三黃痔瘡膏的薄層色譜鑒別

黃 星李德勛肖順經(jīng)張遠(yuǎn)強(qiáng)

（1云南省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，云南 昆明 650034；2昭通市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昭通 657000； 3昭通市中醫(yī)院）

三黃痔瘡膏的薄層色譜鑒別

黃 星1李德勛2肖順經(jīng)2張遠(yuǎn)強(qiáng)3

（1云南省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，云南 昆明 650034；2昭通市食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昭通 657000； 3昭通市中醫(yī)院）

目的：建立三黃痔瘡膏的質(zhì)量控制方法。方法：采用薄層色譜法對(duì)方中的大黃、黃芩、黃柏、梔子、紫草進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論：薄層色譜法簡(jiǎn)單、易行，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可對(duì)三黃痔瘡膏進(jìn)行定性鑒別。

三黃痔瘡膏；薄層色譜

三黃痔瘡膏為昭通市中醫(yī)院自擬處方制劑，由大黃、黃芩、黃柏、梔子、紫草等多味中藥組成，具有清熱解毒，化腐生肌的功效，臨床上用于治療內(nèi)痔、外痔、混合痔，肛瘺腫痛，出血之癥，效果較好。由于目前中藥材市場(chǎng)上出現(xiàn)的大黃、黃芩、黃柏、梔子、紫草五味中藥的混偽品較多，而本制劑又為提取物制劑。因此，有必要對(duì)成品制劑中所含的以上五味中藥主要有效成分進(jìn)行定性鑒別。為此，筆者在參考2005年版《中國(guó)藥典（一部）》[1]及《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》[2]等文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，采用薄層色譜（TLC）法對(duì)制劑中的大黃、黃芩、黃柏、梔子、紫草進(jìn)行了定性鑒別研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110756-200110）、黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：110715-200514）、鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-200609）、梔子苷（批號(hào)：0749-9404）、左旋紫草素（批號(hào)：769-9001）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；三黃痔瘡膏（批號(hào)分別為20090123、20090125、20090127）為昭通市中醫(yī)院自配制劑；陰性對(duì)照品制劑按制劑處方工藝缺味配制，所用藥材均鑒別符合《中國(guó)藥典（一部）》2005年版規(guī)定；硅膠G、硅膠H薄層板（青島海洋化工廠生產(chǎn)）；其他試劑均為分析純。

2 方法及結(jié)果

2.1 大黃薄層色譜鑒別

取三黃痔瘡膏5 g，加硅藻土2 g研勻，無(wú)水乙醇20 mL，加熱回流30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解，加鹽酸1 mL，置于水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芤? mL使溶解，作為供試品溶液。同法取缺大黃的陰性對(duì)照品制成大黃陰性對(duì)照品溶液。另取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)[1]，吸取上述供試品及陰性對(duì)照品溶液各5 μL，大黃素對(duì)照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H板上，以石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中在與大黃素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上（Rf值為0.56處）顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 A）。

圖1 TLC圖譜

2.2 黃芩薄層色譜鑒別

取三黃痔瘡膏5 g，加硅藻土3 g，研勻，加甲醇超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。同法取缺黃芩的陰性對(duì)照品制成黃芩陰性對(duì)照品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)[1]，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中在與梔子苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上（Rf值為0.24處）顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 B）。

2.3 黃柏薄層色譜鑒別

取三黃痔瘡膏10 g，加石油醚（60～90℃）50 mL，加熱攪拌使溶解，加1%鹽酸溶液50 mL振搖提取，分取酸水液，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用三氯甲烷振搖提取2次（40 mL、30 mL），合并三氯甲烷液，揮干，殘?jiān)?%鹽酸甲醇溶液1 mL使溶解，作為供試品溶液。同法取缺黃柏的陰性對(duì)照品制成黃柏陰性對(duì)照品溶液。另取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)[1]，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯-異丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水（6∶1.5∶3∶1.5∶0.3）為展開劑，置于氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置于紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中在與鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上（Rf值為0.80處）顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 C）。

2.4 梔子薄層色譜鑒別

取三黃痔瘡膏5 g，加石油醚（60～90℃）20 mL，加熱攪拌使溶解，棄去石油醚，藥渣揮干，加乙酸乙酯20 mL，加熱回流1小時(shí)，取出，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。同法取缺梔子的陰性對(duì)照品制成梔子陰性對(duì)照品溶液。另取梔子苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)[1]，吸取上述三種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲醇-濃氨試液（4∶5∶4∶5∶0.8）為展開劑，20℃以下展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中在與梔子苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上（Rf值為0.33處）顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 D）。

2.5 紫草薄層色譜鑒別

取三黃痔瘡膏8 g，加石油醚（60～90℃）30 mL，加熱攪拌使溶解，加2%氫氧化鈉溶液30 mL振搖提取，棄去石油醚層，水液加鹽酸調(diào)至溶液略顯紅色，再加乙醚30 mL振搖提取，分取提取液，揮至近干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。同法取缺紫草的陰性對(duì)照品制成紫草陰性對(duì)照品溶液。另取左旋紫草素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)[1]，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中在與左旋紫草素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上（Rf值為0.59處）顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，再噴以10%氫氧化鉀溶液，斑點(diǎn)變?yōu)樗{(lán)色，陰性對(duì)照品色譜中無(wú)此斑點(diǎn)（圖1 E）。

3 討論

3.1 上述薄層色譜鑒別試驗(yàn)中，在大黃、黃芩兩種供試品的制備過(guò)程中加入適量的硅藻土，研勻，起分散作用，便于大黃素和黃芩苷的充分提取。在黃柏、梔子、紫草供試品的制備過(guò)程中先加入適量的石油醚（60～90℃），加熱溶解后用極性溶劑提取，棄除了制劑中的麻油和羊毛脂等輔料的干擾，使得薄層色譜斑點(diǎn)分離的效果更好。

3.2 上述5種藥材的薄層色譜所用的展開劑，均是在參考了有關(guān)資料的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)篩選后得出的。

3.3 從上述試驗(yàn)的結(jié)果可以看出：5種藥材采用薄層色譜鑒別方法，展開及分離效果良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，方法簡(jiǎn)便、快捷，重現(xiàn)性好，可對(duì)成品制劑中所含的以上五味中藥主要有效成分進(jìn)行有效檢識(shí)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:化

學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄31.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局.中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范[M].北

京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1995:附錄14.

Identified Sanhuang Hemorrhoids Plaster by TLC

Huang Xing1，Li Dexun2，Xiao Shunjing2，Zhang Yuanqiang3（1 Yunnan Institute for Medical Device Control，Kunming 650034，China；2 Zhaotong Institute for Food and Drug Control，Zhaotong 657000，China；3 Zhaotong Hospital of TCM）

Objective:To establish a quality standard for San Huang Hemorrhoids Plaster by TLC.Methods：Rhei radix et rhizoma,Scutellariae radix,Phellodendry chinensis cortex,Gardeniae fructus,Arnebiae radix of San Huang Hemorrhoids Plaster were identified by TLC.Results:The spots were clear,negative control without interference by TLC.Conclusion：TLC was simple with good reproducibility and specificity.It can be used for identifying of Sanhuang Hemorrhoids plaster.

Sanhuang Hemorrhoids Plaster;TLC

黃星，男，副主任藥師。研究方向：藥品及醫(yī)療器械質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel：13629685495