2007-2008年無錫地區(qū)豬無名高熱病病例中常見病原的檢測(cè)分析

毛愛民 ，王耀君 ，畢鄒生 ，袁冬東 ，馮嘉林

（1.無錫市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心， 214026；2.宜興市丁蜀鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心， 214220；3.無錫市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所， 214026）

2001年以來，江蘇以及周邊地區(qū)在每年的5月底至10月份，爆發(fā)一種以高熱，食欲下降，呼吸困難，部分妊娠母豬流產(chǎn)，死產(chǎn)為特征的豬傳染病。該病可感染不同年齡豬，發(fā)病率高，幾乎達(dá)到100%；死亡率隨病程、繼發(fā)感染的嚴(yán)重程度不同而異。我市深受“豬無名高熱”的危害，在豬無名高熱病沒有完全確定的情況下，對(duì)豬無名高熱病病例中豬圓環(huán)病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒、豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒等五種常見病毒和巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體、大腸桿菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌、豬附紅細(xì)胞體等五種常見細(xì)菌狀況進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，為無名高熱病的防制提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料的收集和處理

151份豬無名高熱病病料，收集于2007年6月份到2008年10月份，來自于江蘇無錫及周邊地區(qū)。采集其肺臟、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體等器官，混合研磨，用 PBS（pH7.2）按 1：5稀釋，反復(fù)凍融3次后離心取上清液，用于提取RNA和DNA。

1.2 病毒PCR檢測(cè)

按研究一建立的方法進(jìn)行病毒檢測(cè)。

1.3 細(xì)菌分離和鑒定

151份豬無名高熱病病料無菌取剖檢病豬的心、肝、脾、肺和腎接種于鮮血瓊脂平板和巧克力平板，在37℃培養(yǎng)觀察，24h后在兩種平板上均可見到光滑、圓形，邊緣整齊的白色菌落，不溶血，革蘭氏染色陰性，兩極濃染的球桿菌，經(jīng)生化鑒定為巴氏桿菌（Pm）。繼續(xù)培養(yǎng)48h后在兩種平板上又長(zhǎng)出另一種邊緣整齊、圓形透明、針尖大小的菌落，沒有溶血現(xiàn)象，染色可見短小桿狀、球桿形、絲狀等不同形態(tài)的細(xì)菌，進(jìn)行生化鑒定為副豬嗜血桿菌（HPs）。豬肺炎支原體（MH）以KM2和MP培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中注意適當(dāng)接觸氧氣，主要以杭州華安生物技術(shù)有限公司的支原體聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）試劑盒進(jìn)行；大腸桿菌（E.coli）在麥康凱培養(yǎng)基上呈現(xiàn)粉紅色菌落；傳染性胸膜肺炎放線桿菌（AAP）初次分離時(shí)應(yīng)供給5%～10%CO2，且最適合生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為巧克力瓊脂平板和綿羊血瓊脂平板，在葡萄球菌附近可形成表面光滑、圓形、稍突起、邊緣整齊、針尖大小的菌落，呈明顯的溶血；豬鏈球菌（SS）將所采病料涂片，革蘭氏染色鏡檢，接種鮮血瓊脂平板。37℃需氧培養(yǎng)24h后，挑取可疑菌落接種于匹克氏增菌液，37℃培養(yǎng)24h后，革蘭氏染色，顯微鏡檢查。分離到的細(xì)菌用生化試驗(yàn)進(jìn)行系統(tǒng)鑒定。生化試劑由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。豬附紅細(xì)胞體（E.suis）的鑒定為抽取少量可疑患豬附紅細(xì)胞體的豬血液大約l毫長(zhǎng)，制成血液抹片，經(jīng)Giemsa染色法染色之后于油鏡之下做觀察。若有感染，可于紅細(xì)胞周圍中發(fā)現(xiàn)立克次氏體。

2 結(jié)果

2.1 無名高熱病的流行特點(diǎn)和臨床特征

2007-2008年，無錫地區(qū)也發(fā)生了以高熱、食欲下降、呼吸困難和繁殖障礙為特征的無名高熱病。該病可感染不同年齡和品種的豬，發(fā)病率幾乎是100%；死亡率隨病程和繼發(fā)感染的情況而異，一般為30%～40%，嚴(yán)重者可達(dá)70%～90%。該病傳播迅速，無特異防制方法，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。

2.1.1 流行特點(diǎn)

2.1.1.1 一般發(fā)生在氣溫較高的季節(jié)，病程5～15天左右，但是疾病的季節(jié)性愈來愈不明顯。依飼養(yǎng)管理水平和采取的治療措施不同而表現(xiàn)出30%～90%的全群死亡率；母豬流產(chǎn)率為60～100%，母豬死亡率為20%左右。

2.1.1.2 防疫體系健全的規(guī)模化豬場(chǎng)發(fā)病率較低，對(duì)防疫工作不夠重視的中小型豬場(chǎng)發(fā)病率較低。沒有嚴(yán)格檢疫，而從場(chǎng)外購進(jìn)豬苗飼養(yǎng)的豬場(chǎng)發(fā)病嚴(yán)重。

2.1.1.3 任何日齡的豬均可發(fā)病。在同一豬場(chǎng)的流行一般從中豬開始，再擴(kuò)展到大豬、種豬，之后到保育豬；哺乳仔豬發(fā)病不明顯，但因母豬發(fā)病無法正常哺乳而導(dǎo)致仔豬死亡。

2.1.1.4 藥物治療效果不太理想。大部分發(fā)病豬使用了氟苯尼考、替米卡星、泰樂菌素、青霉素、阿莫西林、磺胺類等抗生素藥物以及復(fù)方氨基比林、安乃近等退熱藥，雖然體溫暫時(shí)下降，但往往在第2～3天后體溫又上升；部分病豬治療后仍高燒不退。有些豬場(chǎng)用藥后死亡率更高。

中國石油和化學(xué)工業(yè)聯(lián)合會(huì)會(huì)長(zhǎng)李壽生提出了同樣的觀點(diǎn)：“鹽湖是青海最重要的資源，也是國家的戰(zhàn)略資源。確立資源綜合利用，發(fā)展循環(huán)經(jīng)濟(jì)，依靠技術(shù)創(chuàng)新，向制造業(yè)下游和高端產(chǎn)品延伸產(chǎn)業(yè)鏈，青海鹽湖正在夯實(shí)循環(huán)經(jīng)濟(jì)的鹽橋，不斷延伸高質(zhì)量發(fā)展的鹽路，開創(chuàng)世界無機(jī)鹽產(chǎn)業(yè)建設(shè)鎂鋰鉀鹽的中國高地。”

2.1.2 臨床癥狀

因病原較為復(fù)雜，各個(gè)豬場(chǎng)的癥狀不盡相同。表現(xiàn)為全群發(fā)病，持續(xù)高熱，體溫41℃～42℃，個(gè)別病例達(dá)43℃，精神沉郁、采食量下降或食欲廢絕，患豬皮膚發(fā)紅，耳部、腹下和四肢末梢等處皮膚呈紫紅色的斑塊狀病變，部分患豬背部皮膚毛孔有鐵銹色出血點(diǎn)；四肢無力，喜伏臥；呼吸困難，喘氣或呈不規(guī)則呼吸；部分患豬流鼻涕，打噴嚏、咳嗽、眼分泌物增多；糞便秘結(jié)，少部分患豬下痢，尿黃而少、混濁。病程稍長(zhǎng)的病豬全身蒼白，出現(xiàn)貧血現(xiàn)象，被毛粗亂；病豬瀕死前不能站立，抽搐而死。

2.1.3 病理變化

剖檢可見病死豬的肺腫脹、變硬，呈現(xiàn)斑駁狀褐色病變（大理石樣），部分豬肺小點(diǎn)出血，大葉性或出血性肺炎，間質(zhì)明顯增寬，也有的肺臟萎縮，內(nèi)有膠凍樣物、肺組織均呈肉質(zhì)樣變性、嚴(yán)重喪失氣體交換能力；肝臟腫脹質(zhì)脆；膽囊腫大，膽汁充盈，膽囊水腫；全身淋巴結(jié)腫大，出血，嚴(yán)重壞死，呈現(xiàn)大理石樣變化，特別是腹股溝淋巴結(jié)和肺門淋巴結(jié)；脾臟腫大變黑，質(zhì)地變硬，有出血性丘疹；腎腫大，顏色變深，質(zhì)地較脆，有針尖狀出血點(diǎn)，有的有白斑；胃部有明顯的胃潰瘍病變；膀胱有的出血，有的不明顯；纖維素性胸膜炎和腹膜炎，胸腔及腹腔有纖維蛋白的滲出，個(gè)別豬肺漿膜與胸膜或心包纖維素性粘連。以上癥狀在一個(gè)豬場(chǎng)不會(huì)出現(xiàn)，但豬瘟癥狀幾乎在所有豬場(chǎng)都比較明顯。

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2.2 病料檢測(cè)結(jié)果

2007-2008年無錫地區(qū)豬無名高熱病病料的基本情況見表1。

從表1中看出，收集的病料中以保育豬和育肥豬為主，共計(jì)125份，占病料總數(shù)的82.8%。

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在細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果中陽性率最高的為豬鏈球菌，陽性率為27.2%（41）；其次是副豬嗜血桿菌，陽性率為18.5%（28），致病性大腸桿菌排第三，陽性率為11.3%（17），豬巴氏桿菌排第四，陽性率為 6.0%（9），豬肺炎支原體、傳染性胸膜肺炎放線桿菌和豬附紅細(xì)胞體的陽性率分別為0.7%、2.0%和2.6%。

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PCV2和PRRSV的二重混合感染陽性率最高，151份病料中有29份，占總數(shù)的19.2%，其次，PRRSV、SS的混合感染有24份，占總數(shù)的15.9%；PRRSV、CSFV的混合感染有15份，占總數(shù)的 9.9%；PCV2、CSFV的混合感染有13份，占總數(shù)的8.6%；PRRSV、HPs的混合感染有11份，占總數(shù)的7.3%；PCV2、SS的混合感染有10份，占總數(shù)的6.6%。

3 討論

3.1 豬無名高熱病的臨床癥狀呈現(xiàn)有三大變化：神經(jīng)系統(tǒng)，病豬會(huì)出現(xiàn)局部和全身抽筋現(xiàn)象，剖檢發(fā)現(xiàn)腦出血、充血；呼吸系統(tǒng)，豬只呼吸困難，肺部有帶血泡沫、壞死等；消化系統(tǒng)體現(xiàn)在胃粘膜充血、出血。

3.2 本次多重PCR檢測(cè)的豬高熱病病料收集于2007年6月份到2008年10月份，全部來自于無錫及周邊地區(qū)，病料以保育豬和育肥豬為主（見表1），151份中有125份（82.8%）。

3.3 PRRSV陽性率最高，在151份病料中有88份檢測(cè)結(jié)果為陽性，陽性率為58.3%。其中Nsp2缺失株為25.8，Nsp2非缺失株為 32.5，由于本實(shí)驗(yàn)建立的多重PCR方法尚不能區(qū)分野毒和疫苗毒株，所以其中有一部分可能是疫苗毒，檢測(cè)結(jié)果有待于進(jìn)一步研究。但不管是弱毒疫苗免疫，還是野毒感染，都會(huì)損傷豬免疫器官，干擾豬的免疫功能，加大豬感染其他病原微生物的概率。似乎提示PRRSV在豬高熱病的疫情中發(fā)揮了重要或協(xié)同致病的作用。

3.4 PCV2陽性率很高，151份病料中檢測(cè)出陽性60份（39.7%），進(jìn)一步證實(shí)PCV2在無錫地區(qū)豬群普遍存在和流行，可能將是今后養(yǎng)豬業(yè)疾病防制的重點(diǎn)。我們從所收集的豬流產(chǎn)胎兒體內(nèi)也檢測(cè)到PCV2，同時(shí)排除感染其他病原的可能，進(jìn)一步證實(shí)PCV2可導(dǎo)致母豬的繁殖障礙。從日齡可以看出，育肥豬階段PCV2陽性率最高（流產(chǎn)胎兒除外），表明其感染率隨著豬年齡增長(zhǎng)而升高，并且PCV2流行情況有逐漸擴(kuò)大的趨勢(shì)。

3.5 從151份病料中共檢測(cè)到CSFV 31份，陽性率為20.5%。豬瘟的陽性率很高，雖然本試驗(yàn)構(gòu)建的多重RT-PCR不能區(qū)分豬瘟疫苗毒和野毒，但是本研究所搜集的大部分樣品為受檢地區(qū)個(gè)體養(yǎng)殖戶所送的樣品，養(yǎng)殖戶防疫概念不強(qiáng)，另外，疫苗免疫效果也不確實(shí)，過度依賴豬瘟、豬丹毒、豬肺疫三聯(lián)苗的現(xiàn)象普遍，同時(shí)，豬高熱病期間，病豬、健康豬的無序流動(dòng)，也是不容忽視的因素，在我們的調(diào)查中，有近三分之一的發(fā)病是不規(guī)范引進(jìn)苗豬引發(fā)的。以上因素?zé)o疑加大了豬瘟傳播的可能性，更為重要的是，在進(jìn)行采集樣品時(shí)，能觀測(cè)到許多典型的豬瘟病理病變，如腸道紐扣狀潰瘍，脾臟周邊梗死，腎臟點(diǎn)狀出血等，而我們的多重RT-PCR檢測(cè)結(jié)果多數(shù)與臨床觀察到的豬瘟典型變化是相吻合的。由于豬瘟本身的極端破壞性以及可能引起的免疫抑制，對(duì)該地區(qū)高熱病的協(xié)同致病作用是不言而喻的。因此，做好平時(shí)特別是高熱病流行前后豬瘟的防制工作，對(duì)最大限度地降低高熱病的損失至關(guān)重要。

3.6 PPV、PRV的陽性率分別為2.0%、1.3%，說明這兩種病毒還處于散發(fā)狀態(tài)，并沒有形成大的流行。僅從樣品總數(shù)的角度出發(fā)，PPV、PRV的陽性率并不高。

3.7 除了病毒的混合感染外，病毒與細(xì)菌、細(xì)菌與細(xì)菌的混合感染在無名高熱病中也發(fā)揮著重要的作用。進(jìn)一步證實(shí)豬高熱病病例中混合感染占相當(dāng)比重。在細(xì)菌病中，鏈球菌、副豬嗜血桿菌、致病性大腸桿菌和巴氏桿菌為最主要的4種病原菌。他們?cè)诨旌细腥净騾f(xié)同感染中，可引起豬很高的死亡率。

3.8 在本試驗(yàn)所檢測(cè)的5種病毒疾病中，豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬細(xì)小病毒病和豬圓環(huán)病毒病都是免疫抑制性疾病，它們的病原都可以不同程度的損傷機(jī)體的免疫功能，降低機(jī)體對(duì)外界的抵抗能力，為繼發(fā)或是并發(fā)其它病原微生物創(chuàng)造了條件，這可能也是臨床混合感染多發(fā)的原因。

3.9 綜上所述，在高熱病病原尚未明確的情況下，傳統(tǒng)、新發(fā)傳染病的并、繼發(fā)情況堪稱嚴(yán)重，對(duì)豬高熱病的防控提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，只有全方位審視該病的復(fù)雜性，制訂科學(xué)、合理的防制措施，才有可能最后征服該病。