腦泰方提取物對(duì)局灶性腦缺血大鼠血漿TXB2及6-Keto-PGF1α含量的影響1)

陳 懿,陳 敏,譚 琥,劉吉勇,王芊芊,李 敏,葛金文

血栓素A2(TXA2)不僅有促進(jìn)血小板聚集的作用,而且是很強(qiáng)的血管收縮劑,由血管壁產(chǎn)生的前列環(huán)素(PGI2)則是很強(qiáng)的血小板聚集抑制劑和血管擴(kuò)張劑,任何因素導(dǎo)致兩者平衡失調(diào)即引起血管疾病[1]。目前常測(cè)定其穩(wěn)定的代謝產(chǎn)物血栓素B2(TXB2)和 6-酮-前列腺素 F1α(6-keto-PGF1α)反映 TXA2和PGI2的濃度。

腦泰方能明顯改善氣虛血瘀型腦梗死患者的臨床癥狀和神經(jīng)功能缺損程度[2]。本研究旨在從維持 TXB2/6-Keto-PGF1α動(dòng)態(tài)平衡角度初步探討腦泰方對(duì)局灶性腦缺血的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 藥物與主要試劑 腦泰方提取物(Naotaifang extracts,N TF),腦泰方由黃芪、川芎、地龍等藥物組成,經(jīng)水煎、醇提后制成浸膏粉(由湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院制劑教研室提取,每1 g浸膏粉含生藥 4 g);TXB2與6-Keto-PGF1α放免試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)20080925)購(gòu)自北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司。

1.2 動(dòng)物模型制作及分組 Sprague-Dawley(SD)大鼠65只,體重280 g～300 g,鼠齡7個(gè)月～8個(gè)月,雌雄不限,購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,許可證號(hào)SCXK(滬)2007-0005。

參照Longa等[3]的方法并加以改進(jìn)制備大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞模型(MCA)。MCA阻斷后1.6 h栓線抽出恢復(fù)再灌注。假手術(shù)組只進(jìn)行左側(cè)頸部血管分離,正常對(duì)照組不做任何處理。

參照Longa等[3]5分制法對(duì)手術(shù)大鼠進(jìn)行評(píng)分,分值在1分～3分者入組,死亡不足動(dòng)物隨機(jī)替補(bǔ)。將65只大鼠稱重編號(hào),按完全隨機(jī)法分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組和腦泰方組,分1 d、3 d、5 d、7 d 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察,每亞組5只大鼠。每日對(duì)大鼠灌胃1次,每次灌胃容量1 mL/100 g大鼠;于最后一次給藥后1 h,麻醉,取標(biāo)本。

1.3 血漿TXB2、6-Keto-PGF1α含 量檢測(cè) TXB2和6-Ke to-PGF1α含量測(cè)定采用放射免疫法。大鼠頸總動(dòng)脈插管取血2 mL按9∶1置于2%乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2)溶液的塑料管中,4℃3 000 r/min離心15 min,取血漿用于檢測(cè)。

2 結(jié) 果

本研究發(fā)現(xiàn),與假手術(shù)組同時(shí)間比較,模型組術(shù)后1 d、3 d、5 d、7 d TXB2含量明顯升高(P＜0.01),血漿 6-Keto-PGF1α以 1 d、5 d、7 d變化顯著(P＜0.05或 P＜0.01)。與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)模型組比較,腦泰方治療組血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值降低明顯(P＜0.01),其中 TXB2/6-Keto-PGF1α比值在腦泰方治療7 d后,與假手術(shù)組及正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 各組血漿 TXB2、6-Keto-PGF1α含量比較(±s)

表1 各組血漿 TXB2、6-Keto-PGF1α含量比較(±s)

組別 n T XB2(ng/L)6-Keto-PGF1α(ng/L)T XB2/6-Keto-PGF1α假手術(shù)組 1 d 5 302.85±39.83 1 490.22±208.34 0.204±0.011 3 d 5 286.07±27.71 1 438.56±154.18 0.199±0.009 5 d 5 317.61±30.57 1 589.49±202.60 0.200±0.008 7 d 5 299.71±41.39 1 548.27±226.55 0.194±0.011模型組 1 d 5 473.37±12.702) 1 858.39±108.542) 0.255±0.0092)3 d 5 369.37±22.412) 1 602.91±61.71 0.230±0.0072)5 d 5 367.37±31.952) 1 788.76±188.001) 0.206±0.012 7 d 5 439.00±22.662) 1 821.33±86.562) 0.241±0.0042)腦泰方組 1 d 5 265.70±24.433) 1 576.54±166.433) 0.169±0.0122)3)3 d 5 259.92±28.473) 1 713.64±155.762) 0.152±0.0112)3)5 d 5 263.55±18.302)3) 1 654.15±152.85 0.160±0.0112)3)7 d 5 366.01±18.802)3) 1 939.59±167.702) 0.189±0.0063)正常對(duì)照組 5 309.41±31.28 1 554.99±67.01 0.199±0.011與假手術(shù)組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01;與模型組比較,3)P＜0.01

3 討 論

正常情況下,TXA2和PGI2保持著動(dòng)態(tài)平衡以維持對(duì)血管及供血的調(diào)節(jié);腦缺血時(shí)神經(jīng)組織損傷,花生四烯酸代謝異常,導(dǎo)致TXA2和 PGI2的比例失調(diào),血小板合成 TXA2增多,導(dǎo)致血小板過(guò)度聚集和血管強(qiáng)烈收縮,導(dǎo)致低灌流,加重腦組織的損傷[4,5]。因此,降低 TXA2含量,恢復(fù) TXA2和PGI2的相對(duì)平衡以保護(hù)腦組織日益受到重視[6]。

本研究采用線栓法建立大鼠腦缺血再灌注模型,腦血流被暫時(shí)阻斷,局部腦組織因缺血而壞死,缺血區(qū)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能紊亂,表現(xiàn)為T(mén)XA2釋放增加,使 TXA2/PGI2平衡破壞,從而導(dǎo)致血栓形成。模型組1 d、3 d、5 d、7 d血漿 TXB2含量和TXB2/6-Keto-PGF1α比值升高,說(shuō)明血小板聚集作用加強(qiáng),聚集的血小板再發(fā)生變形,進(jìn)一步釋放出前列環(huán)素等活性物質(zhì),如此反復(fù),血小板聚集越來(lái)越多,導(dǎo)致急性缺血性腦血管疾病的發(fā)生。經(jīng)腦泰方治療后,血漿TXB2含量和TXB2/6-Keto-PGF1α比值明顯降低,至第7天,TXA2和PGI2之間的動(dòng)態(tài)平衡已趨向正常。故認(rèn)為腦泰方可降低腦缺血損傷時(shí)TXA2合成,調(diào)節(jié)TXA2和PGI2之間的動(dòng)態(tài)平衡,從而抑制了血小板的聚集,舒張血管,增加腦血流量,減輕缺血時(shí)腦組織的損傷程度,進(jìn)而降低腦缺血后的致殘程度,這可能是腦泰方治療腦缺血取得較好療效的機(jī)制之一。

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