新城疫抗體水平與免疫保護相關(guān)性試驗

汪文斌,張小榮,焦庫華,吳艷濤

(揚州大學獸醫(yī)學院農(nóng)業(yè)部畜禽傳染病學重點開放實驗室,江蘇 揚州 225009)

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽類的一種急性、高度接觸性傳染病,給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。免疫接種是控制ND的重要措施,而科學合理的免疫程序是確保免疫效果的關(guān)鍵。隨著疫苗的廣泛應用,近年來ND的流行已得到明顯控制。但由于我國養(yǎng)殖模式多樣,生物安全水平不一,以及免疫程序混亂,免疫雞群仍經(jīng)常發(fā)生ND[1-4]。本試驗從免疫保護抗體水平臨界值、疫苗的免疫期等方面研究了影響ND免疫程序的因素,為制定合理的免疫程序提供依據(jù)。

1 材料

1.1 疫苗與抗原 NDV標準抗原和陽性血清購自中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所,用于測定NDV HI抗體效價。ND活疫苗(LaSota株):武漢中博生化有限公司,獸藥生字(2006)170262007;ND滅活疫苗:齊魯動物保健品有限公司,獸藥生字(2006)150252008。

1.2 儀器和設備 96孔V形血凝板,定量移液器,微型振蕩器,恒溫箱,離心機,水浴鍋等。

1.3 SPF雞胚及試驗雞 SPF種蛋購自山東家禽研究所;1日齡伊莎(褐)雛雞250羽,購自無錫種雞場有限公司。

2 方法

2.1 NDV強毒株的ELD50測定 將NDV F48E9強毒株(本室保存)經(jīng)SPF雞胚復蘇后,按文獻[5]測定其ELD50。

2.2 免疫保護抗體臨界值的確定

2.2.1 母源抗體對雛雞的保護 將100羽1日齡雛雞隨機分成 A、B、C、D、E 5組,每組 20羽。當NDV HI抗體上升到峰值后相應下降為8、6、4、2和0左右時,經(jīng)頸部皮下注射NDV F48E9強毒株,105ELD50/羽。攻毒后第3天和第5天采集泄殖腔棉拭子,分離病毒,方法見文獻[6]。

2.2.2 疫苗免疫抗體對雞群的保護 取60羽1日齡雛雞,在7日齡時經(jīng)頸部皮下注射ND滅活疫苗0.2mL/羽,27日齡分別經(jīng)頸部皮下接種ND滅活疫苗0.5mL/羽、經(jīng)滴鼻和點眼接種ND活疫苗2頭份/羽。從最后一次免疫開始,每周隨機采集10份血樣,檢測血清中 NDV HI抗體,方法見文獻[5]。根據(jù)檢測結(jié)果,將上述試驗雞隨機分為F、G、H 3組,每組20羽,分別于 NDV HI抗體上升到峰值后下降為6、4和2左右時,注射NDV F48E9強毒株,107ELD50/羽。攻毒后第3天和第5天采集泄殖腔棉拭子,分離病毒。

2.3 疫苗免疫期的觀察 將40羽1日齡雛雞隨機分成2組。34日齡時經(jīng)檢測NDV HI抗體為0,2組試驗雞分別經(jīng)頸部皮下接種ND滅活疫苗0.5mL/羽和滴鼻免疫活疫苗2頭份/羽,此后每周隨機采集10份血樣,檢測血清中NDV HI抗體。

2.4 母源抗體的監(jiān)測 30羽1日齡雛雞,從1日齡起每天采血1次,1周齡后每隔1 d采血1次,每次隨機采集15份血樣,檢測血清中NDV HI抗體,直至母源抗體消失。

3 結(jié)果

3.1 NDV強毒株的ELD50 每0.1mL F48E9的尿囊液其病毒含量為108.78ELD50。

3.2 免疫保護抗體臨界值 ND母源抗體以及疫苗免疫抗體對NDV強毒攻擊的保護效果見表1和表2。從表中可看出,當抗體效價＞6時,攻毒保護率均為100%,且在攻毒后第3天第和第5天未檢出泄殖腔排毒;當抗體效價在4至6之間時,攻毒保護率均為100%,但有少量雞被檢出泄殖腔排毒;當抗體效價＜4時,攻毒保護率為0%～85%,攻毒后排毒檢出率為40%～100%。

3.3 疫苗的免疫期 ND滅活苗和弱毒活疫苗的免疫期觀察結(jié)果見圖1。ND滅活疫苗免疫后1周內(nèi)沒有檢測到HI抗體,2周后上升為5.8,6周后達到峰值9.2,之后隨著日齡增加緩慢下降,至23周時為3.8。在抗體監(jiān)測期間,從免疫后2周開始,抗體合格率(當抗體≥5時判定為合格,以下同)都在90%以上,直到免疫后19周抗體合格率降到75%以下。

ND活疫苗免疫雞1周后HI抗體平均為4.4,免疫后2周達到峰值6.6,免疫后5周迅速下降到4.5,之后維持在4～4.5;免疫后17周抗體水平降為3.9。在抗體監(jiān)測期間,除免疫后第2周和第3周抗體合格率分別為100.0%、80.0%外,其他時間段的抗體合格率都在75.0%以下,其中從免疫后19周開始抗體合格率降為0。

表1 新城疫母源抗體對強毒攻擊的保護試驗

表2 新城疫免疫抗體對強毒攻擊的保護試驗

3.4 母源抗體的消長規(guī)律 1日齡雛雞HI抗體平均為9.4,3日齡時上升至峰值10.4,之后隨著日齡增加抗體緩慢下降,17日齡時為4.4,19日齡和27日齡時分別降為3.5和0.9,34日齡時抗體降為0。

4 討論

許多學者曾研究了新城疫的免疫保護抗體臨界值,但結(jié)論不一[6-7]。本試驗中,母源抗體以及疫苗免疫抗體≥4時對F48E9強毒株的攻擊可提供完全的保護,且能有效地抑制泄殖腔排毒;而抗體水平＜4時不能提供完全的免疫保護,泄殖腔排毒現(xiàn)象嚴重。所以對NDV強毒株的攻擊,抗體水平為4仍然是起免疫保護作用的臨界值。

隨著疫苗的廣泛應用,近年來ND的暴發(fā)流行已明顯受到控制,但經(jīng)常在免疫雞群中出現(xiàn)以產(chǎn)蛋下降為主要癥狀的非典型新城疫。導致其發(fā)生的因素有很多,NDV強毒在養(yǎng)殖場長期存在得不到凈化,一旦動物機體抵抗力下降或在應激下便容易發(fā)病。從本試驗的攻毒后排毒檢測結(jié)果來看,當ND母源抗體平均值為4.9時對F48E9強毒株的攻擊,雖然可提供完全保護,但不能完全抑制泄殖腔排毒。這提示我們,在評價疫苗效果時,不能簡單地只看攻毒保護率高低,還應結(jié)合疫苗對野毒排出體外的抑制能力等做出綜合判斷。

疫苗免疫期的動態(tài)觀察結(jié)果顯示,兩種疫苗的免疫期(HI抗體≥4以上的時間,以下同)都達到了15周。這提示我們,并非免疫次數(shù)越多而效果越好,而應根據(jù)抗體監(jiān)測結(jié)果,適時加強免疫,才能避免抗體干擾獲得良好的免疫保護。

從監(jiān)測結(jié)果可以看出,母源抗體于1日齡時便可檢測到,隨后很快上升,3日齡達到峰值,之后隨著日齡增加抗體緩慢下降,19日齡時抗體降為4以下,而維持在4以上的時間長達17 d,這與文獻[8]報道的結(jié)果相似。在1～3日齡,由于雛雞不斷從體內(nèi)卵黃囊獲取了大量的免疫球蛋白,使得母源抗體水平升高,但吸收完畢后隨著雛雞的生長,母源抗體水平又不斷下降。從本試驗結(jié)果來看,建議ND的首免時間為15～17日齡,但各個雞場(群)應根據(jù)母源抗體監(jiān)測的實際結(jié)果來確定首免日齡。

在生產(chǎn)中,需要結(jié)合實際情況,發(fā)揮ND滅活疫苗和低毒力活疫苗各自的優(yōu)勢,給雞群提供良好的免疫保護。對于雛雞和產(chǎn)蛋高峰期蛋雞,多采用低毒力活疫苗,其原因是短期內(nèi)快速產(chǎn)生的免疫可為雞群提供及時的保護,而產(chǎn)蛋雞也不至于因滅活疫苗接種引起的應激導致產(chǎn)蛋下降。ND滅活疫苗可刺激機體產(chǎn)生高抗體水平并維持較長時間,多用于加強免疫以及產(chǎn)蛋前的雞群。

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