穩(wěn)心顆粒對異丙腎上腺素誘發(fā)豚鼠心律失常的電生理影響

徐 濤,陳立鋒,李方江,范 凌

心室流出道過去一直被認(rèn)為是血液的輸出途徑,近年來隨著臨床電生理的檢測和射頻消融技術(shù)的發(fā)展,發(fā)現(xiàn)一些過去難以診斷的室顫、早搏、心動(dòng)過速等心律失常與心室流出道的結(jié)構(gòu)、形態(tài)和功能障礙有關(guān)。穩(wěn)心顆粒治療各種類型的心律失常臨床上都取得較好的療效[1-3],且具有療效顯著、毒性低、不良反應(yīng)小等特點(diǎn),但其對心室流出道的影響卻少有研究。本研究采用標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極細(xì)胞內(nèi)記錄技術(shù),觀察了穩(wěn)心顆粒對異丙腎上腺素(Iso)誘發(fā)豚鼠心律失常模型的影響,以探討其作用于心律失常的機(jī)制及靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及試劑 豚鼠,雌雄不拘,200 g～350 g,中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。家兔,雌雄不拘,2 500 g～3 000 g,河北北方學(xué)院動(dòng)物室提供。穩(wěn)心顆粒由山東步長制藥有限公司出品,批號081002。

1.2 標(biāo)本制備 豚鼠擊顱致昏后迅速開胸取出心臟,置于氧飽和的改良Locke液中。主動(dòng)脈前庭標(biāo)本制備參見文獻(xiàn)[4]。制好的標(biāo)本用不銹鋼針固定于灌流槽(1.5 cm×2 cm,容積約4 ml)內(nèi)的硅橡膠上。用氧飽和的改良Locke液進(jìn)行恒溫[(35±1)℃]、恒速(5 ml/min)灌流,標(biāo)本在灌流液中穩(wěn)定30 min后開始實(shí)驗(yàn)。

1.3 電位引導(dǎo) 玻璃微電極充以飽和KCl電極液后,直流電阻為(10～20)MΩ。引導(dǎo)主動(dòng)脈前庭自律細(xì)胞自發(fā)電位,若記錄不到,則將刺激電極置于標(biāo)本遠(yuǎn)離瓣膜一端的心肌組織上,給予波寬2 ms、1 Hz、兩倍閾強(qiáng)度的方波刺激(YC-2型刺激器,成都儀器廠),刺激時(shí)間由數(shù)秒至數(shù)分鐘不等,直至誘發(fā)出穩(wěn)定的自發(fā)節(jié)律,即停止電刺激開始實(shí)驗(yàn)。自發(fā)慢反應(yīng)電位經(jīng)SWF-1 B型微電極放大器(成都儀器廠生產(chǎn))放大,經(jīng)RM 6280C多道生理信號采集系統(tǒng)(成都儀器廠生產(chǎn))輸入微機(jī),自動(dòng)顯示電信號,并分析自發(fā)慢反應(yīng)電位的各項(xiàng)參數(shù)指標(biāo)。

1.4 實(shí)驗(yàn)過程及分組 家兔分兩組,穩(wěn)心顆粒組(n=8),以每只(4～5)g/kg稀釋后灌胃,1次/天,共1周;對照組(n=8),以同等量的生理鹽水灌胃,1次/天,共1周。1周后各自局部手術(shù),頸動(dòng)脈放血,離心取血漿。電生理記錄,待自發(fā)節(jié)律穩(wěn)定10 min后,開始采集一組正常的自發(fā)慢反應(yīng)電位作對照,然后改用含有100 μ mol/L Iso的藥液灌流,制造心律失常模型,記錄電位變化,然后再改用100 μ mol/L Iso+家兔血漿灌流,觀察不同時(shí)間電位的情況。實(shí)驗(yàn)分組,藥物血漿組:對照組(n=8),Iso模型組(n=8),Iso+藥物血漿組(n=8)。對照血漿組:對照組(n=8),Iso模型組(n=8),Iso+對照血漿組(n=8)。

1.5 觀測指標(biāo) 最大舒張電位(maximal diastolic potential,MDP)、動(dòng)作電位幅度(amplitude of action potential,APA)、O相最大去極速度(maximal rate of depolarization,Vmax)、4相自動(dòng)去極速度(velocity of diastolic depolarization,VDD)、復(fù)極50%和90%時(shí)間(50%and 90%of duration of action potential,APD50and APD90)以及自發(fā)放電頻率(rate of pacemaker firing,RPF)。

2 結(jié) 果

穩(wěn)心顆粒對Iso誘發(fā)主動(dòng)脈前庭心律失常模型的影響:①用100 μ mol/L Iso灌流后主動(dòng)脈前庭自律細(xì)胞出現(xiàn)了心律失常,與對照組比較,RPF和VDD加快(P＜0.01),APA和MDP的絕對值顯著增大,Vmax明顯加快,APD50和APD90明顯縮短(P＜0.01)。②Iso+生理鹽水灌胃組血漿灌流10 min,與Iso模型組比較,各項(xiàng)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③Iso+穩(wěn)心顆粒灌胃組血漿灌流10 min,與Iso模型組和Iso+生理鹽水灌胃血漿比較,RPF和VDD減慢,APA和MDP的絕對值顯著減小,Vmax明顯減慢,APD80和APD90明顯延長。詳見表1。

表1 穩(wěn)心顆粒對異丙腎上腺素誘發(fā)主動(dòng)脈前庭心律失常模型的影響(±s)

表1 穩(wěn)心顆粒對異丙腎上腺素誘發(fā)主動(dòng)脈前庭心律失常模型的影響(±s)

組別 VDD(mV/s) RPF(bpm) MDP(mV) Vmax(V/s) APA(mV) APD50(ms) APD90(ms)對照組 24.5±2.8 98.5±6.9 -57.7±7.6 6.0±3.5 62.6±5.8 115.8±7.5 182.7±8.9 Iso模型組 42.3±2.91) 183.5±8.51) -69.2±7.11) 18.4±3.71) 71.5±6.31) 70.5±9.41) 120.3±8.31)Iso+對照血漿組 43.1±3.11) 183.7±9.11) -69.5±7.81) 18.9±3.61) 70.9±7.11) 69.9±9.61)119.6±8.71)Iso+藥物血漿組 27.6±3.32)3)99.8±8.62)3)-55.3±8.22)3)7.8±3.42)3)61.1±6.72)3)110.5±8.42)3)175.2±9.42)3)與對照組相比,1)P＜0.01;與Iso模型組相比,2)P＜0.01;與Iso+對照血漿組相比,3)P＜0.01

3 討 論

穩(wěn)心顆粒由黨參、黃精、三七、琥珀、甘松組成,是中國第一個(gè)調(diào)節(jié)多離子通道的抗心律失常專利中成藥,經(jīng)臨床觀察可用于治療各種類型心律失常。

本實(shí)驗(yàn)用異丙腎上腺素制造左心室流出道組織心律失常模型,以進(jìn)一步探討穩(wěn)心顆?？故倚孕穆墒С５淖饔脵C(jī)制及靶點(diǎn)。用異丙腎上腺素制造了心律失常模型,出現(xiàn)RPF和VDD明顯加快,可能與以下因素有關(guān):Iso降低If離子流的閾電位,使之易于興奮激活,幅值增大;增加鈣流(ICa-L和ICa-T),從而加速4期自動(dòng)除極速率;增加Ik幅值,加快其衰減過程。出現(xiàn)APA增大和Vmax加速,可能與 Iso能增加心肌細(xì)胞 L型鈣流(Ica-L)有關(guān)。出現(xiàn)APD50和APD90縮短,主要是因?yàn)镮so增大了復(fù)極過程中K+外流。MDP顯著增大,可能是由于Iso具有刺激生電性鈉泵的作用之故[5]。

隨后,用Iso+穩(wěn)心顆粒灌胃兔血漿灌流后,心律失常模型得到了一定程度的糾正,出現(xiàn)了左心室流出道自發(fā)慢反應(yīng)電位的RPF和VDD減慢,APA和MDP的絕對值顯著減小,Vmax明顯減慢,APD50和APD90明顯延長。推測可能是中藥具有明顯的多個(gè)離子通道靶點(diǎn)作用的特點(diǎn)?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),穩(wěn)心顆?？商岣吖跔顒?dòng)脈血流量,降低心肌耗氧量,改善心肌缺血及心功能狀態(tài)[6]。其中,穩(wěn)心顆粒所含的甘松提取物可減慢鈉通道滅活后的恢復(fù)過程以及抑制鈣通道的激活[7],這可能導(dǎo)致了If和ICa-T的減小;從而減慢4期自動(dòng)除極速率,使VDD和RPF減慢。甘松中含纈卓酮,纈卓酮具有膜的穩(wěn)定作用,三七總皂苷也具有膜的抑制作用[6],兩者能夠延長動(dòng)作電位時(shí)程,使APD50和 APD90明顯延長。穩(wěn)心顆粒可抑制 ICa-L[7],從而使Vmax明顯減慢,APA顯著減小。MDP的絕對值顯著減小,可能是穩(wěn)心顆粒調(diào)節(jié)了鉀通道和提高Na+-K+-ATPase活性有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)以離體動(dòng)物心臟為研究對象,觀察了穩(wěn)心顆粒對異丙腎上腺素誘發(fā)豚鼠左心室流出道心律失常模型的影響,發(fā)現(xiàn)有很好的治療作用,認(rèn)為穩(wěn)心顆粒能夠治療室性心律失常。心室流出道也可能是其作用靶點(diǎn)之一,其更加詳細(xì)的機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。

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