細(xì)菌特克等殺菌劑對魔芋軟腐病的室內(nèi)藥效試驗(yàn)

吳金平 宋志紅 郭 蘭 蘭敢生 顧玉成* 胡中立

(1湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所,武漢 430064;2武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,武漢 430072;3湖北省農(nóng)業(yè)廳,武漢 430070;4三九企業(yè)集團(tuán)成都普惠生物工程有限公司,成都 610500)

現(xiàn)在魔芋種植業(yè)面臨的最大問題和威脅就是軟腐病,該病害發(fā)生時(shí)產(chǎn)量損失一般在 30%～50%,嚴(yán)重時(shí)達(dá) 80%以上甚至絕收,農(nóng)民是 “談?dòng)笊儭盵1]。針對這種情況,抗病育種顯的尤為突出,但至今未發(fā)現(xiàn)具抗病性的類型,目前還是以藥劑防治為主[2]。為此,我們篩選細(xì)菌特克等 3種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)藥效試驗(yàn),以探討防治魔芋軟腐病的有效藥劑,為田間防治提供參考。

1 材料方法

1.1 供試材料

1.1.1 菌種。本實(shí)驗(yàn)室保存的魔芋軟腐病病菌 Erwinia carotovora subsp carotovora(GenBank登錄號為FJ463863)菌株。

1.1.2 供試藥劑。鏈霉素(氨基葡萄糖型抗生素;北京中農(nóng)

濟(jì)興生物技術(shù)有限公司生產(chǎn));細(xì)菌特克(乙基鏈霉素胍;成都普惠生物工程有限公司);三氯異氰尿酸(三氯三嗪三酮;廣西南寧化工集團(tuán)有限公司生產(chǎn))。各藥劑濃度根據(jù)廠家說明書的建議調(diào)節(jié)。

1.1.3 培養(yǎng)基。試驗(yàn)采用 LB培養(yǎng)基,配方如下:酵母提取物 5g,蛋白胨 10g,NaCl 10g,瓊脂 15g,蒸餾水 1000m L,pH 7.4～7.6。

1.2 研究方法

1.2.1 紙碟法。將軟腐病病原菌在 LB培養(yǎng)基上劃線,28℃培養(yǎng) 24h,用無菌水稀釋成 1×107cfu/m l濃度的菌懸液供用按 100μL的菌液加入到 100mL滅菌的 LB固體培養(yǎng)基中,混合制成帶菌的培養(yǎng)基。將滅過菌的直徑為 10mm的濾紙片,用滅過菌的鑷子等距離均勻的平放于帶菌的培養(yǎng)基中,每個(gè)濾紙上加 10μl不同濃度的不同藥劑,每皿放 3個(gè),分別為同一種藥劑的 3個(gè)濃度,無菌水為對照,3次重復(fù)。把培養(yǎng)皿置于 28℃恒溫箱中培養(yǎng),24h后觀測結(jié)果(表 1)。采用十字交叉法測抑菌直徑 2次,根據(jù)平均值確定藥劑抑菌能力的大小。

1.2.2 離體培養(yǎng)法。取健康魔芋的球莖經(jīng)無菌水清洗,75%酒精表面消毒,無菌水漂洗 2～3次后,用打孔器打成直徑 1.5cm,高 1cm的圓柱形小塊,將這些小塊浸泡在 1×107cfu/mL濃度的菌懸液中 1h,無菌浸泡水為對照;然后將各組織塊分別在不同濃度的各種藥劑中處理 30s、1min和 5min,無菌水處理為對照,無菌濾紙上吸干藥劑,將芋塊放在打濕的濾紙上置于 28℃恒溫箱中保濕培養(yǎng),48h后觀察結(jié)果(表 2)。每一處理 3次重復(fù),重復(fù) 3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 紙碟法

從表 1可以看出,細(xì)菌特克的最低有效抑菌濃度為 0.0015 mg/m L,而鏈霉素和三氯異氰尿酸的最低有效抑菌濃度在 10mg/mL左右,這 2種藥劑的最低有效抑菌濃度是細(xì)菌特克的 6 000多倍,但鏈霉素和三氯異氰尿酸的最低有效抑菌濃度幾乎沒有差異。

2.2 離體培養(yǎng)法

在用鏈霉素和細(xì)菌特克處理魔芋小塊時(shí),魔芋小塊保持切割下來的灰白色,堅(jiān)硬;而三氯異氰尿酸處理的魔芋小塊褐化,萎蔫。根據(jù)紙碟法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇離體培養(yǎng)這 3種藥劑的濃度,由于軟腐菌侵染 45min后為不可逆侵染[3],所以將魔芋小塊浸泡在 1×107cfu/mL菌液中 1h,然后將菌液倒掉,分別用不同濃度的藥劑處理 30s、1min和 5min。從表 2可以看出,清水浸泡的魔芋小塊不用藥劑處理,48h后健康;軟腐菌浸泡的魔芋小塊用清水處理,48h后完全腐爛;被軟腐菌侵染的魔芋小塊在三氰異氰尿酸的藥劑中處理 5min才有效,而其余時(shí)間無效,但鏈霉素和細(xì)菌特克在 30s的處理時(shí)間內(nèi)都為有效。這就表明三氰異尿酸的滲透能力比較差,不適宜用于大田的魔芋軟腐病的防治。

表 2 離體培養(yǎng)條件下供試藥劑對魔芋軟腐病菌的抑菌效果

3 小結(jié)與討論

本結(jié)論主要是針對本次實(shí)驗(yàn)所選用的藥劑而言的,只是供作參考,因?yàn)榧幢闶峭瑯拥乃巹┯刹煌膹S家生產(chǎn)也會有不一樣的防效。另外,不同的地方所使用的藥劑也因當(dāng)?shù)氐臍夂颦h(huán)境,土壤結(jié)構(gòu)等而應(yīng)有不同的選擇。因此,在選擇藥劑時(shí)要考慮多方面的因素。

魔芋軟腐病是魔芋生產(chǎn)中迫切需要解決的難題,現(xiàn)階段在魔芋軟腐病的防治上藥效最好的是農(nóng)用鏈霉素[4,5],但目前還沒有一種藥劑的防效在魔芋軟腐病發(fā)病盛期 (8月中下旬)能夠達(dá)到 50%。因此,尋找更加有效的藥劑是當(dāng)務(wù)之急。本次實(shí)驗(yàn)選用的細(xì)菌特克藥劑比農(nóng)用鏈霉素的效果要好的多,下一步工作是將該藥應(yīng)用于大田,希望其應(yīng)用于生產(chǎn)能解燃眉之急。

[1]孫光谷 .關(guān)于魔芋種植業(yè)的發(fā)展[J].魔芋通訊.1999

[2]劉佩英主編.魔芋學(xué)[M].中國,北京,中國農(nóng)業(yè)出版社,2004

[3]董漢松,王金生,方中達(dá) .大白菜根表結(jié)構(gòu)與軟腐歐氏桿菌吸附和侵人的關(guān)系[J].植物病理學(xué)報(bào),1993,23(3):275-280

[4]王貴斌,王新生 .硫酸鏈謄素等藥劑防治魔芋軟腐病試驗(yàn)[J].植保技術(shù)與推廣,2002,22(5):32

[5]向振今 .不同農(nóng)藥防治魔芋軟腐病田間藥效試驗(yàn)[J].山區(qū)開發(fā),2003,2(21):37