復(fù)方丹參飲對(duì)胰島素抵抗型大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮及內(nèi)皮素的影響1)

王 蕊,李景君,徐京育

近年來諸多研究表明胰島素抵抗(IR)的發(fā)生和發(fā)展與一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素-1(ET-1)等血管內(nèi)皮細(xì)胞改變有關(guān)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為痰瘀互阻為IR的病機(jī)。祛瘀化痰中藥具有良好的化濁醒脾作用來解除IR,增加機(jī)體胰島素敏感性,本實(shí)驗(yàn)通過觀察IR時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞NO、ET-1濃度的變化,初步探討IR對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響和復(fù)方丹參飲的保護(hù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 復(fù)方丹參飲(丹參30 g,半夏20 g,檀香10 g,砂仁10 g,蒼術(shù)20 g等組成)水煎液,按人與大鼠體表面積比例1∶0.018計(jì)算終濃度為每毫升1.2 g生藥,由本實(shí)驗(yàn)室自制;羅格列酮15mg/(kg?d);NO試劑盒及ET-1試劑盒。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 低溫離心機(jī)、溫預(yù)箱、酶標(biāo)儀、血糖儀、電子天平、血壓儀、量筒。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF雄性W istar大鼠60只,體重130 g～160g,鼠齡8周,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證編號(hào):2008004。

1.4 分組及飼養(yǎng) 健康SPF級(jí)雄性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組并編號(hào),即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、復(fù)方丹參飲預(yù)防組(中藥預(yù)防組)、復(fù)方丹參飲治療組(中藥治療組)、羅格列酮組,每組12只。除空白對(duì)照組給予常規(guī)飼料喂養(yǎng)外,其余各組大鼠喂養(yǎng)高脂飼料(10%豬油、20%蔗糖10%蛋黃粉、0.5%膽酸鈉、59.5%常規(guī)飼料,均于1周內(nèi)新鮮配置,4℃存儲(chǔ))。其中,中藥預(yù)防組開始給予高脂飲食同時(shí)即給復(fù)方丹參飲灌胃,每日清晨一次,每次2 m L,其余各組灌服等容量生理鹽水。

1.5 胰島素抵抗大鼠模型的建立 各組喂養(yǎng)8周后,大鼠禁食水12 h,清醒狀態(tài)下眼底靜脈叢取血1m L,經(jīng)離心后取血清,血糖用葡萄糖氧化酶法測(cè)定、血清胰島素用放射免疫法檢測(cè),評(píng)價(jià)大鼠胰島素敏感性。

1.6 藥物血清的制備 建立IR型后,灌胃:中藥治療組給予復(fù)方丹參飲,羅格列酮組給予羅格列酮,中藥預(yù)防組繼續(xù)給予復(fù)方丹參飲,其他組給予等容量生理鹽水。繼續(xù)喂養(yǎng)8周,于末次灌胃后禁食水12 h,以1%戊巴比妥鈉腹腔麻醉40mg/kg,經(jīng)心臟取血,低溫離心機(jī)3 000 r/m in離心15 min,分離血清及血漿,-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.7 檢測(cè)指標(biāo) 用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清NO及血漿內(nèi)皮素-1含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn),P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠血清NO比較 模型對(duì)照組血清NO顯著低于空白對(duì)照組(P＜0.01);中藥預(yù)防組用藥后NO顯著高于模型對(duì)照組(P＜0.01),但與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。中藥治療組、羅格列酮組與中藥預(yù)防組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),說明高脂高糖高膽固醇飲食可以引起血管內(nèi)皮細(xì)胞的改變,復(fù)方丹參飲和羅格列酮可以增加NO的含量,改善內(nèi)皮功能。詳見表1。

2.2 各組大鼠血漿ET-1比較 模型對(duì)照組血漿ET-1顯著高于空白對(duì)照組(P＜0.01);中藥預(yù)防組用藥后顯著低于模型對(duì)照組(P＜0.01),與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);中藥治療組與羅格列酮組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表1。

表1 復(fù)方丹參飲對(duì)IR大鼠血清NO、血漿ET-1的影響(±s)

表1 復(fù)方丹參飲對(duì)IR大鼠血清NO、血漿ET-1的影響(±s)

組別 n NO(pg/m L)ET-1(μmol/m L)空白對(duì)照組12 2.899±0.765 2.896±0.747模型對(duì)照組12 1.484±0.3472)5.667±1.6682)中藥預(yù)防組12 2.655±0.6194)3.539±1.3244)中藥治療組12 2.074±0.7212)3)4.291±1.3982)4)羅格列酮組12 1.979±0.6992)3)4.097±1.6851)3)與空白對(duì)照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01;與模型對(duì)照組比較,3)P＜0.05,4)P＜0.01

3 討 論

IR是指全身性胰島素敏感性下降的一種病理狀態(tài)。IR狀態(tài)下的內(nèi)皮功能障礙,其機(jī)制尚不清楚,但內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙時(shí),表現(xiàn)為內(nèi)皮源性舒張因子減少或活性降低,而內(nèi)皮素等收縮因子釋放增加即縮血管因子作用超過舒血管因子的作用,而NO、ET-1為血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的兩種效應(yīng)相反的血管活性物質(zhì),血管內(nèi)皮是通過NO、ET-1調(diào)節(jié)組織器官的血流量,從而影響胰島素向靶組織轉(zhuǎn)運(yùn)的,IR導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙后血管不能充分舒張,胰島素?zé)o法充分到達(dá)靶組織,使胰島素不能發(fā)揮應(yīng)有的生物效應(yīng),IR程度加重[1]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為IR的病因主要包括以下兩方面:①痰濁。痰濁與脾的關(guān)系甚為密切,中醫(yī)認(rèn)為“脾為生痰之源”,凡脾胃素虛、飲食不節(jié)、情志因素致脾運(yùn)不及,精微物質(zhì)不能利用,均可導(dǎo)致消渴。痰濁能引起瘀血,血瘀也可導(dǎo)致痰阻。②血瘀。肥胖是IR的重要致病因素,而中醫(yī)認(rèn)為胖人多痰濕,痰瘀多同病。所以IR的病因雖不同,但在胰島素抵抗病程中,痰瘀互阻是主要病機(jī),痰瘀互阻證可作為IR的獨(dú)立證型或兼證,從而逐漸重視活血祛瘀法在IR中的應(yīng)用[2]。復(fù)方丹參飲是活血祛瘀化痰的代表方之一,主要由丹參、檀香、砂仁、半夏、黃連等組成,其突出化濁藥和活血祛瘀藥的合用,以化濁藥的醒脾作用解除IR,增加機(jī)體胰島素敏感性[3]。加以活血祛瘀藥通心脈,諸藥合用,補(bǔ)而不滯,攻而不傷正,共奏益氣養(yǎng)心,活血祛瘀,化痰通絡(luò)之功效。

本研究對(duì)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞NO、ET-1含量檢測(cè),發(fā)現(xiàn)IR大鼠NO、ET-1含量有顯著變化,而中藥復(fù)方丹參飲及羅格列酮治療組較模型對(duì)照組有明顯改善,說明復(fù)方丹參飲與羅格列酮類藥物可能具有相同的功效,對(duì)IR型大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞NO、ET-1具有重要保護(hù)作用;中藥預(yù)防組的療效顯著,與空白對(duì)照組無明顯差異,說明復(fù)方丹參飲可以升高血清NO及降低血漿ET-1水平,使體內(nèi)舒血管因子和縮血管因子達(dá)到平衡狀態(tài),起到保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的作用。

[1] 何冰,趙晟,王艷軍.胰島素抵抗大鼠血管內(nèi)皮功能的研究[J].中國老年學(xué)雜志,2008,10(28):1899-1900.

[2] 李晶,趙莉娟,郝佳佳.2型糖尿病胰島素抵抗從痰瘀論治辨析[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2008,3(9):549-550.

[3] 金麗麗,吳敏.2型糖尿病胰島素抵抗的中醫(yī)藥治療研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,10(2):68-69.