表示出興趣，查情人員則進(jìn)一步觀察母豬的返情癥狀，如壓背反應(yīng)、陰戶腫脹、豎耳、鳴叫等。確定母豬返情之后則認(rèn)定母豬沒有受孕，而沒有發(fā)情的就認(rèn)為已經(jīng)妊娠。但該法早期診斷妊娠會(huì)受一些因素影響，實(shí)際上沒有返情的母豬可能不一定是妊娠，其它一些原因，如母豬安靜發(fā)情、乏情、卵巢囊腫等能導(dǎo)致母豬不發(fā)情。此外，外部環(huán)境如豬場(chǎng)管理混亂、飼料中含有霉菌等毒素、炎熱、母豬營(yíng)養(yǎng)不良時(shí)，則母豬持續(xù)乏情或假妊娠率會(huì)增高。因此，觀察法不夠準(zhǔn)確，但該方法簡(jiǎn)單易行，是最常用的妊娠診斷方法。

2 注射雌激素檢測(cè)法

即為用注射激素來判斷母豬是否妊娠的方法，但過早使用雌性激素可引起豬體內(nèi)內(nèi)分泌紊亂致長(zhǎng)期不發(fā)情，此法實(shí)用性有待進(jìn)一步探討。

（1）孕馬血清促性腺激素（PMSG）法：母豬妊娠后有許多功能性黃體，抑制卵巢上卵泡發(fā)育。功能性黃體分泌孕酮，可抵消外源性PMSG和雌激素的生理反應(yīng)，母豬不表現(xiàn)發(fā)情即可判為妊娠。方法是于配種后14～26天的不同時(shí)期，在被檢母豬頸部注射700IU的PMSG制劑，以判定妊娠母豬并檢出妊娠母豬。判斷標(biāo)準(zhǔn)：以被檢母豬用PMSG處理，5天內(nèi)不發(fā)情或發(fā)情微弱及不接受交配者判定為妊娠；5天內(nèi)出現(xiàn)正常發(fā)情，并接受公豬交配者判定為未妊娠。

（2）己烯雌酚法：對(duì)配種16～18天母豬，肌肉注射己烯雌酚1mL或0.5%丙酸己烯雌本分和丙酸睪丸酮各0.22mL的混合液，如注射后2～3天無發(fā)情表現(xiàn)，說明已經(jīng)妊娠。

（3）注射雌二醇：在配種后的第17天注射低劑量的雌二醇，如果母豬妊娠，則3～5天內(nèi)母豬沒有明顯變化，如果未孕，母豬會(huì)表現(xiàn)發(fā)情征狀。這種方法顯然有一定的風(fēng)險(xiǎn)性，如果日期計(jì)算不準(zhǔn)，處于配種后21～28天的妊娠母豬，注射雌激素可誘導(dǎo)母豬假孕；如果劑量過大，也會(huì)使配種后17天的妊娠母豬妊娠中止；處于假孕狀態(tài)的母豬，用此方法也會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

3 直腸觸診法

由于初產(chǎn)母豬或接近臨產(chǎn)期的經(jīng)產(chǎn)母豬的骨盆腔和直腸通常很小，不利于檢查。此方法只適用于大型經(jīng)產(chǎn)母豬。操作者把手伸入直腸，如有糞便應(yīng)先掏出，觸摸子宮，妊娠子宮內(nèi)有羊水，子宮動(dòng)脈搏動(dòng)有力，而未妊娠子宮內(nèi)無羊水，彈性差，子宮動(dòng)脈搏動(dòng)很弱，很容易判斷是否妊娠。但如果檢查時(shí)誤把髂外動(dòng)脈或其分支之一當(dāng)作子宮中動(dòng)脈，則會(huì)造成假陽性診斷。此外，該法對(duì)技術(shù)人員的技術(shù)水平和經(jīng)驗(yàn)有較高的要求，且操作者體力消耗很大，又必須是大型經(jīng)產(chǎn)母豬，所以生產(chǎn)中較少采用。

4 超聲波診斷法

超聲診斷法是根據(jù)超聲波回聲來檢查妊娠的一種物理學(xué)診斷方法。

（1）B型超聲波診斷儀：B型超聲診斷儀可通過探查胎體、胎水、胎心搏動(dòng)及胎盤等來判斷妊娠階段、胎兒數(shù)、胎兒性別及胎兒狀態(tài)等。具有時(shí)間早、速度快、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)，但價(jià)格昂貴、體積大，只適用于大型豬場(chǎng)定期檢查。

（2）多普勒超聲波診斷儀：該儀器可通過測(cè)定胎兒和母體血流量、胎動(dòng)等做較早期診斷。當(dāng)周圍環(huán)境中有噪音干擾或直腸探查部位有糞便阻塞時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陰性診斷。此種方法一般需要用不同妊娠期探查的錄音進(jìn)行比照。

（3）A型超聲波診斷儀：是利用超聲波來檢查充滿積液的子宮，聲波從妊娠的子宮反射回來，并被轉(zhuǎn)換成聲音信號(hào)或示波器屏幕上的圖像，或通過二極管形成亮線。這種儀器體積較小，操作簡(jiǎn)便，幾秒鐘便可得出結(jié)果，適合基層豬場(chǎng)使用。但膀胱積液、子宮積膿和子宮內(nèi)膜水腫容易造成假陽性診斷結(jié)果。另外，這種診斷儀應(yīng)注意其應(yīng)用的對(duì)象，一些對(duì)大家畜使用的診斷儀應(yīng)用于豬時(shí)，可能會(huì)使所有的被測(cè)對(duì)象都呈陽性。

5 血小板計(jì)數(shù)法

血小板顯著減少是早孕的一種生理反應(yīng)，根據(jù)血小板是否顯著減少就可對(duì)配種后數(shù)小時(shí)至數(shù)天內(nèi)的母畜做出超早期妊娠診斷為胚胎附植前的妊娠診斷開辟了新的途徑。

在母豬配種當(dāng)天和配種后第1～11天從耳緣靜脈采血20μL置于盛有0.4mL血小板稀釋液的試管內(nèi)，輕輕搖勻，待紅細(xì)胞完全破壞后再用吸管吸取一滴充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)室內(nèi)，靜置15min后，在高倍鏡下進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。配種后第7天是進(jìn)行超早期妊娠診斷的最佳血檢時(shí)間，此時(shí)血小板數(shù)降到最低點(diǎn)（250±91.13）×103/mm3。

該方法雖有時(shí)間早、準(zhǔn)確率高等優(yōu)點(diǎn)，但應(yīng)排除某些疾病所導(dǎo)致的血小板減少。例如，肝硬化、貧血、白血病及原發(fā)性血小板減少性紫癜等。

6 激素測(cè)定法

妊娠母豬體內(nèi)激素發(fā)生變化，其中以孕酮（Progesterone，P4）的變化最為明顯，孕酮是黃體和胎盤分泌的一種類固醇激素，一個(gè)情周期表現(xiàn)由低逐日上升，15天達(dá)到高峰期其后下降，到19天左右降到最低水平0 ng/mL，維持1天左右，又逐漸上升。豬受孕后孕酮繼續(xù)維持較高水平，26～30天尿液孕酮達(dá)到0.05μg/mL應(yīng)用血清中的孕酮濃度來診斷妊娠，其靈敏度可高達(dá)97%以上。實(shí)驗(yàn)室操作錯(cuò)誤可能會(huì)導(dǎo)致診斷結(jié)果假陰性。

激素的測(cè)定可以采用放射免疫法或酶聯(lián)免疫反應(yīng)試驗(yàn)盒，這些方法準(zhǔn)確性較高，但存在一個(gè)明顯的限制條件就是需要采取血樣，較繁瑣，且費(fèi)用較高，一般用于進(jìn)行科學(xué)研究，不適用于商品豬場(chǎng)。

7 免疫膠體金快速檢測(cè)法

本法是針對(duì)激素測(cè)定的一個(gè)新方法，通過捕捉到母豬妊娠期孕酮周期性變化的規(guī)律，利用膠體金免疫層析法原理，以孕酮作為檢測(cè)目標(biāo)物，以孕酮水平判斷母豬是否妊娠。采用孕酮配對(duì)的單克隆抗體，使得靈敏度、特異性大大增強(qiáng)，利用膠體金免疫層析雙抗夾心法，在情周期的規(guī)律中能正確的表達(dá)準(zhǔn)確的診斷效果。取樣方便，直接取待測(cè)母豬尿液即可檢測(cè)。由于情周期孕酮的變化規(guī)律，此方法使用檢測(cè)的日期推薦在豬配種后第23天為最后一天檢測(cè)時(shí)間，配種后19、20、21、22天要密切觀察豬的行為表現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)豬有發(fā)情的表現(xiàn)應(yīng)立即進(jìn)行檢測(cè)，試劑板出現(xiàn)一條紅線為陰性，確定為未懷孕，要及時(shí)配種，可避免假發(fā)情情況。在此期間內(nèi)未出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)者，在配種后23天為最后檢測(cè)期限，在試劑板出現(xiàn)一條紅線為陰性，表示未懷孕，可避免由于乏情延誤診斷，出現(xiàn)兩條紅線為陽性，可確定豬已懷孕，應(yīng)進(jìn)入妊娠期管理。如果需要第2個(gè)情期復(fù)診，可在配種后的第40天左右進(jìn)行檢測(cè)，孕豬復(fù)查可在任何時(shí)期進(jìn)行。

豬早孕膠體金快速檢測(cè)試劑用于豬早期妊娠診斷，具有準(zhǔn)確率高、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)迅速、常溫儲(chǔ)存、攜帶方便、對(duì)母體和胎兒安全無害等特點(diǎn)，因此極具實(shí)用性及推廣應(yīng)用前景。 □

[1]張忠誠(chéng).家畜繁殖學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2006.

[2]劉太宇.家畜繁殖技術(shù)手冊(cè)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2009.

[3]張俊超,李君江,張平.母豬的發(fā)情鑒定、適時(shí)配種與妊娠診斷[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問,2008,(12):42.

[4]俞志成.家養(yǎng)母野豬的妊娠診斷[J].湖北畜牧獸醫(yī),2002,(2):21.

[5]林峰,淵錫藩.生殖激素制劑對(duì)母豬早期妊娠診斷效果研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001,23(l):82～86.

[6]王前.母豬的早期妊娠診斷[J].養(yǎng)豬,2000,(2)：11.

[7]馮現(xiàn)明.B型超聲診斷法在母豬懷孕鑒定中的應(yīng)用[J].中國(guó)豬業(yè),2005,(5):23～24.

[8]張道中,唐錦輝.利用醫(yī)用黑白B超判定母豬妊娠[J].今日養(yǎng)豬業(yè),2009,(3):35.

[9]李助南,郭良輝，程澤信.血小板計(jì)數(shù)法對(duì)母豬早期妊娠的診斷研究[J].湖北畜牧獸醫(yī),2006,(4):10～11.

[10]曹建輝.母豬妊娠的常用診斷技術(shù)[J].湖北畜牧獸醫(yī),2009,(9):36～37.