多項式線性評價方案在分析測量范圍驗證中的應(yīng)用

肖 勤，陽 蘋，張莉萍，畢小云，鄧小玲，陳維蓓

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科 400016)

分析測量范圍(analytical measurement range，AMR)是檢驗方法的重要分析性能，在ISO 15189(醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則)及美國臨床病理家協(xié)會(CAP)的認(rèn)可中均明確提出須驗證定量檢測系統(tǒng)的AMR;因大多數(shù)檢驗方法習(xí)慣以單一標(biāo)準(zhǔn)來校準(zhǔn)結(jié)果，原則上應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線呈通過原點(diǎn)的直線才可作這樣的處理;呈不通過原點(diǎn)的直線關(guān)系時，至少應(yīng)使用兩點(diǎn)定標(biāo);呈拋物曲線狀時，應(yīng)使用多點(diǎn)定標(biāo)，在繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上查閱結(jié)果[1]，所以實驗室應(yīng)定期評估或驗證可報告范圍，為了評價反應(yīng)響應(yīng)是否有線性表現(xiàn)，有多種建議和意見[2-5]，本室利用廠家提供的線性驗證材料，采用多項式線性評價方案[6]進(jìn)行AM R驗證，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器 儀器:羅氏公司Hitachi Modular DDP生化分析儀;試劑:羅氏公司原裝試劑;校準(zhǔn)品:c.f.a.s(Calibrat or for Aut omated Systems)。

1.2 樣本 羅氏公司提供的PreciLinTM-S Solutions(Lot:58958967，Exp:2010-6)，包括3組系列濃度樣品，第 1組包含6個水平的總蛋白、清蛋白、膽固醇分析物，第2組包含6個水平的三酰甘油、鐵、鎂的分析物，第3組包含6個水平尿酸的分析物;各水平之間的分析物含量呈已知的相互關(guān)系，分析物含量涵蓋整個分析測量范圍。

1.3 檢測方法 用c.f.a.s校正分析檢測系統(tǒng)，各分析項目室內(nèi)質(zhì)量控制為在控，分別測定PreciLinTM-S Solutions樣本中各項目3次。其中 TP、ALB、UA、TG和 TC等5個項目可分別在2個D模塊測定，結(jié)果以 D1、D2區(qū)別，Mg在 P模塊測定。

1.4 結(jié)果計算 計算3次測定結(jié)果的平均值，并根據(jù)驗證物質(zhì)說明書中提供的各項目理論值的計算方式計算各標(biāo)本中待測物的理論值。

1.5 線性評價數(shù)據(jù)擬合 利用SPSS11.5軟件將線性分析中測定結(jié)果分別擬合為1次(b0+b1x)、2次(b0+b1x+b2x2)和3次(b0+b1x+b2x2+b3x3)多項式，判斷各級多項式的系數(shù)是否有統(tǒng)計學(xué)意義，從而得到最適多項式。

1.6 結(jié)果判斷 如數(shù)據(jù)組的最佳擬合多項式為1次多項式，該數(shù)據(jù)組為純統(tǒng)計線性(線性1)。當(dāng)數(shù)據(jù)組最佳擬合多項式是2次或3次多項式，將最佳擬合的多次方多項式與1次多項式(a+bx)進(jìn)行比較，計算其偏離直線平均差異(average deviati on fr om linearity，ADL)并與百分區(qū)界(percent bound，Pct Bnd)比較，一般將Pct Bnd定義為5%。如ADL小于所要求的臨界判斷值，則多次方多項式定義為臨床可接受的線性(線性2)，否則為非線性。

2 結(jié) 果

2.1 第1次測定結(jié)果如表1所示，TC、TG、UA、和Mg為線性1，而TP和ALB呈非線性。

表1 各評價項目數(shù)據(jù)擬合結(jié)果

表2 采取糾正措施后的TP、ALB數(shù)據(jù)擬合結(jié)果

圖1 糾正前ALB

圖2 糾正后ALB

圖3 糾正前TP

2.2 不滿意項目對儀器進(jìn)行保養(yǎng)及進(jìn)行更換試劑，重新校準(zhǔn)后再次測定驗證標(biāo)本，評價結(jié)果為這兩個項目均為線性1，結(jié)果見表2;采取糾正措施前后兩次的線性分析結(jié)果見圖1～4。

圖4 糾正后TP

3 討 論

定量檢測項目AM R的驗證是驗證廠家說明書上所標(biāo)明的線性范圍，在實際工作中對于檢測結(jié)果非常重要。為了評價反應(yīng)響應(yīng)結(jié)果是否具線性表現(xiàn)，有多種意見和建議，CAP和我國衛(wèi)生部臨床檢驗中心都相繼開展了評價線性與校準(zhǔn)驗證的活動，均采用多項式線性評價方案，將統(tǒng)計中的非線性數(shù)據(jù)與臨床可接受的相關(guān)性有機(jī)地結(jié)合起來，大大提高了臨床實驗室對檢測項目線性評價的有效性，是目前較全面實用的線性評價方案[7-10]。

本實驗室也參加了衛(wèi)生部臨床檢驗中心的該項室間質(zhì)評活動，但該項質(zhì)評活動每年僅有1次，不能滿足實驗室對于校準(zhǔn)及校準(zhǔn)驗證的要求，所以本實驗室探索使用羅氏的線性驗證材料進(jìn)行評價，每個項目組由6個已知分析物含量間關(guān)系的標(biāo)本組成，每份標(biāo)本重復(fù)測定3次，利用分析物之間的相互關(guān)系計算理論值，用S PSS11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)擬合，可以得到數(shù)據(jù)擬合的3級多項式、擬合圖形和方差分析結(jié)果，判斷各級多項式的系數(shù)是否有統(tǒng)計學(xué)意義，從而得到各檢驗項目的最適多項式。采用該方法進(jìn)行線性評價可及時分析測定結(jié)果，對于性能不可接受的項目能及時采取糾正措施，如本室第1次 TP和ALB評價結(jié)果為非線性，從圖1和圖3可以看出實測結(jié)果與理論值間呈拋物線關(guān)系，即使棄去高濃度或低濃度后重新評價仍為非線性，提示應(yīng)分析性能不佳的原因，因該線性驗證材料為液體即開即用型，不可能發(fā)生準(zhǔn)備或保存不當(dāng)?shù)那闆r，可基本排除分析前因素的影響;經(jīng)再次核對檢測結(jié)果后未發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)記錄錯誤，數(shù)據(jù)處理符合要求，也可排除分析后因素;將重點(diǎn)放在查找分析中原因，發(fā)現(xiàn)機(jī)上試劑已接近廠家提供的試劑開瓶后穩(wěn)定期，遂更換試劑，重新校準(zhǔn)后測定驗證材料，得到了滿意的結(jié)果，提示需特別重視試劑開瓶后的穩(wěn)定性。

本次驗證結(jié)果表明被評價項目在評價的濃度范圍內(nèi)是呈線性的，可用單點(diǎn)定標(biāo)做校準(zhǔn)，但在6個月后以及有下列情況發(fā)生時應(yīng)進(jìn)行一次校驗，如儀器或檢測系統(tǒng)進(jìn)行過一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件;質(zhì)控反映出異常趨勢或偏移，或者超出了實驗室規(guī)定的接受限，采取一般性糾正措施后，不能識別和糾正問題時。最后特別強(qiáng)調(diào)所有進(jìn)行過的校準(zhǔn)和在進(jìn)行校準(zhǔn)驗證工作時必須記錄并寫成文件。

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