薄層色譜“一條”法檢測(cè)99Tcm藥物的放化純度

王吉欣,張艷華

(北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院北京腫瘤醫(yī)院暨北京市腫瘤防治研究所,北京 100142)

99Tcm-MDP作為一種有效的骨顯像劑,在臨床已應(yīng)用多年,但99Tcm-MDP注入體內(nèi)后,全身放射性本底很高,需等待2～3 h本底下降后,才能進(jìn)行骨顯像。懷疑是由于99Tcm-MDP放化純度偏低導(dǎo)致。薄層色譜(TLC)“一條(onestrip)”法[1-2],可以在一條硅膠板上將主產(chǎn)品及多種雜質(zhì)如游離锝、锝錫膠體及可能存在的相對(duì)分子質(zhì)量相差較大的其他雜質(zhì)分離清楚后,按組分分段測(cè)定放射性,并計(jì)算放化純度。此“一條”法曾用于檢測(cè)99Tcm-PYM,具有分離組分準(zhǔn)確、可信,分離效果較好的優(yōu)點(diǎn)。故于2002年采用此法試測(cè)由原子高科股份有限公司(京原)提供的99Tcm-MDP,用傳統(tǒng)的放射性自顯影(Radioautography,簡(jiǎn)稱自顯影)觀察斑點(diǎn),按锝錫膠體、標(biāo)記物、游離锝分離清楚的三段,分別刮板測(cè)放射性,并計(jì)算其放化純度為26%。2008年采用免洗膠片自顯影法,檢查99Tcm-MDP等6種常見(jiàn)锝藥物用此“一條”法的分離效果,并定性估測(cè)99Tcm-MDP的放化純度。2009年用同法復(fù)查3種锝藥物,目的是試用一種方法測(cè)定多種锝藥物,達(dá)到放化純度檢測(cè)的規(guī)范化和統(tǒng)一化。

1 實(shí)驗(yàn)材料

2008 年 用99Tcm-MDP、99TcmO4-、99Tcm-DTPA 、99Tcm-EC 、99Tcm-MIBI 和99Tcm-MAA 6種藥物由北京欣科思達(dá)醫(yī)藥科技有限公司(簡(jiǎn)稱京欣)提供,2009年用99Tcm-DTPA和99Tcm-MIBI均為京欣產(chǎn)品,99Tcm-MDP為京原與京欣兩種產(chǎn)品,所有藥物注射液的pH均接近生理鹽水(4.5～7.0);SG硅膠板:青島海洋化工廠產(chǎn)品,切成1 cm×10 cm硅膠條備用;曝光用免洗膠片:ISP International Specialty Products Inc提供,切成1 cm×10 cm;其他化學(xué)試劑均為北京化工廠產(chǎn)品。

2 實(shí)驗(yàn)方法

采用上行TLC法,固定相為硅膠條,流動(dòng)相為V(10%醋酸銨)∶V(甲醇)=1∶1。用微量注射器分別取材料中所提供的6種锝藥物,每次2μL,分3～5次點(diǎn)樣,斑點(diǎn)直徑小于4mm,趁斑點(diǎn)未干時(shí)立即放入色譜槽的流動(dòng)相中,展開(kāi)約6 cm取出,用吹風(fēng)機(jī)干燥后,將硅膠條與免洗膠片全部緊密接觸,用兩條比硅膠條大些的玻璃片夾住,并用橡皮筋纏緊,自顯影24 h,取下膠片,測(cè)量膠片上各斑點(diǎn)中心與原點(diǎn)的距離,計(jì)算R f,實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次,取平均值,以±s表示。

3 結(jié) 果

3.1 6種常見(jiàn)99Tcm藥物的自顯影

2008年,TLC“一條”法后的自顯影采用免洗膠片代替?zhèn)鹘y(tǒng)的X光膠片,共測(cè)定了6種锝藥物(含99TcmO4-),99Tcm-DTPA 測(cè) 2次,其余各測(cè)1次,結(jié)果示于圖1。由圖1可以看出,除99Tcm-MAA保留在原點(diǎn)未被分開(kāi)外,另5種锝藥物的組分均可被分開(kāi)。按在硅膠條上展開(kāi)后,標(biāo)記主要產(chǎn)物與原點(diǎn)間的距離由大到小依次為99TcmO4-、99Tcm-EC 、99Tcm-MDP 、99Tcm-DTPA(1為2009-05-13產(chǎn)品,2為2009-05-16產(chǎn)品)和99Tcm-MIBI,表明移動(dòng)距離與標(biāo)記物的相對(duì)分子質(zhì)量相關(guān),也進(jìn)一步說(shuō)明此法可用于檢測(cè)多種锝藥物。按圖1計(jì)算99Tcm-MDP的Rf為0.7,肉眼觀察其放化純度偏低,但高于2002年測(cè)定結(jié)果;99Tcm-DTPA 2次自顯影的斑點(diǎn)顏色深淺不同,表明其放化純度有差異。

圖1 6種常用锝藥物的放射性自顯影

3.2 部分99Tcm藥物的復(fù)查

2009年用上述方法對(duì)99Tcm-MDP、99Tcm-DTPA和99Tcm-MIBI進(jìn)行復(fù)查,每種藥物重復(fù)4次,其自顯影圖像示于圖2。由 4次圖像計(jì)算Rf,結(jié)果顯示,99Tcm-DTPA 和99Tcm-MIBI均與2008年檢測(cè)結(jié)果相同,分別為 0.78±0.02和0.39±0.03;99Tcm-MDP的檢測(cè)結(jié)果與2008年的相差甚大,其自顯影斑點(diǎn)始終在原點(diǎn)附近,Rf接近于零,其組分未被分開(kāi)。

圖2 3種锝藥物的TLC自顯影

4 討論與建議

4.1 99Tcm標(biāo)記藥物應(yīng)先被分離完全,再定量測(cè)定其放化純度

上述結(jié)果表明,用自顯影法檢查 TLC,除99Tcm-MAA外,實(shí)驗(yàn)所用“一條”法可以將锝藥物的各種組分分開(kāi),與Vera的圖示分析結(jié)果[3]相符合。此后按各組分分段檢測(cè)放射性計(jì)數(shù),進(jìn)而可定量計(jì)算藥物的放化純度。

4.2 即使在藥盒保質(zhì)期內(nèi),也應(yīng)在標(biāo)記完成后檢測(cè)其放化純度

2002年和2008年99Tcm-MDP的放化純度都偏低,但其組分可以分開(kāi),而2009年觀察到組分未分開(kāi),這可能是由于99Tcm-MDP是具有锝錫膠體特性的復(fù)合物,因標(biāo)記用MDP藥盒有效期為52周,藥盒內(nèi)氯化亞錫含量隨貯存時(shí)間增加而降低,因此可能導(dǎo)致標(biāo)記產(chǎn)品的R f發(fā)生顯著變化。這種變化用兩條法(一條測(cè)游離锝,另一條測(cè)锝錫膠體)難以測(cè)出,且其所測(cè)定的放化純度通常＞90%。因此,即使在MDP藥盒貯存有效期內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記,也要在標(biāo)記后用于臨床前檢測(cè)其放化純度。

4.3 發(fā)展檢測(cè)99Tcm藥物放化純度的高效薄層色譜法

2005年Lep ri等[4]提出了改善分離效率的高效薄層色譜法(HPTLC法),此法采用顆粒度較小(2～10μm)的硅膠板和較小的點(diǎn)樣體積(0.1～0.2μL,點(diǎn)樣原點(diǎn)約1.0 mm);Gocan[5]和張玉奎[6]等認(rèn)為,限制點(diǎn)樣原點(diǎn)尺寸是 TLC分離和精確定量的關(guān)鍵。與HPTLC法相比,本方法的不足之處是試樣溶液的放射性濃度較低,加樣總體積也較小,只有2 m L,雖然多次點(diǎn)樣,點(diǎn)樣直徑也未達(dá)到1.0mm的要求。

生產(chǎn)單位擁有眾多的專業(yè)放化人才、大量放射性濃度的锝藥物和檢測(cè)放化純度必需的儀器設(shè)備,有條件繼續(xù)研究此項(xiàng)工作?？梢员容^多種固定相與流動(dòng)相的組合,找出最佳層析體系及簡(jiǎn)便的操作方法,并進(jìn)一步促進(jìn)锝藥物放化純度檢測(cè)方法的規(guī)范化。

致謝:本工作承蒙中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院附一院核醫(yī)學(xué)科歐陽(yáng)巧洪主任、藩茹等同志長(zhǎng)期來(lái)提供場(chǎng)所、試樣和北方免疫試劑研究所孟福英同志的大力支持,北京大學(xué)第一醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科王榮福主任、張春麗副主任、閻萍同志及本院藥劑科、放療科物理組等有關(guān)同志的鼎力幫助,在此表示衷心感謝!

[1] 張艷華,黃天貴,黃俊星,等.99Tcm-PYM的制備、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1997,29:150-152.

[2] Huang TQ,Zhang YH,Wang JX,et al.Pingyangmycin as a99mTCCarrier in Tumor Localization[J].Nucl Med Biol,1995,22:537-542.

[3] Vera DR.Radionuclide p roduction&radiopharmaceuticals[R/OL].[2008-01-31].http:∥dep ts.washington.edu/uwm ip/Week-5/Radiopharms.pdf.

[4] Lepri L,Cincinelli A.TLC Sorbents[C]//Cazes J.Encyclopedia of Chromatography:Vol.Ⅱ.2nd ed.New York:Tay lor&Francis G roup,2005:1 645-1 649.

[5] Gocan S.Sample app lication in TLC[C]//Cazes J.Encyclopedia of chromatography:Vol.Ⅱ.2nd ed.New York:Taylor&Francis Group LLC,2005:1 480-1 486.

[6] 張玉奎,張維冰,鄒漢法主編.分析化學(xué)手冊(cè):第六分冊(cè)[M].第二版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000:118-125.