鉛染毒和新城疫疫苗免疫對(duì)蛋用鵪鶉血清甲狀腺激素(T3、T4)、生長(zhǎng)激素和皮質(zhì)醇含量的影響

龐有志,趙德明,趙淑娟,李宏偉

(1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,河南 洛陽(yáng) 471003;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,北京 海淀 100193)

甲狀腺激素〔三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲狀腺素(thyroxine,T4)〕、生長(zhǎng)激素(growth hormone,GH)和皮質(zhì)醇(cortisol)是控制脊椎動(dòng)物包括鳥類生長(zhǎng)、發(fā)育、組織分化、新陳代謝和體溫調(diào)節(jié)等許多生理過(guò)程幾種重要的激素[1]。動(dòng)物在應(yīng)激狀態(tài)下這幾種激素往往要發(fā)生比較明顯的變化,因此血液中這幾種激素的變化常作為檢測(cè)動(dòng)物應(yīng)激反應(yīng)的重要指標(biāo)。關(guān)于鵪鶉正常發(fā)育情況下的甲狀腺激素和生長(zhǎng)激素的變化規(guī)律已有報(bào)道[2],但對(duì)應(yīng)激情況下上述激素在血液中的變化情況研究較少。鉛和新城疫(ND)疫苗都是鵪鶉生產(chǎn)中的常見應(yīng)激源,在鉛和ND疫苗免疫等應(yīng)激因素的存在下,鵪鶉血液中上述激素的變化情況尚未見有報(bào)道。本研究以蛋用黃羽鵪鶉為研究對(duì)象,通過(guò)設(shè)計(jì)不同的鉛處理水平和ND疫苗免疫狀況,來(lái)檢測(cè)鵪鶉血液中有關(guān)激素含量的變化,為建立鵪鶉應(yīng)激模型提供重要的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)鵪鶉來(lái)自河南省武陟縣小徐崗村黃羽鵪鶉育種基地,隨機(jī)選取90只14日齡黃羽鵪鶉,按2×5因子設(shè)計(jì),隨機(jī)等分到每個(gè)試驗(yàn)組中。試驗(yàn)分為新城疫(ND)疫苗免疫組和未免疫組,每組又按飲水中的醋酸鉛濃度分為0 mg/kg,50 mg/kg,500 mg/kg,1000 mg/kg和2000 mg/kg 5個(gè)水平。免疫組于14日齡用新城疫Ⅳ疫苗點(diǎn)眼、滴鼻接種,每只鵪鶉0.1mL,至30日齡以同樣的方法進(jìn)行二免,鉛染毒從15日齡開始,至50日齡結(jié)束,試驗(yàn)鵪鶉的管理與試驗(yàn)設(shè)計(jì)同見文獻(xiàn)[3]。

1.2 試劑與儀器 三碘甲腺原氨酸(T3)試劑盒,甲狀腺素(T4)試劑盒和皮質(zhì)醇試劑盒購(gòu)自北京原子高科核技術(shù)應(yīng)用股份有限公司,生長(zhǎng)激素(GH)試劑盒購(gòu)自深圳拉爾文生物工程技術(shù)有限公司。Cap-Ria16型γ計(jì)數(shù)儀(西安利亞電子儀器有限公司),GL10-2.4A離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。

1.3 測(cè)定方法 試驗(yàn)鵪鶉于鉛染毒第35天(50日齡),頸動(dòng)脈放血,每只收集4～5mL血液,靜止30 min～60 min,讓其自然凝固,3000 r/min離心,分離血清。T3、T4、皮質(zhì)醇和生長(zhǎng)激素的測(cè)定均按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行放射免疫法測(cè)定,測(cè)定工作由河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院放射科協(xié)作完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行雙因子方差分析,并進(jìn)行Duncan′s多重檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 鉛染毒和ND免疫后血清T3和T4的含量見表1。經(jīng)方差分析,免疫組血清T3濃度高于未免疫組(P＜0.01),不同鉛染毒組間差異不顯著(P＞0.05)。免疫和鉛染毒之間交互作用不顯著(P＞0.05)。

血清T4含量在免疫組與未免疫組間以及免疫和鉛染毒交互作用均不顯著(P＞0.05)。但對(duì)鉛染毒組間進(jìn)行多重比較分析,50 mg/kg組T4含量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05),500 mg/kg,1000 mg/kg,2000 mg/kg組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),三組間差異不顯著。

ND免疫組 T4/T3比值顯著低于未免疫組(P＜0.01),不同鉛染毒組差異不顯著(P＞0.05),免疫和鉛染毒之間的交互作用不顯著(P＞0.05)。多重比較分析,不同鉛濃度組T4/T3比值由高到低可分為 0 mg/kg＞1000 mg/kg、500 mg/kg、50 mg/kg＞2000 mg/kg三個(gè)顯著性等級(jí)組,50 mg/kg、500 mg/kg和1000 mg/kg三組差異不顯著。

2.2 鉛染毒和ND免疫后血清皮質(zhì)醇和生長(zhǎng)激素的含量 見表1。經(jīng)方差分析,皮質(zhì)醇和生長(zhǎng)激素在血清中的含量無(wú)論在免疫和未免疫組間還是不同鉛濃度組間均不存在顯著性差異(P＞0.05),免疫和鉛染毒之間的交互作用也不顯著(P＞0.05)。

表1 試驗(yàn)鵪鶉血清甲狀腺素、皮質(zhì)醇和生長(zhǎng)激素的含量(均值±標(biāo)準(zhǔn)差) 單位:ng/mL

3 討論

鳥類血漿中甲狀腺激素的濃度與甲狀腺發(fā)育的階段有關(guān),鵪鶉屬于早成鳥類,在胚胎發(fā)育的后半期和出殼前后處于甲狀腺的活性增強(qiáng)期,血漿甲狀腺激素濃度升高[1]。Schew W A等[4]研究發(fā)現(xiàn),血漿中T3和T4兩種激素的濃度在出殼后有相似的變化規(guī)律,即T3和T4在出殼的頭兩天較低,以后迅速升高,8日齡左右達(dá)到高峰以后開始下降。14日齡下降到一個(gè)較低的水平,逐步上升到成年鵪鶉的水平后基本上保持穩(wěn)定。限制飼養(yǎng)可以顯著降低T3的血漿濃度,但對(duì)T4的影響在不同階段表現(xiàn)不同。本研究發(fā)現(xiàn),醋酸鉛對(duì)鵪鶉的血清 T3濃度無(wú)顯著影響,但ND疫苗免疫可顯著提高血清T3濃度(P＜0.01)。作者曾發(fā)現(xiàn)[5],ND疫苗免疫對(duì)鵪鶉造成的應(yīng)激在生長(zhǎng)發(fā)育方面主要體現(xiàn)在免疫后的第1～2周,此期間免疫組鵪鶉的體重和增重均較未免疫組低,二次免疫(30日齡)對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的影響已不明顯。而本研究是在試驗(yàn)35 d后50日齡進(jìn)行的測(cè)定,免疫組T3濃度仍然高于未免疫組,這是否說(shuō)明T3可以作為檢測(cè)鵪鶉新城疫疫苗免疫應(yīng)激的一個(gè)指標(biāo)值得進(jìn)一步研究。

本研究發(fā)現(xiàn)ND疫苗免疫不影響鵪鶉血清T4濃度,但鉛對(duì)鵪鶉血清T4的影響比較復(fù)雜,可以看出,不僅T3和T4在相同的應(yīng)激因素下有不同的變化規(guī)律,就是T3或T4在單一因素條件下由于應(yīng)激源作用強(qiáng)度不同也會(huì)出現(xiàn)不同的反應(yīng)。進(jìn)一步分析T4/T3比值發(fā)現(xiàn),隨著鉛濃度的增高,T4/T3比值有下降的趨勢(shì)。相比T3、T4單獨(dú)的變化來(lái)講,考察T4/T3的比值的變化更能體現(xiàn)出一定的規(guī)律性。

皮質(zhì)醇是一種重要的糖皮質(zhì)激素,它和皮質(zhì)酮一道共同調(diào)節(jié)機(jī)體的新陳代謝。正常生理?xiàng)l件下,皮質(zhì)醇比皮質(zhì)酮要活躍得多。本研究發(fā)現(xiàn),ND疫苗免疫和鉛染毒對(duì)血液中的皮質(zhì)醇含量均沒有顯著的影響。表明皮質(zhì)醇的變化作為檢測(cè)鵪鶉鉛中毒應(yīng)激指標(biāo)是不靈敏的。

鳥類生長(zhǎng)激素的分泌有一定規(guī)律,出殼后GH的分泌高峰出現(xiàn)在生長(zhǎng)速度最快的時(shí)期,以后隨著個(gè)體的發(fā)育逐漸下降,其變化基本上與相對(duì)生長(zhǎng)率相一致。無(wú)論是早期限飼(3～13 d)或是晚期限飼(20～30 d)均不能明顯改變?nèi)毡均g鶉血漿GH的濃度[6]。Schew W A[4]等研究發(fā)現(xiàn),鵪鶉血清GH 濃度是在7日齡達(dá)到高峰,此時(shí)體重相當(dāng)于成年體重的9%,但有研究表明,低蛋白日糧和限制飼養(yǎng)可以誘導(dǎo)禽類GH的分泌,血液中GH濃度增加[7]。本研究發(fā)現(xiàn),免疫和鉛染毒對(duì)鵪鶉血清GH濃度均沒有顯著的影響。我們認(rèn)為鵪鶉生長(zhǎng)激素分泌更多的是遵循自身的分泌規(guī)律,而較少受到環(huán)境中應(yīng)激因素的影響。

本研究將不同濃度的醋酸鉛水溶液通過(guò)飲水方式連續(xù)染毒35 d,從存活的這73只鵪鶉的生長(zhǎng)發(fā)育來(lái)看,應(yīng)該都已進(jìn)入了應(yīng)激的適應(yīng)階段。本試驗(yàn)中測(cè)定的這幾種激素,除T4以外,其他3種激素并沒有反映出鉛染毒組不同濃度的差異,這一方面反映了鵪鶉對(duì)鉛有極大的耐受性;另一方面,說(shuō)明有些激素如T3、皮質(zhì)醇和生長(zhǎng)激素不適宜作為檢測(cè)鉛中毒的應(yīng)激指標(biāo)。

[1]McNabb F M A,King D B.Thyroid hormone effects on growth,development,and metabolism[M]//T he Endocrinology of Growth,Development,and Metabolism of vertebrates.Schreibman M P,Scanes C G,Pang P K.New York:Academic Press,1993:393-417.

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[3]龐有志,李宏偉,趙德明,等.鉛中毒和ND免疫對(duì)黃羽鵪鶉免疫功能的影響[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2008,30(4):300-304.

[4]Schew W A,McNabb F M A,Scanes C G.Comparison of the ontogenesis of thyroid hormones,growth hormone,and insulinlike growth factor-1 in ad libitum and food-restricted(Altricial)European Starling s and(Precocial)Japanese quail[J].Gen Comp Endocrinol,1996,101:304-316.

[5]龐有志,趙德明,趙淑娟,等.鉛染毒和新城疫疫苗免疫對(duì)鵪鶉生長(zhǎng)發(fā)育的影響[J].中國(guó)家禽,2008,30(14):11-15.

[6]Vy boh P,Zeman M,Juráni M,et al.Plasma thy roid hormone and g rowth hormone patterns in precocial Japanese quail and altrical European starlings during postnatal development[J].Comp Biochem Phy siol,1996,114C:23-27.

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