婦女人乳頭瘤病毒測定與宮頸癌及癌前病變關(guān)系探討

張秀清

目前認(rèn)為，從宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展為宮頸癌大約需要10年的時(shí)間，這為宮頸癌的預(yù)防、發(fā)現(xiàn)、治療創(chuàng)造了時(shí)機(jī)。所以說宮頸癌是可以預(yù)防的，是可以治愈的，關(guān)鍵在于普查、早期發(fā)現(xiàn)和適當(dāng)處理。隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)展，高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)持續(xù)感染已被證明是引起宮頸癌及其癌前病變的主要病因。第二代雜交捕獲法(HC-Ⅱ)HPV-DNA檢測采用RNA探針進(jìn)行分子雜交，化學(xué)發(fā)光使信號(hào)放大對HPV-DNA定量分析。本研究運(yùn)用該方法測定HPV病毒載量，并與組織病理學(xué)結(jié)果相對照，了解HR-HPV感染及載量與宮頸癌及其癌前病變的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年4月～2009年6月在我院因子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)和宮頸癌進(jìn)行各種術(shù)式治療前，行HR-HPV測定的320例，年齡14～68(28.41±9.64)歲，平均孕次5次，產(chǎn)次3次，均為首次診斷。

1.2 方法

1.2.1 HPV-DNA標(biāo)本采集 由固定醫(yī)師將HPV取樣刷插入宮頸外口，順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)5周,停留10s后取出，放置于保存液中送檢。

1.2.2 HPV-DNA測定 采用美國Digene公司HC-Ⅱ試劑盒，96孔平板法。步驟:樣本DNA雙鏈解開成為核苷酸單鏈；DNA單鏈與RNA組合探針結(jié)合為RNA-DNA雜合體；特異性抗體將RNA-DNA雜合體捕獲并固定在試管壁或微孔壁上；偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第二抗體與RNA-DNA雜合體結(jié)合；堿性磷酸酶使底物發(fā)光，根據(jù)光的強(qiáng)弱可確定堿性磷酸酶和RNA-DNA雜合體的含量，檢測出HPV-DNA載量。陽性標(biāo)準(zhǔn)為HPV-DNA≥1.0pg/ml。

1.2.3 組織病理學(xué)檢查 所有入選者術(shù)前已由?？漆t(yī)師進(jìn)行陰道鏡檢查，并定位活檢行病理檢查。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，宮頸病變級(jí)別與HPV載量間的關(guān)系用秩和檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，（P＜0.05）為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織病理學(xué)檢查結(jié)果 CINⅠ95例，CINⅡ55例，CINⅢ70例，宮頸浸潤癌105例(宮頸鱗狀細(xì)胞癌100例，宮頸高分化腺癌5例)。CINⅠ屬低級(jí)別病變共95例；CINⅡ，CINⅢ屬高級(jí)別病變，共125例。

2.2 HPV-DNA檢測結(jié)果

320例患者中HPV(+)者305例(95.31%)，病毒載量1.00～3101.35pg/ml。

95例CINⅠ中HPV(+)者80例,病毒載量1.00～1608.5pg/ml。

55例CINⅡ中HPV(+)者53例,病毒載量1.87～1918.11pg/ml。

70例CINⅢ中HPV(+)者67例,病毒載量2.60～2362.29pg/ml。

宮頸癌105例,均為HPV(+),病毒載量1.47～3101.35pg/ml。

2.3 病毒載量與宮頸癌及癌前病變的關(guān)系

從病毒載量的集中及離散趨勢來看，HR-HPV載量并未隨著宮頸病變的嚴(yán)重程度而增加，反而有所減少。在HPV陽性時(shí),低級(jí)別病變、高級(jí)別病變、宮頸癌之間載量，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。病變等級(jí)和病毒載量之間的Spearman等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.0587，病變等級(jí)和病毒載量之間無相關(guān)性(見表1)。

表1 HR-HPV(+)時(shí)病毒載量與宮頸病變的關(guān)系(pg/ml)

3 討論

眾多研究發(fā)現(xiàn)，HPV高危感染常引起生殖道惡性腫瘤，特別與宮頸癌之間有著密切的聯(lián)系[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2]，HPV感染的檢出率在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌組中分別為30%、55%、65%、99.8%。本組研究通過PCR方法檢測CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌，結(jié)果顯示陽性率分別為84.21%、87%、98%、100.00%，這與文獻(xiàn)報(bào)道有差異，可能與山西大同婦女多婚次以至相互交叉感染可能有關(guān)。尤其在宮頸癌中，HPV病毒感染將造成機(jī)體組織病理學(xué)改變，從感染到出現(xiàn)這些改變需一定時(shí)間，宮頸感染HPV后病毒整合到宿主DNA中，經(jīng)過一段時(shí)間才使宿主細(xì)胞發(fā)生惡變[3]。從CINⅠ到CINⅢ是一隨時(shí)間而發(fā)展的過程，本研究中顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌，隨著宮頸病變的加重HPV陽性率逐漸增加,說明宮頸癌前病變與HPV感染有關(guān)。持續(xù)感染HR-HPV是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的必要條件[4]，這一觀點(diǎn)已被大多數(shù)國內(nèi)外學(xué)者所接受，我們統(tǒng)計(jì)宮頸高度病變96.0%病人HPV陽性，HPV負(fù)荷量≥1000pg/ml為33例，500～1000pg/ml35例，HPV負(fù)荷量的高低與宮頸病變之間存在一定的關(guān)系。高病毒負(fù)荷量對宮頸癌的發(fā)生及宮頸病變的進(jìn)展可能有一定的促進(jìn)作用[5]，但女性HPV感染率很高，而只有極少數(shù)會(huì)發(fā)生宮頸癌，原因何在值得進(jìn)一步研究。

HC-Ⅱ作為HPV-DNA負(fù)荷量半定量的測定方法，雖然因其高度敏感性、可重復(fù)性、客觀性、簡單易操作和可接受性被用于臨床。但是HC-Ⅱ檢測HPV病毒負(fù)荷量與宮頸病變嚴(yán)重程度之間的關(guān)系仍有爭議。Wu等[6]發(fā)現(xiàn)，HPV病毒負(fù)荷量與宮頸病變程度之間明顯相關(guān)，病毒負(fù)荷量越高，宮頸病變加重的風(fēng)險(xiǎn)越大。本研究表明，隨著HPV負(fù)荷量增加，發(fā)生≥CINⅡ?qū)m頸病變的幾率明顯增加，表明HC-Ⅱ檢測的HPV病毒負(fù)荷量與宮頸病變嚴(yán)重程度之間密切相關(guān)。

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