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    血脂平?jīng)_劑對(duì)HLP大鼠補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD55、CD59表達(dá)的影響*

    2010-05-07 04:40:46劉鋒張紅齊斌武許愛英
    關(guān)鍵詞:血脂實(shí)驗(yàn)

    劉鋒 張紅 齊斌武 許愛英

    (1陜西中醫(yī)學(xué)院2008級(jí)碩士研究生 咸陽(yáng)712046;2陜西中醫(yī)學(xué)院 咸陽(yáng)712046)

    心腦血管病是現(xiàn)代社會(huì)對(duì)人類健康危害較大的疾病之一,尤其是冠心?。–HD)居所有疾病的死亡率之首。而CHD則由動(dòng)脈粥樣硬化(AS)引起為最常見。大規(guī)模、多中心的臨床流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)研究證實(shí),高脂血癥(HLP)是AS的首要危險(xiǎn)因素,參與了AS的發(fā)生、發(fā)展及病變惡化的全過程[1],與CHD、腦血管疾病(CVD)的發(fā)病率有直接關(guān)系。所以,HLP治療成為解決此類病變的研究重點(diǎn),頗受醫(yī)學(xué)界關(guān)注,已日益引起廣大學(xué)者的高度重視。血脂平?jīng)_劑[2]由蒲黃、澤瀉、山楂、何首烏、白術(shù)、決明子等中藥組成,經(jīng)多年的臨床觀察有較好的降脂效果,該方具有化痰祛瘀、健脾益腎的功效。本文旨在通過對(duì)血脂平?jīng)_劑作用機(jī)理的探討,為心腦血管病預(yù)防與治療的新藥開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 試劑 總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測(cè)定試劑盒由南京建成生物制品研究所提供;單克隆抗體CD55-PE、CD59-FITC試劑盒由美國(guó)caltag公司提供。

    1.2 藥物 辛伐他汀片,浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn);血脂平?jīng)_劑,陜西中醫(yī)學(xué)院門診部提供。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種雄性SD大鼠60只,體重180~220g,西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.4 儀器與設(shè)備 流式細(xì)胞儀(型號(hào):C3K、3KVA),全自動(dòng)生化分析儀,臺(tái)式高速離心機(jī)等。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 實(shí)驗(yàn)分組 隨機(jī)分為六組,每組10只:A組(空白對(duì)照組)、B組(高脂病理模型組)、C組(辛伐他汀組)、D組(血脂平?jīng)_劑大劑量組)、E組(血脂平?jīng)_劑中劑量組)、F組(血脂平?jīng)_劑小劑量組)。

    2.2 飼料配方 普通飼料:由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。脂肪乳劑:參考高脂飼料配方[3],并略加改進(jìn):膽固醇2%、豬油10%、丙基硫氧嘧啶0.2%、吐溫80.2%,加防腐劑、水制成乳劑。

    2.3 模型建立及給藥 60只SD大鼠普通飼料于20~24℃、濕度40%~60%動(dòng)物留觀室內(nèi)適應(yīng)喂養(yǎng)7d。實(shí)驗(yàn)開始繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng),除A組大鼠灌胃等體積的生理鹽水外,其余五組灌胃脂肪乳劑5mL/kg。造模4周后,除A、B組給予等體積生理鹽水灌胃外,其余各組每天上午灌胃給藥,C組給予辛伐他汀灌胃,D、E、F組分別給予血脂平?jīng)_劑大、中、小劑量灌胃,劑量分別為C組0.625g/kg,D組10mL/kg,E 組 4mL/kg,F(xiàn) 組 2mL/kg,灌胃 6 周后停藥,用戊巴比妥鈉麻醉,腹主動(dòng)脈、靜脈采血。

    2.4 檢測(cè)方法 用酶法檢測(cè)血清中 TC、TG、HDL-C、LDL-C;用流式細(xì)胞儀測(cè)白細(xì)胞 CD55、CD59的表達(dá),即以熒光標(biāo)記細(xì)胞平均強(qiáng)度(MFI)來反映CD分子的表達(dá)。

    2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,統(tǒng)計(jì)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±S)表示,并用t檢驗(yàn)比較組間差異性。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 血脂平?jīng)_劑對(duì)HLP大鼠血脂水平的影響 從表1可以看出,高脂病理模型組大鼠TC、TG和LDL-C含量較空白對(duì)照組均顯著升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C 略有降低(P <0.05),表明本次實(shí)驗(yàn)造模成功。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,血脂平?jīng)_劑具有顯著的調(diào)脂效果,并且大劑量組效果最好。

    表1 血脂平?jīng)_劑對(duì)HLP大鼠血脂水平的影響 (±S)mmol/L

    表1 血脂平?jīng)_劑對(duì)HLP大鼠血脂水平的影響 (±S)mmol/L

    注:與空白組比較,▲P <0.01,▲▲P <0.05;與模型組比較,△P <0.01,△△P <0.05。

    組別 n 劑量 TC TG HDL-C LDL-C A 10 — 1.81±0.29 0.39±0.08 0.52±0.09 0.83±0.09 B 10 — 2.21±0.25▲ 0.70±0.18▲ 0.39±0.08▲▲ 0.98±0.05▲▲C 10 0.625g/kg 1.82±0.29△△ 0.48±0.09△△ 0.51±0.08△△ 0.85±0.10△△D 10 10mL/kg 1.83±0.29△△ 0.42±0.09△ 0.53±0.05△ 0.79±0.14△E 10 4mL/kg 1.88±0.26△△ 0.49±0.09△△ 0.52±0.08△△ 0.85±0.12△△F 10 2mL/kg 2.15±0.28 0.51±0.10△△ 0.41±0.08 0.96±0.04

    3.2 血脂平?jīng)_劑對(duì)HLP大鼠CD55、CD59表達(dá)的影響 從表2可見,與高脂病理模型組相比,血脂平?jīng)_劑能使HLP大鼠白細(xì)胞CD55、CD59的表達(dá)明顯上調(diào),且呈現(xiàn)出明顯的量效正相關(guān)關(guān)系。

    表2 血脂平?jīng)_劑對(duì)HLP大鼠CD55、CD59的影響 (±S)

    表2 血脂平?jīng)_劑對(duì)HLP大鼠CD55、CD59的影響 (±S)

    注:與空白組比較,▲P <0.01;與模型組比較,△P <0.01,△△P <0.05。

    A B C D E F CD55 2.40±0.25 1.81±0.12▲ 2.47±0.39△ 2.34±0.20△ 2.20±0.15△ 1.88±0.14 CD59 2.39±0.21 2.00±0.09▲ 2.78±0.19△ 2.76±0.12△ 2.69±0.39△ 2.17±0.14△△

    4 討論

    補(bǔ)體是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,補(bǔ)體系統(tǒng)的過度激活則會(huì)直接或間接地導(dǎo)致機(jī)體自身正常組織的損傷。補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白是調(diào)節(jié)補(bǔ)體功能的補(bǔ)體抑制因子,能夠抑制補(bǔ)體的過度激活,保護(hù)宿主細(xì)胞免受補(bǔ)體介導(dǎo)的免疫損傷[4]。TC、TG增高是HLP的顯著標(biāo)志,以往治療該病均以調(diào)節(jié)TC、TG為主。隨著分子免疫學(xué)的發(fā)展,大量研究證實(shí)HLP中補(bǔ)體參與非?;钴S,補(bǔ)體激活在AS的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[5],實(shí)驗(yàn)報(bào)道也證實(shí)補(bǔ)體活化可促進(jìn)AS的進(jìn)展和不穩(wěn)定斑塊的形成[6]。國(guó)內(nèi)研究發(fā)現(xiàn),HLP患者血清C3、C4升高并與血脂水平相關(guān),表明高脂血癥患者存在補(bǔ)體生成升高,提示補(bǔ)體系統(tǒng)功能活躍,這與國(guó)外研究結(jié)果相一致[7]。唐氏等[8]認(rèn)為補(bǔ)體C3參與腎臟疾病患兒血脂代謝的調(diào)節(jié)。補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白可抑制補(bǔ)體的活性,尤其是CD55、CD59。CD55又稱衰變加速因子(DAF),具有促進(jìn)C3、C4轉(zhuǎn)化酶衰變的活性,可阻止補(bǔ)體C3、C4轉(zhuǎn)化酶的形成,并且可使已形成的C3、C4轉(zhuǎn)化酶失去其穩(wěn)定性,避免補(bǔ)體對(duì)自身組織細(xì)胞的溶解、破裂[9];CD59又稱保護(hù)素,可阻礙補(bǔ)體C7、C8與相應(yīng)受體的結(jié)合,抑制膜攻擊復(fù)合體(MAC)的形成,使自身正常組織細(xì)胞免受補(bǔ)體損傷[10,11]。

    本研究結(jié)果顯示病理模型組CD55、CD59平均熒光強(qiáng)度明顯降低,隨著CD55、CD59表達(dá)的上調(diào),血脂含量明顯下降,表明血脂水平與補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD55、CD59具有相關(guān)性,并且具有顯著的量效關(guān)系。血脂平?jīng)_劑降脂、調(diào)脂作用可能是通過促進(jìn)CD55、CD59高表達(dá)實(shí)現(xiàn)的,其詳細(xì)機(jī)理還需要更為深入的基礎(chǔ)研究。HLP患者CD55表達(dá)下調(diào),降低了機(jī)體對(duì)補(bǔ)體活化的抑制作用,有利于AS的形成[12]。而血脂平?jīng)_劑可促進(jìn)CD55、CD59的表達(dá)上調(diào),則說明血脂平?jīng)_劑可抑制補(bǔ)體的活性,可直接干預(yù)AS的發(fā)生。

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