微板法全自動血型檢測影響因素探討

韓惠云 仝興明 竇茉莉

全自動樣本處理系統(tǒng)進(jìn)行正、反定型實(shí)現(xiàn)了ABO血型檢測的自動化、標(biāo)準(zhǔn)化，降低了工作人員的勞動強(qiáng)度，保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。但在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)由于多種因素的影響，微板法全自動血型檢測結(jié)果出現(xiàn)與試管標(biāo)記不符或正、反定型不符的現(xiàn)象時有發(fā)生，需要用試管離心法［1］做進(jìn)一步鑒定。如何最大限度地消除影響因素，提高全自動血型檢測設(shè)備一次判讀的準(zhǔn)確性，我們對此進(jìn)行了總結(jié)分析與探討。

1 材料與方法

1.1 資料來源 2009年4～12月無償獻(xiàn)血者20764人次，每人留取試管枸櫞酸鈉抗凝樣本5 ml，辨管抗凝樣本5 ml。

1.2 試劑 抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清(長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司);試劑紅細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司);以上試劑均經(jīng)中國藥品生物制品檢定所批檢合格，在有效期內(nèi)使用。

1.3 主要儀器 Xantus全自動血型儀(深圳愛康電子有限公司);STAR全自動樣本處理系統(tǒng)(瑞士HAMILTON公司);HTⅢ掃描酶標(biāo)儀(奧地利ANTHOS公司);Thermostar孵育振蕩器(奧地利ANTHOS公司);Labofuge 400臺式平板離心機(jī)(美國Beckman公司);KA-2200離心機(jī)(日本久保田公司);120孔梯形微板(日本奧林巴斯公司);96孔U型微板(丹麥Nunc公司)。

1.4 方法 梯形微板法進(jìn)行正定型:用全自動血型儀將試管樣本濃縮紅細(xì)胞10 μl連同生理鹽水200 μl一同加到預(yù)稀釋板中，充分混合后，每份樣本吸取50 μl加注2孔到梯形微板，再在每孔中分別加注具有工作濃度的抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清各25 μl，振蕩混勻，靜置反應(yīng)后，數(shù)字血型儀分析反應(yīng)圖像，根據(jù)ABO血型定型原則判定正定型結(jié)果。

U型微板法進(jìn)行反定型:用STAR全自動加樣系統(tǒng)將辮管樣本血漿50 μl加注2孔到U型微板，再在每孔中分別加注A、B試劑紅細(xì)胞懸液25 μl，振蕩混勻，離心、懸浮，稍許靜置，放入酶標(biāo)儀中掃描，根據(jù)ABO血型定型原則判定反定型結(jié)果。

1.5 結(jié)果判定 工作人員需目測微板上結(jié)果，與電腦中判讀的結(jié)果相對照，再與試管標(biāo)記結(jié)果對照，即電腦結(jié)果-目測結(jié)果-試管標(biāo)記結(jié)果三對照，均符合者正、反定型結(jié)果再互相印證、對照，均無疑問時按此結(jié)果發(fā)送報告，如有不符或可疑的，要用試管法對原樣或辮管進(jìn)一步做正、反定型，必要時洗滌紅細(xì)胞，根據(jù)情況放置4℃或37℃環(huán)境反應(yīng)，最終仍不能確定結(jié)果的送血型室鑒定。

1.6 質(zhì)量控制 每批試驗(yàn)均做試劑對照，即用A、B試劑紅細(xì)胞懸液分別與抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清反應(yīng)，以控制試劑質(zhì)量，并定期參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)量評價活動。

2 結(jié)果

通過對20764人次獻(xiàn)血者樣本的正、反定型，正定型一次判讀后與試管標(biāo)記結(jié)果不符需要復(fù)核的128例(0.62%)，反定型一次判讀后與試管標(biāo)記結(jié)果不符需要復(fù)核的142例(0.68%)，經(jīng)試管法復(fù)核后，正、反定型符合率為99.95%(20753/20764)，糾正ABO血型初篩定型錯誤11份，發(fā)現(xiàn)正、反定型不符樣本3例，其中2例為冷凝集反應(yīng)，1例為不規(guī)則抗體抗M所致。

3 討論

經(jīng)典的試管離心法目前仍被認(rèn)為是最可信賴的ABO定型方法，但是它操作費(fèi)時，且易出現(xiàn)人為差錯，故不適合采供血系統(tǒng)大批量樣本的檢測［2］。根據(jù)血站工作特點(diǎn)，微板法適合于大批量樣本的血型鑒定，只是對不符或可疑的樣本才進(jìn)一步做試管法確定。本試驗(yàn)微板法全自動血型檢測結(jié)果受多種因素的影響，出現(xiàn)與試管標(biāo)記不符或正、反定型不符的現(xiàn)象時有發(fā)生，正、反定型需要進(jìn)一步復(fù)核的均占一定比例，分別為0.62%和0.68%，反定型不符需要復(fù)核的多于正定型。發(fā)生的原因可能為:①反定型易受脂血、溶血因素影響，弱凝集狀態(tài)在離心振蕩過程中被破壞;②獻(xiàn)血者自身血型抗原、抗體較弱，凝集反應(yīng)不明顯;③工作人員粗心大意，觀察結(jié)果不細(xì)致，未發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果或未進(jìn)行試管法確定;④觀察結(jié)果時室內(nèi)光線不好，造成弱凝集標(biāo)本被遺漏;⑤血液標(biāo)本抗凝不好，本身帶有凝塊，影響加樣和結(jié)果判定;⑥血型微板反復(fù)使用，板底有磨損、劃痕或蛋白沉漬，不易清洗，影響判讀結(jié)果;⑦儀器試劑槽內(nèi)的試劑存放時間較長，反復(fù)使用，造成試劑效價降低出現(xiàn)漏檢;⑧試劑接近有效末期。

整改措施:①工作人員要嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，進(jìn)一步加強(qiáng)工作責(zé)任心，仔細(xì)核對，及時發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果，重復(fù)檢測，不怕麻煩，杜絕因疏忽大意造成的漏報和誤報;②增加觀察結(jié)果時的室內(nèi)光源，購買了讀片燈，將微板置于讀片燈上，保證了足夠的光線，便于目測觀察結(jié)果;③淘汰了長期使用的微板，逐步更新，使用后清洗要徹底;④及時更新試劑槽內(nèi)的試劑，每周至少一次將試劑槽內(nèi)殘余試劑倒掉，徹底清洗試劑槽后再倒入新鮮試劑，保證試劑的效價;⑤從源頭做起，標(biāo)本采集時要使試管和辨管內(nèi)的血液與抗凝劑充分混合，保證標(biāo)本達(dá)到要求的抗凝效果;⑥購買試劑紅細(xì)胞時盡量要求供貨商提供最新批號產(chǎn)品。這些措施的實(shí)施，經(jīng)過觀察，起到了明顯的作用。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.東南大學(xué)出版社，2006:246.

［2］劉達(dá)莊.免疫血液學(xué)//高峰.輸血與輸血技術(shù).人民衛(wèi)生出版社，2003:90-92.