堿性氧化法消除維生素C對Trinder’s指示反應系統(tǒng)的干擾作用

李 娜 秦 儉 辛克學 山東省即墨市即墨人民醫(yī)院檢驗科（266200）

Trinder’s指示反應作為顯色指示系統(tǒng)，廣泛應用于膽固醇（CHO）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、尿酸（UA）等的測定。維生素 C（以下簡稱VC）可以競爭H2O2而干擾測定結(jié)果，出現(xiàn)無法解釋的偏低甚至根本測不出。我們根據(jù)VC分子結(jié)構(gòu)中烯二醇基在空氣中易被氧化成二酮基，從而失去其還原性并在堿性溶液中更快的特點，對標本進行預處理，使VC氧化。即使標本中VC含量達5.68 mmol/L，并不干擾Trinder’s指示反應系統(tǒng)。與高鐵絡合劑法比較VC干擾能力提高3倍多。

1 材料與方法

1.1 材料 ①0.10 mol/L NaOH，0.10 mol/L HCl，維生素C（分析純），北京化工廠產(chǎn)品；②膽固醇（CHOD-PAP），甘油三酯（GPO-PAP），葡萄糖（GOD-PAP ），尿酸（UA-PAP）測定試劑盒均為北京九強生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；③硫酸鐵銨（分析純），天津化學試劑廠產(chǎn)品；④儀器：日本OLYMPUS全自動生化分析儀。

1.2 方法 含高 VC 血清 100 μl，加入 0.10 mol/L NaOH100 μl，混勻，置37℃水浴30分鐘，再加入0.10 mol/L HCl 100 μl，混勻，標準液和質(zhì)控物均同樣預處理，上機測定.結(jié)果最后乘以稀釋倍數(shù)3。

2 結(jié)果

2.1 最適堿濃度選擇 取無明顯溶血和黃疸的血清，按常規(guī)方法測定其CHO、TG.、GLU、UA。然后準確配置成含VC 5.68mmol/L的樣本，配制不同濃度的堿和鹽酸，除 37℃水浴時間為 20分鐘外，其余條件均同堿性氧化法測定，各種濃度的堿分別以相同濃度的鹽酸中和。

2.2 最適堿性氧化時間的選擇 取上述含VC5.68mmol/L的樣本，選擇不同的堿性氧化時間測定其GLU.結(jié)果37℃水浴30分鐘即可完全消除5.68 mmol/L VC的干擾作用。

2.3 對比實驗 取20份血清各取出部分制成含VC5.68 mmol/L的樣本，按設計的堿性氧化法測定之，再將加VC前、后各20份血清標本按常規(guī)法測定。結(jié)果見表1。

表1 對比實驗結(jié)果（n=20 ，±s ， mmol/L）

表1 對比實驗結(jié)果（n=20 ，±s ， mmol/L）

項目 堿性氧化法 常規(guī)方法加5.68mmol/L VC組 加vc前組 加5.68mmol/L VC組CHO 4.669±0.8354.628±0.8060.122±0.328 TG 1.725±0.6601.749±0.6310.000±0.000 GLU 5.556±1.2625.525±1.2560.777±0.969 UA 0.330±0.0530.325±0.0540.193±0.035

三組結(jié)果進行配對t檢驗。加VC前常規(guī)法測定組與加VC后堿性氧化法測定組比較，CHO、TG.、GLU、UA，均無顯著性差異（P＞0.05）。加VC后常規(guī)法測定組與另二組比較，CHO、TG.、GLU、UA，均相差非常顯著（P＜0.01）。

2.4 堿性氧化法與高鐵絡合劑法抗 VC干擾能力的比較 制備含 VC 5.68 mmol/L的血清樣本。常規(guī)法測定加VC前、后的CHO、TG.、GLU、UA，再按上述堿性氧化法測定加 VC后的樣本。然后參照李學仁方法[2]。結(jié)果見表2。

表2 堿性氧化法與高鐵絡合劑法抗VC干擾能力的比較結(jié)果（mmol/L）

3 討論

VC是一種六碳多羥基內(nèi)酯，不但具有較乙酸更強的酸性，而且還是很強的還原劑，可以競爭 H2O2而干擾 Trinder’s指示反應系統(tǒng) 。李學仁[1]證實當VC含量達4.54 mmol/L時，ABTS、4-AA-酚顯色體系均不顯色，干擾率達100%。對4-AA-HDBS顯色系干擾率也高達95.1%。我門實驗的結(jié)果顯示：TG為5.19 mmol/L血清標本可被5.68 mmol/LVC完全抑制。5.68mmol/LVC對CHO. GLU.UA（均采用Trinder’s指示反應系統(tǒng)）測定產(chǎn)生的負誤差分別為：（4.50±0.48）mmol/L，（4.75±0.29）mmol/L，（132±20）mmol/L因此當標本真值低于VC所致相應負誤差時，表現(xiàn)為完全抑制；而當標本真值高于 VC所致相應負誤差時，表現(xiàn)為不完全抑制。前者易被操作者發(fā)現(xiàn)，而后者當血清中 VC含量少或血清測定真值較高于正常人時易被操作者忽視，多在臨床醫(yī)師或病人提出疑問時才被發(fā)現(xiàn)。這種情況應予重視。

NaOH濃度至關(guān)重要。實驗發(fā)現(xiàn)，UA的最適濃度為0.11 mol/L，CHO、TG.、GLU的最適NaOH濃度均為0.12 mol/L，在最適堿性條件下，37℃水浴僅需20分鐘即可完全消除5.68 mmol/L VC的干擾。但作為調(diào)整反應體系pH的HCL濃度較高時，易致蛋白析出。

[1]李學仁,劉荔,任鳳琴,等.丙酮酸氧化酶法測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶[J].中華醫(yī)學檢驗雜志,1994,17(1):148.

[2]李學仁.還原物對過氧化物酶氧化還原反應的干擾及消除抗壞血酸的探討[J].中華醫(yī)學檢驗雜志,1992,15:323.