山西省黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性檢測

趙曉軍 張 鑫 周建波

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，山西太原 030031）

灰霉病是保護(hù)地黃瓜的主要病害之一，給黃瓜生產(chǎn)造成了很大損失。黃瓜灰霉病主要為害黃瓜的幼瓜和葉片，病菌從雌花的花瓣侵入，花瓣腐壞，瓜蒂頂端開始發(fā)病，瓜蒂感病向內(nèi)擴(kuò)展，致使感病果實(shí)呈灰白色，軟腐，長出大量灰綠色霉菌層（孫茜一，2006）。目前控制該病害的主要手段仍為化學(xué)防治，二甲酰亞胺類殺菌劑腐霉利是國外20世紀(jì)70年代開發(fā)的對灰葡萄孢有高度活性的一類殺菌劑。20世紀(jì)80年代引入我國后，作為對灰葡萄孢的高效殺菌劑，二甲酰亞胺類殺菌劑取代了苯并咪唑類殺菌劑而得到廣泛應(yīng)用，曾有過較好的防效，但在我國很多地區(qū)已有灰霉菌對其產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道（劉波和葉鐘音，1992；黃金寶和李明遠(yuǎn)，1994；李林和徐作埏，1997；劉德榮和謝丙炎，2001）。

山西省保護(hù)地蔬菜種植歷史長，面積廣，近年來呈逐年增長趨勢。黃瓜作為保護(hù)地蔬菜種植的重要品種，種植面積也快速增加，然而黃瓜灰霉病的普遍發(fā)生卻嚴(yán)重影響了黃瓜的產(chǎn)量。腐霉利作為當(dāng)?shù)氐某Ｓ盟巹盟帤v史較長，田間防治效果明顯下降，究其原因可能是灰霉病菌對此類藥劑產(chǎn)生了抗藥性，早在2003年韓巨才等（2003）對山西省蔬菜類灰霉病菌進(jìn)行了腐霉利的抗藥性監(jiān)測，本試驗(yàn)檢測了近年來山西省黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平，以期為黃瓜生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

96 %腐霉利原藥，由浙江禾益農(nóng)化有限公司提供。

1.2 供試菌株的采集、分離和鑒定

從山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)采集黃瓜灰霉病病果和病葉，以大棚或溫室為單位采集病樣，一個(gè)大棚或溫室采集一個(gè)典型病果或病葉，菌樣以“采樣地點(diǎn)（縣或村）的大寫拼音（聲母）+序號”命名。

將病樣帶回實(shí)驗(yàn)室，在無菌操作條件下純化保存菌種，以進(jìn)行病原菌抗藥性室內(nèi)生物測定。

參照魏景超（1979）的方法鏡檢灰霉病菌株?；颐共【鷮侔胫鷣嗛T葡萄孢屬真菌，其分生孢子梗直或屈曲，褐色，光滑，分枝，分枝末端常明顯膨大，形成無色或淡色的瓶狀產(chǎn)孢細(xì)胞。產(chǎn)孢細(xì)胞多芽生，分生孢子圓形至橢圓形，單細(xì)胞，無色或灰色，大?。?.50～16.00）mm×（5.00～9.25）mm，聚集成灰色孢子堆（魏景超，1979；呂佩柯 等，1992）。

1.3 供試藥劑的配制

腐霉利原藥以丙酮為溶劑配成濃度為1 000 μg·mL-1的母液，后用無菌水分別稀釋為500、100、10、1、0.5、0.1 μg·mL-1的系列濃度溶液。

1.4 含藥PDA培養(yǎng)基的制作

馬鈴薯去皮切成小塊稱取定量，加水煮沸30 min后用雙層紗布過濾去渣，取上清液定容。再加入葡萄糖，煮沸直至完全融化后加入瓊脂粉，攪拌待完全融化后分裝到三角瓶中。分裝時(shí)，三角瓶中培養(yǎng)基與藥液體積比為9∶1，對照以蒸餾水代替藥液，封口濕熱滅菌后即可使用。

1.5 抗藥性室內(nèi)生物測定方法

首先將冷凝的含藥培養(yǎng)基溶化，然后冷卻至 50～60 ℃后在無菌條件下將含藥培養(yǎng)基倒入直徑9 cm的培養(yǎng)皿中鋪平，每皿約10 ML，每處理設(shè)3次重復(fù)。

測定灰霉病菌的抗性水平采用 FAO推薦的菌落生長速率法（周明國 等，1987），用直徑5 mm的打孔器沿灰霉菌菌落生長邊緣切取菌塊，分別放入系列濃度含藥培養(yǎng)基平板中心。23～25 ℃條件下培養(yǎng)3 d后用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算各菌株對腐霉利的EC50值，分析其抗性水平。

1.6 抗性頻率、抗性水平和抗性類型

根據(jù)抗性水平將不同的黃瓜灰霉病菌株分為5個(gè)類型:敏感型（S），抗性水平＜1倍；低抗型（LR），1倍≤抗性水平＜10倍；中抗型（MR），10倍≤抗性水平＜100倍；高抗型（HR），100倍≤抗性水平＜1 000倍；特高抗型（SR），抗性水平≥1 000倍。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株采集分離

分別于山西省8個(gè)地區(qū)的黃瓜主要種植區(qū)進(jìn)行采樣，并分離得到177株黃瓜灰霉病菌株。其中太原市15株，晉中市25株，長治市24株，臨汾市19株，運(yùn)城市34株，晉城市26株，朔州市23株，大同市11株。

2.2 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

根據(jù)周明國和葉鐘音（1991）的研究結(jié)果，將黃瓜灰霉病菌對腐霉利的敏感基線定為1 μg·mL-1。如表1、2所示，在檢測的177株菌株中有敏感菌株34株，低抗菌株76株，中抗菌株64株，高抗菌株3株，無特高抗菌株。所測灰霉病菌株對腐霉利的抗性水平最高 256.6倍，最低0.003倍，平均抗性水平13.9倍，其中太原市20.1倍、晉中市21.1倍、長治市26.5倍、臨汾市 12.3倍、運(yùn)城市 13.6倍、晉城市7.0倍、朔州市3.5倍、大同市3.5倍。

表1 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

續(xù)表

2.3 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率

本試驗(yàn)所檢測的177株黃瓜灰霉病菌株中有34株敏感菌株，143株抗性菌株，對腐霉利的總體抗性頻率為 81.36 %。各地區(qū)黃瓜灰霉病菌株對腐霉利的抗性頻率分別為:太原市53.33 %、晉中市84.00 %、長治市100.00 %、臨汾市78.95 %、運(yùn)城市85.29 %、晉城市84.62 %、朔州市69.57 %、大同市81.82 %（圖1）。

表2 山西省各地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

圖1 山西省各地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率

3 結(jié)論與討論

由本試驗(yàn)結(jié)果可知:從抗性頻率來看，山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利普遍產(chǎn)生抗藥性，各調(diào)查地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率均在50 %以上，其中長治市最高，運(yùn)城市次之，之后依次為晉城市、晉中市、大同市、臨汾市、朔州市、太原市；從抗性水平來看，山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利的總體抗性水平較低，各調(diào)查地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平有所差異，其中長治市最高、晉中市次之，之后太原市、運(yùn)城市、臨汾市、晉城市，大同市及朔州市抗性水平依次降低。

山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利普遍產(chǎn)生了抗藥性，但抗性水平較低，分析原因:山西省保護(hù)地黃瓜種植歷史較長，種植戶普遍使用主要成分為乙霉威和腐霉利的藥劑防治黃瓜灰霉病，且出現(xiàn)了用藥過量和過頻的現(xiàn)象，導(dǎo)致了保護(hù)地黃瓜灰霉病菌普遍對腐霉利產(chǎn)生抗藥性；山西省北部地區(qū)相對南部地區(qū)抗性水平較低，分析原因:北部地區(qū)氣溫偏低，往年僅在夏季大田種植蔬菜，蔬菜生長季間隔期長，灰霉病發(fā)生較少。近幾年，隨著保護(hù)地蔬菜種植面積不斷擴(kuò)大，為灰霉病菌的發(fā)生和流行提供了有利條件，蔬菜灰霉病發(fā)生日趨嚴(yán)重，農(nóng)藥使用頻率也不斷提高，經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，北部地區(qū)的蔬菜種植戶過頻地使用腐霉利進(jìn)行煙熏或噴霧，從而導(dǎo)致灰霉病菌對其普遍產(chǎn)生了抗藥性，但相對南部和中部地區(qū)發(fā)病較輕，用藥相對較少，用藥歷史較短，所以灰霉病菌的抗性水平相對較低。中部地區(qū)如太原市從抗性水平上看和南部地區(qū)差不多，因?yàn)橛幸粋€(gè)樣本抗性水平極高，造成平均數(shù)上揚(yáng)，但抗性頻率較南部地區(qū)低，總體上相對于南部地區(qū)較低。所以山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利抗藥性呈由南到北逐漸降低的趨勢。

盡管山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利的總體抗性水平較低，但已普遍產(chǎn)生了抗藥性，因此黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗藥性已成為山西省保護(hù)地黃瓜生產(chǎn)上的一個(gè)重要問題，開展保護(hù)地黃瓜灰霉病菌對二甲酰亞胺類殺菌劑的抗藥性治理勢在必行。病原菌抗藥性治理一般采用的治理策略有:① 加強(qiáng)田間抗藥性監(jiān)測；② 科學(xué)使用農(nóng)藥，減少甚至停用已產(chǎn)生抗藥性的同類型藥劑，尋求新的替代類型，以及合理進(jìn)行殺菌劑的輪換和混配；③ 開展綜合防治。該項(xiàng)工作是一項(xiàng)長期而艱巨的任務(wù)，主要表現(xiàn)在周期長、見效慢、需地區(qū)間統(tǒng)籌規(guī)劃，值得進(jìn)一步深入探討。

韓巨才，閆秀琴，閻秀琴，張永杰．2003．灰霉病原菌對速克靈的抗性監(jiān)測．山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，23（4）:299-303.

黃金寶，李明遠(yuǎn)．1994．不同地區(qū)灰霉病菌對速克靈的抗性及對策．中國植病學(xué)會華北分會論文集:54.

李林，徐作埏．1997．山東省灰霉菌對速克靈、多菌靈田間抗性檢測研究初報(bào)．山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，（3）:32-35.

劉波，葉鐘音．1992．速克靈抗性灰霉病菌菌株性質(zhì)的研究．植物保護(hù)學(xué)報(bào)，19（4）:29-30.

劉德榮，謝丙炎．2001．應(yīng)用特異等位PCR快速鑒定灰霉病菌抗苯來特與乙霉威菌株．菌物系統(tǒng)，20（2）:238-243.

呂佩柯，李明遠(yuǎn)，吳鋸文，易齊，張寶棣，姜克英，文奇，李明周，王潤初．1992．中國蔬菜病蟲原色圖譜．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社:6-13.

孫茜一．2006．黃瓜疑難雜癥圖片對照診斷與處方．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社:14-15.

魏景超．1979．真菌鑒定手冊．上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社:259-516.

周明國，葉鐘音，劉經(jīng)芬．1987．南京市郊灰霉菌對苯并咪唑類殺菌劑田間抗性的檢測．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，（2）:53-57.

周明國，葉鐘音．1991．交鏈孢霉對速克靈的抗藥性研究．植物保護(hù)，17（2）:6-7.