乳腺癌組織中NF-κ B和HER-2的表達(dá)及意義

張 莉,顧建建

(江蘇省南通市通州人民醫(yī)院腫瘤科,江蘇南通,226300)

核轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B是一種具有多向調(diào)節(jié)功能的轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)控細(xì)胞增殖,分化,凋亡及惡性轉(zhuǎn)化[1-2]。研究發(fā)現(xiàn),人上皮細(xì)胞生長因子受體-2(HER-2)過表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞中NF-κ B活化密切相關(guān)[3]。本研究采用免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中NF-κ B和HER-2基因的表達(dá),探討兩者表達(dá)狀態(tài)之間的相互關(guān)系及意義。

1 材料與方法

1.1 材料

收集我院2006年1月～2007年12月的乳腺癌存檔蠟塊40例?；颊吣挲g27～80歲,中位年齡51歲。腫瘤直徑1 cm～8 cm,腋淋巴結(jié)陽性者17例,陰性23例。按照中國抗癌協(xié)會(huì)《常見惡性腫瘤診治規(guī)范——乳腺癌分冊(cè)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷和病理學(xué)分期,其中Ⅰ期5例,Ⅱ期26例,Ⅲ期9例。所有患者術(shù)前均未行化療,放療及內(nèi)分泌治療。

1.2 試劑和方法

鼠抗人NF-κ B p65單克隆抗體,HER-2單克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。采用免疫組化SP法進(jìn)行染色,操作按試劑盒說明書進(jìn)行,抗原修復(fù)均采用高壓熱修復(fù),DAB顯色,蘇木精復(fù)染細(xì)胞核,二甲苯透明,中性樹膠封片。用PBS取代一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

每張切片選取染色良好區(qū)域,隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野,每個(gè)視野觀察 100個(gè)細(xì)胞。NF-κ B P65定位于胞漿,亦可見于胞核。HER-2定位于細(xì)胞膜,亦可見于胞漿。NF-κ B以細(xì)胞漿著色為準(zhǔn),HER-2以細(xì)胞膜著色為準(zhǔn),著色陽性細(xì)胞數(shù) >10%為陽性。(圖1-2)。

圖1 NF-κ B在乳腺癌中的陽性表達(dá) (SP法×400)

圖2 HER-2在乳腺癌中的陽性表達(dá) (SP法×200)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)資料均經(jīng)SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,采用檢驗(yàn),四格表確切概率法及Spearman相關(guān)分析,以P<0.05判為具有顯著性差異。

2 結(jié) 果

2.1 NF-κ B和HER-2在乳腺癌中的表達(dá)情況

乳腺癌組織中,NF-κ B和HER-2的陽性表達(dá)率分別為 65%(26/40),50%(20/20)。NF-κ B,HER-2表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征間的關(guān)系見表1。

2.2 NF-κ B活化與HER-2蛋白間的相關(guān)性

乳腺癌組織中NF-κ B活化與HER-2蛋白表達(dá)存在明顯相關(guān)(χ2=7.033,P<0.01)。

表1 NF-κ B,HER-2表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征間的關(guān)系 [n(%)]

3 討 論

NF-κ B是從B細(xì)胞的核抽提物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因增強(qiáng)子的B位點(diǎn)結(jié)合的核蛋白因子,幾乎存在于所有類型細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)。NF-κ B在受到適宜刺激或存在組成型表達(dá)時(shí),在胞漿中與其抑制劑IKB分離,p65/50轉(zhuǎn)位至胞核,調(diào)控其下游基因的表達(dá)。健康人乳腺上皮細(xì)胞核提取物中NF-κ B的表達(dá)非常低,而乳腺癌細(xì)胞核提取物中NF-κ B呈顯著的高表達(dá),提示NF-κ B的異常核內(nèi)表達(dá)和乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)NF-κ B在乳腺癌組織中受到激活,呈高度表達(dá),與患者年齡,腫瘤大小,病理類型無關(guān),但與乳腺癌發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。隨著臨床分期的增加,NF-κ B表達(dá)陽性率有增加趨勢(shì),但分期間差異無顯著性意義(P>0.05)。有研究表明,在雌激素或其它物質(zhì)的長期刺激下,乳腺上皮細(xì)胞釋放了NF-κ B,使其由胞漿開始轉(zhuǎn)入胞核,并啟動(dòng)一系列調(diào)控機(jī)制,促進(jìn)乳腺導(dǎo)管、腺泡上皮細(xì)胞增殖,并逐漸促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生分化,向惡性轉(zhuǎn)化,直至癌變。Brantley等[4]在小鼠身上移植Iκ Bα缺失的乳腺上皮細(xì)胞,觀察發(fā)現(xiàn)小鼠乳腺細(xì)胞外基質(zhì)明顯減少,一定程度上揭示了NF-κ B在促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用。本研究中觀察發(fā)現(xiàn),NF-κ B在胞核中有一定程度的表達(dá),這可能與乳腺癌細(xì)胞分化程度有關(guān)。HER-2基因是人類表皮生長因子受體家族的第2個(gè)成員,其編碼的蛋白是一種跨膜糖蛋白,具有酪氨酸激酶活性。HER-2基因主要在胚胎發(fā)育時(shí)表達(dá),而在乳腺癌、卵巢癌等多種腫瘤中存在異常表達(dá),并且可以通過多條信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮促進(jìn)腫瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及腫瘤血管生成作用。本研究結(jié)果顯示,乳腺癌中HER-2的陽性表達(dá)率為50%,且在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中表達(dá)存在差異,這與臨床見到的HER-2陽性的病人易早期復(fù)發(fā)且生存期較短的現(xiàn)象一致,證實(shí)HER-2與乳腺癌浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為有關(guān)。本研究中,盡管臨床分期越高,HER-2陽性表達(dá)率越高,但不同分期的腫瘤組織中表達(dá)沒有差異,這可能與研究所取的樣本例數(shù)不大有關(guān),有待于行大樣本進(jìn)行深入研究。

本研究顯示,乳腺癌中 NF-κ B與 HER-2具有不同程度的表達(dá),且兩者的表達(dá)具有相關(guān)性,與目前文獻(xiàn)報(bào)道一致[5],從而證實(shí)NF-κ B可激活HER-2基因的表達(dá),在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。

[1]Nagai S,Washiyama K,Kurimoto M,et al.Aberrant nuclear factorκ appa B activity and is paticipation in the growth of human maligant astrocytoma[J].Neurosurg,2002,96(5):909.

[2]Hayden M S,Ghosh S.Signaling to NF-κ B[J].Genes Dev,2004,18(18):2195.

[3]Makino K,Day C P,Wang S C,et al.Upregulation of IKKa/IKKb by integrin-linked kinase is required for HER2/neuinduced NF-kB antiapoptoticpathway[J].Oncogene,2004,23(21):3883.

[4]Brantley D M,Chen C L,Muraoka R S,et al.Nuclearfactor-κ appaB(NF-κ appaB)regulates proliferation and branching in mouse mammary epithelium[J].Mol Biol Cell,2001,12:1445.

[5]Biswas D K,Shi Q,Baily S,et al.NF-κ B activation in human breast cancer specimens and its role in cell proliferation and apoptosis[J].PNAS,2004,101(27):10137.