復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊中主要有效成分含量測定方法研究Δ

趙瑞芝，焦玉紅，周莉玲（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥制劑實驗室，廣州市 51010；.山東濰坊市金通醫(yī)藥有限公司，濰坊市 61000；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州市 510006）

復(fù)方虎杖膠囊由虎杖、龍膽等藥組成，具有活血化瘀、增強神經(jīng)功能康復(fù)等功效[1～7]，為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院治療腦出血后神經(jīng)功能康復(fù)的有效制劑。由于服用量較大，故筆者在篩選有效部位的基礎(chǔ)上將其劑型改革為半固體骨架膠囊，可有效減少服用量，增強患者用藥依從性。為了控制產(chǎn)品質(zhì)量及進行制劑質(zhì)量評價，筆者建立了復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊中4種主要有效成分大黃素、白藜蘆醇、虎杖苷、龍膽苦苷的含量測定方法。

1 儀器與試藥

CS9301型薄層掃描儀（日本島津公司）；半自動點樣儀、自動成像系統(tǒng)、自動展開系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）；硅膠G（青島海洋化工廠）；預(yù)制薄層板（美國Merck公司）。

復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥制劑實驗室自制，復(fù)方虎杖浸膏在70℃加入聚乙二醇6000等熔融，混合均勻，以注射器分裝于明膠硬膠囊中，即可）；大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量：98%，批號：0756-200009）；白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司，含量：99%，批號：111535-200502）；虎杖苷標(biāo)準(zhǔn)品（西安寶賽生物制品公司，含量：99%，批號：1535-2000）；龍膽苦苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量：98%，批號：0623-199967）；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

分別取大黃素、白藜蘆醇、虎杖苷、龍膽苦苷對照（標(biāo)準(zhǔn)）品約2、4、8、7 mg，精密稱定，以無水乙醇分別定容于25、10、10、5 mL量瓶中，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取樣品10粒，除去膠囊殼，將內(nèi)容物混合。取內(nèi)容物約0.02 g，精密稱定，加無水乙醇5 mL，溶解洗滌，過濾，殘渣以無水乙醇反復(fù)洗滌至無色，合并洗滌液，水浴濃縮至干，以無水乙醇溶解定容于2 mL量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 色譜分析條件

硅膠G薄層板；展開劑（1）：石油醚-乙酸丁酯-甲醇-冰醋酸（4∶1∶0.7∶0.03）；展開劑（2）：氯仿-甲醇（7∶2）。展開劑（1）可使大黃素、白藜蘆醇與其它成分基線分離，薄層掃描圖（掃描波長293 nm）見圖1。展開劑（2）可使龍膽苦苷、虎杖苷與其它成分基線分離，薄層掃描圖（掃描波長270 nm）見圖2。掃描方式：反射式線性掃描，SX＝3；檢測波長：大黃素為285 nm，白藜蘆醇為293 nm，龍膽苦苷為270 nm，虎杖苷為313 nm。

2.4 線性關(guān)系考察

取對照品，分別點樣0.5、1、2、3、4、5 μL，大黃素、白藜蘆醇以展開劑（1）展開，龍膽苦苷、白藜蘆醇以展開劑（2）展開，分別掃描，得對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線：大黃素為A＝105.65X+2.16（r＝0.999），白藜蘆醇為A＝292.20X+87.77（r＝0.999），虎杖苷為A＝364.39X－36.58（r＝0.999），龍膽苦苷為 A＝61.725X+107.23（r＝0.999）；線性范圍：大黃素為0.088～0.528 μg，白藜蘆醇為0.156～0.78μg，虎杖苷為0.312～1.56μg，龍膽苦苷為0.71～7.1μg。

2.5 掃描穩(wěn)定性及點樣精密度試驗

取同一濃度樣品點5個斑點，展開，掃描，計算點樣精密度，得RSD值：大黃素為2.15%，白藜蘆醇為2.34%，虎杖苷為1.98%，龍膽苦苷為2.21%。將上述薄層板每隔30 min掃描1次，根據(jù)不同時間峰面積積分值考察穩(wěn)定性，結(jié)果在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 樣品含量測定

大黃素與白藜蘆醇同板測定，虎杖苷與龍膽苦苷同板測定。點樣采用瑞士CAMAG公司半自動點樣儀，點樣速度為50μL·min-1，點樣形狀為條帶樣，帶寬為5 mm；展開采用瑞士CAMAG公司全自動展開儀，溫度為12℃，相對濕度為65%，飽和時間為10 min，展開距離為8 cm，吹干時間為10 min。過程如下：在已活化的硅膠G薄層板上點對照品適量（大黃素1、6 μL，白藜蘆醇0.5、2 μL，虎杖苷0.5、2 μL，龍膽苦苷0.5、2 μL）與樣品5 μL，分別以展開劑（1）、（2）掃描，測定。復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊有效成分含量測定結(jié)果見表1。

2.7 回收率試驗

在已經(jīng)測定含量的樣品中加入對照品適量，照“2.2”項下方法提取，定容，照“2.7”項下方法測定，計算提取回收率，結(jié)果見表2。

表1 復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊有效成分含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 1 Content determination of four components in Compound P.cuspidatum semisolid matrix capsule（n＝3）

表2 回收率試驗結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of recovery test（n＝3）

3 討論

復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊中輔料主要為聚乙二醇6000，加熱時可熔融，并溶于乙醇，會給樣品處理帶來干擾；若在室溫提取則由于乙醇難以浸入到樣品內(nèi)部，導(dǎo)致提取時間較長。而白藜蘆醇、虎杖苷對光均較敏感，過長的提取時間對其穩(wěn)定性不利。采用超聲提取的方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對白藜蘆醇、虎杖苷、大黃素均有不利影響；后采用水浴（50℃）先讓聚乙二醇熔融，然后室溫冷卻，使提取溶劑與樣品充分接觸而又避免將輔料溶于供試品溶液中，較好地解決了這個問題。

龍膽苦苷與虎杖苷極性較接近，以石油醚-乙酸丁酯-甲醇-冰醋酸（4∶2∶1∶0.1）為展開劑不能將虎杖苷與龍膽苦苷分離（此展開劑可使白藜蘆醇與虎杖中其它成分基線分離），改變展開劑組成仍不能改善分離效果；改用氯仿-甲醇（7∶2）為展開劑，虎杖苷可與龍膽苦苷基線分離，但龍膽苦苷與虎杖中其它成分又難以分離；后采用美國Merck公司預(yù)制薄層板才使龍膽苦苷與其它成分基線分離，達到了分析測定的目的。

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