MMP-9和 PCNA在涎腺腫瘤中的表達(dá)及意義

劉樹發(fā),楊 明,孟 丹,鄔志鋒

(佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154002)

涎腺腫瘤是口腔頜面部的常見腫瘤,近年來發(fā)病呈上升趨勢(shì),逐漸成為研究熱點(diǎn)。其發(fā)病機(jī)制受多因素影響,而腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是影響患者治療效果和預(yù)后的主要因素?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix Metallo Proteinase-9,MMP-9)即(明膠酶 B/92kUⅣ型膠)一組鈣鋅依賴性蛋白酶,其功能能降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)且具有廣泛的底物特性,最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的浸潤甚至遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,同時(shí)促進(jìn)腫瘤中新生血管的形成[1,2]。增殖細(xì)胞核抗原(proliferative cellnuclearantigen,PCNA)是 DNA聚合酶的輔酶,為細(xì)胞周期的內(nèi)源性組織標(biāo)記物,其在腫瘤中的表達(dá)程度與細(xì)胞增殖活性密切相關(guān)[3]。本實(shí)驗(yàn)擬通過免疫組織化學(xué) SP法觀察 MM P-9和 PCNA在涎腺腫瘤中的表達(dá)情況 ,探討二者在涎腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集佳木斯大學(xué)口腔醫(yī)院病理科1996～ 2007年手術(shù)切除且資料完整的涎腺腫瘤存檔蠟塊共65例,包括多形性腺瘤18例,基底細(xì)胞腺瘤 6例 ,Warthin瘤11例,腺樣囊性癌 17例,黏液 表皮樣 癌 13例 ;其中 男 36例 ,女 29例 ,平 均年齡 52歲 ;所有病例均為首發(fā)病例,經(jīng)過病理復(fù)查,術(shù)前均未放療或化療。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

采用免疫組化 SP法,主要試劑鼠抗人 MM P-9和 PCNA單克隆抗體及 SP試劑盒等均購自武漢博士德公司。染色過程嚴(yán)格按說明書進(jìn)行,分別用用已知陽性切片作陽性對(duì)照,用 PBS(pH=7.4)代替一抗作空白對(duì)照 ,染色步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判斷

MM P-9的陽性染色定位于細(xì)胞漿中,PCNA的陽性染色定位于細(xì)胞核中,均呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。MM P-9陽性判斷標(biāo)準(zhǔn):按著色分級(jí)為未著色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分;陽性細(xì)胞占所觀察細(xì)胞百分比＜5%計(jì)為0分,5%～ 15%計(jì)為1分,26%～ 50%計(jì)為2分,51%～ 75%計(jì)為3分,＞75%計(jì)為4分。將每張切片的著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比得分相乘,分為4級(jí):0分為陰性(-);1～ 4分為弱陽性 (+);5～ 8分為中度陽性(++);9～ 12分為強(qiáng)陽性(+++)。PCNA記數(shù)10個(gè)高倍鏡不重復(fù)視野中1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù),陽性細(xì)胞數(shù)占癌細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)為陽性細(xì)胞表達(dá)率,即為 PCNA標(biāo)記指數(shù)(PLI)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用 SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。MMP-9和 PCNA在涎腺良惡性腫瘤中表達(dá)之間的相互關(guān)系用i2檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)。不同組間 PLI用 t檢驗(yàn),PLI的統(tǒng)計(jì)指標(biāo)以± s)%表示。

2 結(jié)果

2.1 MM P-9與 PCNA在涎腺腫瘤中的表達(dá)

MM P-9在涎腺惡性腫瘤和良性腫瘤中的陽性表達(dá)率分別為73.33%和31.43%,表達(dá)水平顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (i2=11.3492,P ＜ 0.01)(表1)。MM P-9主要在腫瘤細(xì)胞的胞漿中呈陽性表達(dá),表達(dá)陽性的腫瘤細(xì)胞多位于浸潤的前沿(如圖1、2),在血管內(nèi)皮細(xì)胞中也有部分表達(dá)。PCNA陽性棕黃色顆粒位于腫瘤細(xì)胞的胞核。涎腺良、惡性腫瘤中 PLI增殖指數(shù)分別為 (30.95± 8.53)、(70.13± 19.52),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t= 10.75,P＜0.01)(表1)。

2.2 MM P-9與 PCNA表達(dá)的關(guān)系

隨著 MMP-9在涎腺腫瘤中表達(dá)強(qiáng)度的增加,PCNA標(biāo)記細(xì)胞數(shù)的百分率呈增高趨勢(shì)。涎腺惡性腫瘤中 MM P-9陽性組中 PLI增殖指數(shù)為(70.55±20.24),明顯高于陰性組中 PLI增殖指數(shù) (38.45±9.25),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t= 4.29,P ＜ 0.01)(表2)。經(jīng) Spearman等級(jí)相關(guān)分析,MM P-9的表達(dá)與 PCNA的表達(dá)呈顯著正相關(guān) (r= 0.583,P＜0.05)。

表1 涎腺腫瘤中 MMP-9和 PCNA的表達(dá)

表2 涎腺惡性腫瘤中 MMP-9不同表達(dá)水平與 PLI增殖指數(shù)的關(guān)系

圖1 腺樣囊性癌 MM P-9陽性表達(dá)(×200)

圖2 黏液表皮樣癌 MM P-9陽性表達(dá)(×200)

3 討論

涎腺腫瘤中浸潤和轉(zhuǎn)移是影響預(yù)后的主要因素,而眾多因素中腫瘤細(xì)胞穿透基底膜增殖發(fā)展在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中起到關(guān)鍵作用。

3.1 MMP-9的表達(dá)與涎腺腫瘤的關(guān)系

MM PS家族影響著腫瘤的發(fā)生發(fā)展,細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解是腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。MMP-9是中性 pH值中活性最佳的酶,能夠廣泛降解 ECM中的 IV、V型膠原和明膠[4]。Robert[5]等研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞的無限增殖、血管浸潤和遠(yuǎn)處血行或者淋巴轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者預(yù)后的主要因素,而 MM P-9在其中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)中觀察發(fā)現(xiàn),MM P-9在涎腺良、惡性腫瘤的陽性表達(dá)率分別為31.43%、73.33%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜0.01)。表明基底膜的完整性遭到破壞,腫瘤細(xì)胞浸潤增殖,腫瘤惡性程度增高。

3.2 PCNA的表達(dá)與涎腺腫瘤的關(guān)系

PCNA是存在于細(xì)胞核內(nèi)的一種酸性蛋白質(zhì),近年研究證實(shí),它是 DNA聚合酶 δ的輔助因子,參與 DN A的合成并在細(xì)胞周期中起著重要的調(diào)控作用[6]。PCNA可以代表腫瘤細(xì)胞增殖能力。目前已將它視為 S期細(xì)胞的標(biāo)志物,用于細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)研究[7]。Maeda[8]等對(duì)胃癌組織研究發(fā)現(xiàn),PCNA與腫瘤的浸潤、肝轉(zhuǎn)移及腹膜轉(zhuǎn)移等有顯著相關(guān)性。本試驗(yàn)中觀察發(fā)現(xiàn),PCNA在涎腺良、惡性腫瘤中均有不同程度的表達(dá),低分化組表達(dá)高于高分化組,其陽性率呈上升趨勢(shì),與文獻(xiàn)報(bào)道相符。表明腫瘤惡性程度越高腫瘤細(xì)胞增殖能力越強(qiáng),細(xì)胞增殖活躍,易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

3.3 MM P-9與 PCNA的關(guān)系

研究表明,MM P-9的表達(dá)強(qiáng)度與 PCNA的增殖活性密切相關(guān)。孫淑娥[2]等在 MM P-9、PCNA在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義中發(fā)現(xiàn) MM P-9的表達(dá)強(qiáng)度與腫細(xì)胞的增殖活性表達(dá)呈正相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)顯示,在涎腺惡性腫瘤組織中隨著 MM P-9表達(dá)強(qiáng)度的增高,PCNA的增殖指數(shù) PLI亦增高,經(jīng) Spearman等級(jí)相關(guān)分析二者表達(dá)呈正相關(guān)(P ＜0.05)?？梢?MM P-9與 PCNA共同參與腫瘤的浸潤,二者一起作用機(jī)制可能是 MMP-9降解細(xì)胞外基質(zhì),破壞基底膜。能加速血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖及新生血管網(wǎng)形成,促進(jìn)腫瘤的生長。兩者在腫瘤的生物學(xué)行為中共相互作用,或者二者受某一相同因素影響。對(duì)二者的檢測(cè)有助于評(píng)估腫瘤的惡性程度,從而對(duì)臨床治療及預(yù)后的判斷提供依據(jù)。隨著研究的深入,MM P-9和 PCNA可以作為評(píng)價(jià)腫瘤惡性潛能的生物學(xué)指標(biāo),成為腫瘤標(biāo)志物,有廣闊的研究前景。

[1] 段文鍇,郭福君.質(zhì)金屬蛋白酶-9在涎腺黏液表皮樣癌中的表達(dá)[J].河南科技大學(xué)學(xué)報(bào),2008,26(1):10-12

[2] 孫淑娥,立糧,紅麗.MM P-9、PCNA在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)及臨床意義 [J].中國婦幼保健,2008,23(7):975-977

[3] 羅小中,倪江東.MMP-9、PCNA在骨肉瘤中的表達(dá)及其臨床意義 [J].醫(yī)學(xué)臨床研究,2006,23(5):682-684

[4] 李曉川,王嚴(yán)慶.MMP-2、MM P-9和 PCNA在大腸腫瘤中的表達(dá)及臨床意義 [J].重慶醫(yī)學(xué),2003,32(7):870-872

[5] Loberg RD,Bradley DA,Tomlins SA,et al.The lethal phenotype of cancer:The molecular basis of death due to malignancy[J].CA Cancer J Clin,2007,57(4):225-241

[6] 楊發(fā)端,陳紅,陳維珠,等.胃癌細(xì)胞 PCNA和 DNA含量與預(yù)后[J].中國腫瘤臨床,1995,22(3):177-180

[7] Gaiyrov AG,Klimenko IA,Grigorenko VM,et al.The prognostic significance of the PCNA protein in transitional-cell bladder cancer[J].Lik Sprava,1999,(1):64-67

[8] MaedaK,ChungY,OnodaN,et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index of preoperative boipsy specimens in gastric carcinoma with special reference of prognosis[J].Cancer,1994,73(3):528