尼群地平分散片人體生物等效性研究

田志國任進(jìn)民張好曼麗張曉麗

（1河北賽克藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050021；2河北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，050000；3河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，050017；4河北東海藥都醫(yī)藥有限公司，050011）

尼群地平分散片人體生物等效性研究

田志國1任進(jìn)民2張好曼麗3張曉麗4

（1河北賽克藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050021；2河北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，050000；3河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，050017；4河北東海藥都醫(yī)藥有限公司，050011）

目的:研究尼群地平分散片在健康人體內(nèi)的藥物動力學(xué)及相對生物利用度，為臨床合理用藥提供依據(jù)。方法:采用20名健康男性受試者雙周期交叉口服單劑量20 mg尼群地平分散片（受試制劑）和資壽(尼群地平片,參比制劑），用LC-MS/MS法測定血漿中尼群地平濃度，考察兩種制劑的生物等效性。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明受試制劑的相對生物利用度為(106.7±25.0)%，兩制劑具有生物等效性。結(jié)論:尼群地平分散片與資壽(尼群地平片)具有生物等效性。

尼群地平；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；相對生物利用度；生物等效性

尼群地平(nitrendipine)是第二代二氫吡啶類鈣通道拮抗劑，具有選擇性松弛血管平滑肌，擴(kuò)張外周血管，降低血壓療效，其特點(diǎn)是作用溫和，維持藥效時(shí)間長，不良反應(yīng)輕。目前國內(nèi)上市的該藥制劑主要為尼群地平片，是臨床上較為理想的口服抗高血壓藥物[1-2]。但普通片劑有溶出速度慢、首過效應(yīng)強(qiáng)、半衰期短、生物利用度低等缺點(diǎn)，且由于尼群地平難溶于水，服用劑量小，導(dǎo)致藥物溶出緩慢而影響藥物被充分吸收，降壓作用只能維持6～8小時(shí)，每天需要服用2～3次，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到尼群地平制劑的應(yīng)有水平。尼群地平分散片較一般膠囊、片劑有明顯的優(yōu)越性，不僅服用方便，而且崩解與溶出快速，藥效持久，特別適用于老年人和吞咽困難的病人。

本研究采用開放、隨機(jī)分組、交叉、單劑量、兩周期試驗(yàn)設(shè)計(jì)，篩選20名健康男性受試者按試驗(yàn)設(shè)計(jì)口服單劑量參比制劑或受試制劑，使用高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜檢測法測定血漿中尼群地平濃度，用DAS軟件擬合計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)及評價(jià)生物等效性[3-5]。現(xiàn)將有關(guān)尼群地平分散片人體生物利用度研究報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

3200 QTRAP型串聯(lián)四極桿線性離子阱質(zhì)譜儀，配有Turbo V離子源（美國AB公司），AnaLyst 1.4軟件（美國AB公司）。液相色譜儀為Agilent 1200系統(tǒng)，配有四元泵、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器（美國Agilent公司）。

尼群地平分散片[受試制劑（A），河北賽克藥業(yè)有限公司，規(guī)格：10 mg，批號：20090201，含量101.5%]。

尼群地平片[參比制劑（R），石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司，規(guī)格：10 mg，商標(biāo)名：資壽，批號：08125044，有效期至2011年11月。批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H13022629]。

尼群地平對照品，批號：100585-200602；內(nèi)標(biāo)為尼莫地平，批號：100270-200002，中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

20名男性健康志愿者，平均年齡（22.3±1.8）a，平均體重（62.2±6.2）kg。試驗(yàn)前進(jìn)行病史詢問和體檢，血、尿常規(guī)，心、肝、腎功能，血糖等檢查均正常。受試前兩周及試驗(yàn)期間未服用其他任何藥物，受試者均無煙酒嗜好，自愿簽署知情同意書，試驗(yàn)方案經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)通過。

采用雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，20名受試者隨機(jī)分為2組。試驗(yàn)前一日晚8時(shí)起禁食，次日晨7時(shí)空腹口服藥物A或R制劑20 mg，用200 mL溫開水送服，2 h內(nèi)禁水，4 h后統(tǒng)一進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)餐一次，8 h后進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)餐一次。試驗(yàn)期間保持日常輕微活動，不允許長時(shí)間臥床，并避免劇烈活動。分別在給藥前取空白血樣，于給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、11、14、24 h各個(gè)時(shí)刻自上肢靜脈取血4 mL，注入肝素化管中，混勻后離心，轉(zhuǎn)速3 000 rpm，時(shí)間10 min，血漿樣品于－80℃冰箱保存待測。1周后交叉給藥，重復(fù)試驗(yàn)。

2.2 血漿樣品檢測

2.2.1 色譜、質(zhì)譜條件

色譜柱：Eclipse C18，5 mm,150×4.6 m（Agilent公司）；流動相為乙腈∶水梯度洗脫。梯度洗脫程序：0～0.5 min，乙腈∶水比例70/30（v/v)→95/5；0.5～5.0 min，乙腈∶水比例維持95/5；5.0～5.1 min，乙腈∶水比例95/5→70/30；每次進(jìn)樣前預(yù)平衡3 min。流速：0.7 mL/min，進(jìn)樣體積為5 μL，柱溫為室溫。

質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子化源（ESI）；源噴射電壓（IS）為－4500V；霧化溫度為600℃；霧化氣（GS1，N2）壓力為60 psi；輔助氣（GS2，N2）壓力為60 psi；氣簾氣（N2）壓力為30 psi；負(fù)離子方式檢測；掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；用于定量分析的離子反應(yīng)分別為：m/z 359.2→m/z 121.9（尼群地平），解簇電壓（DP）為－41 V，碰撞能量（CE）－25 eV；m/z 417.3→m/z 122.0（內(nèi)標(biāo)，尼莫地平），解簇電壓（DP）為－45 V，碰撞能量（CE）－30 eV；駐留時(shí)間均為200 ms。

2.2.2 樣品處理

取血漿樣品1 mL，加入50 μL內(nèi)標(biāo)溶液（85.2 μg/mL尼莫地平的乙腈溶液），渦流混合30 s，加入乙醚3 mL，渦流混旋2 min，離心（4 000 rpm）5 min，－20℃冷凍30 min，取上清液至5 mL離心管中，40℃氮?dú)饬飨麓蹈伞＜尤?00 μL 70%乙腈溶液，渦流混旋1 min，溶液轉(zhuǎn)移至2 mL離心管中，離心（12 000 rpm）5 min，取上清液70 μL至自動進(jìn)樣小瓶，進(jìn)樣5 μL進(jìn)行LC-MS/MS分析，記錄主峰和內(nèi)標(biāo)峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算出血漿樣品的尼群地平濃度(ng/mL)。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和方法學(xué)研究

取空白血漿1 mL置離心試管中，加入50 μL含尼群地平系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成相當(dāng)于尼群地平濃度為0.100，0.250，0.501，2.50，5.01，10.0，25.0，50.1 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品。按血漿樣品處理方法“2.2.2”項(xiàng)下方法操作處理后進(jìn)行測定。以尼群地平與內(nèi)標(biāo)峰峰面積比(Y)對尼群地平濃度(X)作加權(quán)回歸（1/C2），得回歸方程Y=0.806 5X +0.012 70，r=0.998 5(n=8)。表明尼群地平的血漿濃度在0.100～ 50.1 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。定量限為0.100 ng/mL。低、中、高3個(gè)濃度（0.250、5.01、40.1 ng/mL）血漿樣品，日內(nèi)精密度RSD≤5.9%、日間精密度RSD≤14.0%，RE≤6.9%。提取回收率分別為84.1%，94.1%和87.0%（n=18）。內(nèi)標(biāo)的提取回收率為 85.2%，RSD為10.7%（n=9）。

2.3 藥動學(xué)參數(shù)和生物等效性評價(jià)

20名健康受試者口服單劑量20 mg受試制劑A和參比制劑R后的平均藥－時(shí)曲線見圖1。由DAS 2.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算各藥代動力學(xué)參數(shù)，并進(jìn)行生物等效性統(tǒng)計(jì)分析。

圖1 平均藥－時(shí)曲線（n=20）

用受試者的血藥濃度－時(shí)間數(shù)據(jù)作曲線擬合，求得個(gè)體參數(shù)后計(jì)算平均值。tmax、Cmax取實(shí)測值，藥時(shí)曲線下面積（AUC）由梯形法求得，消除半衰期按t1/2=－0.693/Zeta計(jì)算，相對生物利用度F＝AUCA／AUCR×100%。（AUCA：受試制劑的AUC值；AUCR：參比制劑的AUC值。）采用DAS 2.0統(tǒng)計(jì)軟件對各制劑所得的主要藥代動力學(xué)參數(shù)，Cmax及AUC值經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后作方差分析，雙單側(cè)t檢驗(yàn)和90%置信區(qū)間檢驗(yàn)，tmax用非參數(shù)法分析，評價(jià)兩制劑的生物等效性。受試制劑和參比制劑生物等效性統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果分別見表1～4。

非參數(shù)秩和檢驗(yàn)結(jié)果表明，A和R制劑tmax無顯著性差異（P＞0.05）。方差分析結(jié)果顯示，A制劑和R制劑Cmax及AUC值均無顯著性差異（P＞0.05）。雙單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果表明，A制劑的AUC 90%置信區(qū)間落在R制劑的80.0% ～125.0%之間，Cmax落在70.0%～143.0%之間，證明受試制劑尼群地平分散片與市售參比制劑資壽(尼群地平片)具有生物等效性，A制劑相對于R制劑的相對生物利用度為（106.7±25.0）%。

表1 20名健康受試者口服單劑量受試制劑和參比制劑20 mg后尼群地平主要藥動學(xué)參數(shù)方差分析結(jié)果

表2 20名健康受試者口服單劑量受試制劑和參比制劑20 mg后尼群地平主要藥動學(xué)參數(shù)雙向單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果(α=0.05)

表3 20名健康受試者口服單劑量受試制劑和參比制劑10 mg后尼群地平 tmax非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果 (α=0.05)

表4 主要藥動學(xué)參數(shù)結(jié)果（±s,n=20）

表4 主要藥動學(xué)參數(shù)結(jié)果（±s,n=20）

參數(shù) A制劑 R制劑Cmax（ng/mL）Tmax（h）T1/2(ke)（h）AUC(0～24h)（ng/h·mL）AUC(0～∞)（ng/h·mL）13.80 11.40 2.00 0.84 5.44 2.59 77.0 60.2 79.8 61.8±±±±± 13.50±9.61 1.79±0.66 5.25±1.77 71.0±49.2 74.0±52.3

3 討論

本試驗(yàn)建立的色譜條件分離較好，回收率高，精密度好，方法簡便、快捷，適用于尼群地平制劑的人體藥動學(xué)和尼群地平片（R）的雙交叉試驗(yàn)，證明兩制劑具有生物等效性；A制劑吸收速度相對較快，與兩制劑的劑型不同有關(guān)；分散片遇水后可迅速崩解形成均勻的黏性混合液，崩解時(shí)間在3min內(nèi)[6]，崩解、吸收、起效均比普通片劑快，可吞服或在水中分散后口服，尤其適合兒童、老年人和吞服困難的患者。

[1] 路西明，王學(xué)廷，李麗.尼群地平的藥理與臨床應(yīng)用[J].洛陽醫(yī)專學(xué)報(bào)，1994，13（3）：186-188.

[2]常錦榮.尼莫地平、尼群地平、尼卡地平臨床應(yīng)用與評價(jià)[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，1996，14（5）：271-272.

[3]黨愛民，杜江波，明廣華，等.中國資壽尼群地平和德國拜爾－尼群地平藥代、藥效學(xué)交叉比較研究[J].中國心血管雜志，1998，3(5)：308-311.

[4]林振禮，趙香蘭.尼群地平在正常人及腎功能不全的高血壓病人的體內(nèi)消除及藥效學(xué)比較[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，1995，11(3)：146-151.

[5]Ying L,Fengguo X,Zunjian Z,et al.Quantitative determination of nitrendipine in human plasma using high-performance liquid chromatography-mass spectrometry[J].Arzneim Forsch Drug Res.2008,58(3):111

[6]崔德福.藥劑學(xué)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004:112.

Study on Human Bioequivalence of Nitrendipine Dispersible Tablets

Tian Zhiguo1,Ren Jinmin2,Zhang Manli3,Zhang Xiaoli4(1 Hebei Saike Pharmaceutical Co.,Ltd.Shijiazhuang 050021,China;2 The Second Hospital attached Hebei Medical University,050000;3 Department of Natural Product Chemistry,School of Pharmaceutical Sciences,Hebei Medical University,050017；4 Hebei Donghai Yaodu Pharmaceuticals Co.,Ltd.,050011)

Objective:To study the pharmacokinetics and relative bioavailability of nitrendipine dispersible tablets.Methods:Nitrendipine dispersible tablets were compared with Zishou nitrendipine tablets by a randomized crossover design at a single oral dose of 20 mg in 20 healthy male volunteers.The concentration of nitrendipine was determined by LC-MS/MS.Results:The relative bioavailability of dispersible tablets was(106.7±25.0)%.Conclusion:According to the results,nitrendipine dispersible tablets and nitrendipine tablets were bioequivalent.

Nitrendipine；LC-MS/MS；Relative Bioavailability；Bioequivalence

田志國，男，工程師。主要從事藥物制劑生產(chǎn)、開發(fā)研究工作。E-mail：hbskscb@163.com