血脂平?jīng)_劑對HLP大鼠補體調(diào)節(jié)蛋白CD55、CD59表達(dá)的影響*

劉鋒 張紅 齊斌武 許愛英

（1陜西中醫(yī)學(xué)院2008級碩士研究生 咸陽712046；2陜西中醫(yī)學(xué)院 咸陽712046）

心腦血管病是現(xiàn)代社會對人類健康危害較大的疾病之一，尤其是冠心?。–HD）居所有疾病的死亡率之首。而CHD則由動脈粥樣硬化(AS)引起為最常見。大規(guī)模、多中心的臨床流行病學(xué)及實驗研究證實，高脂血癥（HLP）是AS的首要危險因素，參與了AS的發(fā)生、發(fā)展及病變惡化的全過程[1]，與CHD、腦血管疾?。–VD）的發(fā)病率有直接關(guān)系。所以，HLP治療成為解決此類病變的研究重點，頗受醫(yī)學(xué)界關(guān)注，已日益引起廣大學(xué)者的高度重視。血脂平?jīng)_劑[2]由蒲黃、澤瀉、山楂、何首烏、白術(shù)、決明子等中藥組成，經(jīng)多年的臨床觀察有較好的降脂效果，該方具有化痰祛瘀、健脾益腎的功效。本文旨在通過對血脂平?jīng)_劑作用機理的探討，為心腦血管病預(yù)防與治療的新藥開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 試劑 總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測定試劑盒由南京建成生物制品研究所提供；單克隆抗體CD55-PE、CD59-FITC試劑盒由美國caltag公司提供。

1.2 藥物 辛伐他汀片，浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；血脂平?jīng)_劑，陜西中醫(yī)學(xué)院門診部提供。

1.3 實驗動物 昆明種雄性SD大鼠60只,體重180～220g,西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。1.4 儀器與設(shè)備 流式細(xì)胞儀（型號：C3K、3KVA），全自動生化分析儀，臺式高速離心機等。

2 實驗方法

2.1 實驗分組 隨機分為六組，每組10只：A組（空白對照組）、B組（高脂病理模型組）、C組（辛伐他汀組）、D組（血脂平?jīng)_劑大劑量組）、E組（血脂平?jīng)_劑中劑量組）、F組（血脂平?jīng)_劑小劑量組）。

2.2 飼料配方 普通飼料：由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。脂肪乳劑：參考高脂飼料配方[3]，并略加改進(jìn)：膽固醇2%、豬油10%、丙基硫氧嘧啶0.2%、吐溫80.2%，加防腐劑、水制成乳劑。

2.3 模型建立及給藥 60只SD大鼠普通飼料于20～24℃、濕度40%～60%動物留觀室內(nèi)適應(yīng)喂養(yǎng)7d。實驗開始繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，除A組大鼠灌胃等體積的生理鹽水外，其余五組灌胃脂肪乳劑5mL/kg。造模4周后，除A、B組給予等體積生理鹽水灌胃外，其余各組每天上午灌胃給藥，C組給予辛伐他汀灌胃，D、E、F組分別給予血脂平?jīng)_劑大、中、小劑量灌胃，劑量分別為C組0.625g/kg，D組10mL/kg，E 組 4mL/kg，F(xiàn) 組 2mL/kg，灌胃 6 周后停藥，用戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈、靜脈采血。

2.4 檢測方法 用酶法檢測血清中 TC、TG、HDL-C、LDL-C；用流式細(xì)胞儀測白細(xì)胞 CD55、CD59的表達(dá)，即以熒光標(biāo)記細(xì)胞平均強度（MFI）來反映CD分子的表達(dá)。

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，統(tǒng)計結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±S)表示，并用t檢驗比較組間差異性。

3 結(jié)果與分析

3.1 血脂平?jīng)_劑對HLP大鼠血脂水平的影響 從表1可以看出，高脂病理模型組大鼠TC、TG和LDL-C含量較空白對照組均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），HDL-C 略有降低（P ＜0.05），表明本次實驗造模成功。實驗結(jié)果表明，血脂平?jīng)_劑具有顯著的調(diào)脂效果，并且大劑量組效果最好。

表1 血脂平?jīng)_劑對HLP大鼠血脂水平的影響 (±S)mmol/L

表1 血脂平?jīng)_劑對HLP大鼠血脂水平的影響 (±S)mmol/L

注：與空白組比較，▲P ＜0.01，▲▲P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.01，△△P ＜0.05。

組別 n 劑量 TC TG HDL-C LDL-C A 10 — 1.81±0.29 0.39±0.08 0.52±0.09 0.83±0.09 B 10 — 2.21±0.25▲ 0.70±0.18▲ 0.39±0.08▲▲ 0.98±0.05▲▲C 10 0.625g/kg 1.82±0.29△△ 0.48±0.09△△ 0.51±0.08△△ 0.85±0.10△△D 10 10mL/kg 1.83±0.29△△ 0.42±0.09△ 0.53±0.05△ 0.79±0.14△E 10 4mL/kg 1.88±0.26△△ 0.49±0.09△△ 0.52±0.08△△ 0.85±0.12△△F 10 2mL/kg 2.15±0.28 0.51±0.10△△ 0.41±0.08 0.96±0.04

3.2 血脂平?jīng)_劑對HLP大鼠CD55、CD59表達(dá)的影響 從表2可見，與高脂病理模型組相比，血脂平?jīng)_劑能使HLP大鼠白細(xì)胞CD55、CD59的表達(dá)明顯上調(diào)，且呈現(xiàn)出明顯的量效正相關(guān)關(guān)系。

表2 血脂平?jīng)_劑對HLP大鼠CD55、CD59的影響 (±S)

表2 血脂平?jīng)_劑對HLP大鼠CD55、CD59的影響 (±S)

注：與空白組比較，▲P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.01，△△P ＜0.05。

A B C D E F CD55 2.40±0.25 1.81±0.12▲ 2.47±0.39△ 2.34±0.20△ 2.20±0.15△ 1.88±0.14 CD59 2.39±0.21 2.00±0.09▲ 2.78±0.19△ 2.76±0.12△ 2.69±0.39△ 2.17±0.14△△

4 討論

補體是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，補體系統(tǒng)的過度激活則會直接或間接地導(dǎo)致機體自身正常組織的損傷。補體調(diào)節(jié)蛋白是調(diào)節(jié)補體功能的補體抑制因子，能夠抑制補體的過度激活，保護宿主細(xì)胞免受補體介導(dǎo)的免疫損傷[4]。TC、TG增高是HLP的顯著標(biāo)志，以往治療該病均以調(diào)節(jié)TC、TG為主。隨著分子免疫學(xué)的發(fā)展，大量研究證實HLP中補體參與非常活躍，補體激活在AS的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[5]，實驗報道也證實補體活化可促進(jìn)AS的進(jìn)展和不穩(wěn)定斑塊的形成[6]。國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，HLP患者血清C3、C4升高并與血脂水平相關(guān)，表明高脂血癥患者存在補體生成升高，提示補體系統(tǒng)功能活躍，這與國外研究結(jié)果相一致[7]。唐氏等[8]認(rèn)為補體C3參與腎臟疾病患兒血脂代謝的調(diào)節(jié)。補體調(diào)節(jié)蛋白可抑制補體的活性，尤其是CD55、CD59。CD55又稱衰變加速因子（DAF），具有促進(jìn)C3、C4轉(zhuǎn)化酶衰變的活性，可阻止補體C3、C4轉(zhuǎn)化酶的形成，并且可使已形成的C3、C4轉(zhuǎn)化酶失去其穩(wěn)定性，避免補體對自身組織細(xì)胞的溶解、破裂[9]；CD59又稱保護素，可阻礙補體C7、C8與相應(yīng)受體的結(jié)合,抑制膜攻擊復(fù)合體（MAC）的形成，使自身正常組織細(xì)胞免受補體損傷[10，11]。

本研究結(jié)果顯示病理模型組CD55、CD59平均熒光強度明顯降低，隨著CD55、CD59表達(dá)的上調(diào)，血脂含量明顯下降，表明血脂水平與補體調(diào)節(jié)蛋白CD55、CD59具有相關(guān)性，并且具有顯著的量效關(guān)系。血脂平?jīng)_劑降脂、調(diào)脂作用可能是通過促進(jìn)CD55、CD59高表達(dá)實現(xiàn)的，其詳細(xì)機理還需要更為深入的基礎(chǔ)研究。HLP患者CD55表達(dá)下調(diào)，降低了機體對補體活化的抑制作用，有利于AS的形成[12]。而血脂平?jīng)_劑可促進(jìn)CD55、CD59的表達(dá)上調(diào)，則說明血脂平?jīng)_劑可抑制補體的活性，可直接干預(yù)AS的發(fā)生。

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