張玲,夏文,韓恩吉,夏作理(.泰山醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)研究所,泰安市7000;.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院腦血管病科,濟南市 500)
海風(fēng)藤為胡椒科植物風(fēng)藤Piper kadsura(Choisy)Ohwi的干燥藤莖,具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)的功能,傳統(tǒng)中醫(yī)用海風(fēng)藤治療哮喘、關(guān)節(jié)痛[1]。近年來報道海風(fēng)藤在治療腦梗死方面有一定效果,其有效使用劑量為3~9 g[2,3]。目前,臨床上以海風(fēng)藤干燥全草入藥?!吨袊幍洹肥蛰d的海風(fēng)藤為胡椒科植物風(fēng)藤P.kadsura(Choisy)Ohwi的干燥藤莖[4],而廣東省歷來習(xí)用的海風(fēng)藤為木蘭科南五味子屬植物海風(fēng)藤(別名大葉過山龍)Kadsura heteroclite(Roxb.)Craib的干燥藤莖。另外,對全國的中藥市場調(diào)查發(fā)現(xiàn),海風(fēng)藤的來源比較復(fù)雜,主要原植物有風(fēng)藤P.kadsura(Choisy)Ohwi及山藥P.hanceiMaxim.;部分地區(qū)尚有用腺鱗茍P.hanceiMaxim.var.squamiglanduferumFan、石南 藤P.walliehii(Miq.)Hand.-Mazz.及 毛 藥P.pu-bemlum(Benth.)Maxim.的莖葉。本試驗用的細葉青蔞藤為《中國藥典》記載的胡椒科植物風(fēng)藤的別名[1]。
微量元素與人體健康、疾病及中醫(yī)藥的關(guān)系十分密切,藥材中各種微量元素的含量是決定植物類中藥寒、涼、溫、熱四性的主要因素之一[5]。因此,筆者用電感耦合等離子發(fā)射光譜法測定海風(fēng)藤不同部位微量元素的含量并對其進行比較。
Iris intrepidⅡXSP型電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(美國熱電公司);十萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);可調(diào)溫控電熱板、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(天津市中環(huán)實驗電爐有限公司);通風(fēng)櫥(泰安岱興通風(fēng)設(shè)備有限公司);電熱恒溫水浴鍋(北京市長風(fēng)儀器儀表公司)。
硝酸、高氯酸為國產(chǎn)優(yōu)級純,水為超純水;混合標(biāo)準(zhǔn)樣品由北京有色金屬研究總院提供(濃度為100 μg·mL-1,編號為GSB 04-1767-2004)。海風(fēng)藤由山東大學(xué)齊魯醫(yī)院中藥房提供,經(jīng)山東大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室李允堯教授鑒定為細葉青蔞藤P.kadsura(Choisy)Ohwi的干燥全草。
分別挑選出海風(fēng)藤的粗莖、細莖和葉,用水沖洗后置電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱烘干至恒重(95℃,前后2次質(zhì)量差<2 mg),粉碎,過100目篩。用電子天平準(zhǔn)確稱取0.2 g(精確至0.000 01 g),置于100 mL耐熱三角瓶中,加入5 mL混合酸(HNO3∶HClO4=4∶1),并放置防爆玻璃珠3~5個,上端放一小玻璃漏斗,在通風(fēng)櫥中用電熱板130℃加熱消化樣品,并將混合酸蒸干;若樣品還帶有黃色,再加入適量混合酸繼續(xù)消化,直至樣品粉末完全消解變白為止;然后在80℃電熱恒溫水浴鍋中用1%硝酸充分溶解1 h,定容。
載氣:氬氣;載氣流量:0.5 mL·min-1;射頻功率:1 150 W。調(diào)整好儀器的各項參數(shù),選擇16種元素的最佳譜線,用1%硝酸作為空白溶液,調(diào)整儀器的檢測限和靈敏度;將混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液用1%硝酸稀釋100倍,作為工作溶液,驗證儀器的準(zhǔn)確性和精密度;在空白溶液中加入不同水平的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,混勻,按照測定混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的方法重復(fù)測定5次,計算加樣回收率。
在上述儀器條件下,同法測定樣品中16種元素的含量,結(jié)果見表1。
表1 海風(fēng)藤不同部位微量元素的含量測定結(jié)果Tab 1 Content determination of trace elements in different parts of P.kadsura
表2 16種元素的回收率試驗結(jié)果Tab 2 Results of recovery test of 16 kinds of trace elements
重復(fù)測定混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液10次,計算RSD。16種元素的RSD見表2。
從表2可看出,只有元素鈦的RSD=7.320 0%,其它15種元素的RSD均小于2%,表明該測定方法的精密度很高。
重復(fù)測定加標(biāo)空白溶液10次,計算回收率。16種元素的回收率試驗結(jié)果見表2。
從表2可看出,只有鐵和鍶2種元素的回收率偏低(分別為88.40%和87.14%),其余14種元素的回收率均在90%~110%范圍內(nèi),表明測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
電感耦合等離子發(fā)射光譜法測定各種元素的準(zhǔn)確性和精密性的關(guān)鍵在于譜線的選擇。一種元素往往有多條特征光譜,在不同激發(fā)條件下,其靈敏度和檢測限不同。因此,測定一種新的元素和樣品,需要根據(jù)試驗條件選擇靈敏度高、檢測限低的譜線。例如,在本試驗條件下,元素鎂選擇了2條波長分別為277.669 nm和285.213 nm的特征譜線,分別重復(fù)測定空白溶液5次,其中波長為277.669 nm的測定結(jié)果的檢測限為0.009 μ g·mL-1,RSD=1.071% ,誤 差 為 0.089;而波長為285.213 nm時,測定結(jié)果的檢測限為0.085μg·mL-1,RSD=1.415%,誤差為0.186 7??梢娫诒驹囼灄l件下,測定鎂元素時選擇波長277.669 nm的發(fā)射譜線,靈敏度較高,檢測限較低。
由表1可見,海風(fēng)藤不同部位礦物元素的含量有較大差別,其葉中含有大量的鎂、鐵、錳、鋅、鈦、鍶、鋇、硼和銅等元素,其中鎂、鐵、錳、鋅、鈦、硼和鉛等元素的含量遠遠大于細莖和粗莖。鎂、鐵、錳、鋅和銅等都是人體必需的有重要生理功能的礦物元素,在平衡人體的正常新陳代謝中均起到重要作用[3]。可見,海風(fēng)藤的葉有重要的藥用價值,從而為臨床上將海風(fēng)藤的干燥全草入藥提供了一定的理論依據(jù)。另外,海風(fēng)藤的葉中還含有大量對人體有害的重金屬元素鉛,由于鐵和鋅對鉛有拮抗作用,因此海風(fēng)藤葉中大量的鋅和鐵可能會對鉛產(chǎn)生抑制作用,從而減少它對人體的危害。
海風(fēng)藤葉中所含的微量礦物元素中,鎘的含量大約是細莖和粗莖的10倍;鎳和鉻的含量大約是細莖和粗莖的2倍。而鎳是人體必需的微量元素之一,鉻離子(Cr3+)是葡萄糖耐量因子的活性中心,它們在人體中均具有多種重要的生物學(xué)功能。海風(fēng)藤葉中含較多的鎳與鉻,預(yù)示海風(fēng)藤的葉在治療糖尿病等疾病方面可能會有一定作用。值得注意的是,海風(fēng)藤的粗莖中含有大量在人體內(nèi)具有類似胰島素功能的微量元素釩;細莖中含有較多微量元素錫,表明海風(fēng)藤的葉和莖具有互補的藥理作用。
采用電感耦合等離子發(fā)射光譜法測定海風(fēng)藤不同部位16種礦物元素含量的精密度和準(zhǔn)確性都很高,測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。從測定結(jié)果可知,海風(fēng)藤的全草均可入藥,特別是海風(fēng)藤的葉含有大量的鎂、鐵、錳、鋅、鈦、鍶、鋇、硼和銅等元素,可能具有重要的藥用價值。
[1]王貞佐,呼海濤,孟慶繁,等.海風(fēng)藤的研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥,2006,17(7):1 305.
[2]韓恩吉,胡洪濤,何秀全,等.海風(fēng)藤對β-APP基因表達的影響[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2003,41(1):87.
[3]李吉瑩,劉艷菊,邴飛虹,等.海風(fēng)藤抗炎作用的實驗研究[J].湖北中醫(yī)雜志,2006,28(12):17.
[4]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)[S].2005年版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:206.
[5]管竟環(huán),李恩寬.中醫(yī)藥理論量化與微量元素[M].武漢:湖北科學(xué)技術(shù)出版社,1998:16.