不同產(chǎn)地黨參HPLC指紋圖譜研究及比較

劉曉芳 ，趙慧輝 ，劉養(yǎng)清 ，程若敏 ，劉小玉 ，王秀文 ，焦建華

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030024； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

黨參為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材之一，味甘、性平，歸脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)中益氣、健脾益肺之功，主治脾肺虛弱、氣短心悸、食少便溏、虛喘咳嗽、內(nèi)熱消渴等證?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》［1］2005年版收載的黨參為桔?？浦参稂h參、素花黨參或川黨參的干燥根，主產(chǎn)于山西、甘肅、陜西、四川等省，不同產(chǎn)地黨參在化學(xué)成分含量上有所差異。目前有文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC測(cè)定黨參藥材中黨參炔苷的含量［2-3］，而有關(guān)不同產(chǎn)地黨參指紋圖譜的研究尚未見(jiàn)報(bào)道［4-5］。本文旨在建立簡(jiǎn)單、快速而準(zhǔn)確地鑒別不同產(chǎn)地黨參真?zhèn)巍?yōu)劣及定量的方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

電子分析天平 （上海精密儀器有限公司生產(chǎn)），DIONEX高效液相色譜儀，PDA檢測(cè)器，超聲清洗機(jī)。

1.2 藥品與試劑

黨參藥材來(lái)源：No.1為潞黨參 （山西平順），No.2為五花蕊（山西陵川），No.3為紫團(tuán)參（山西壺關(guān)樹(shù)掌鎮(zhèn)），No.4為黨參（山西晉城白云農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)），No.5為紫團(tuán)參（野生，山西壺關(guān)樹(shù)掌鎮(zhèn)），No.6為臺(tái)黨參（山西五臺(tái)山），No.7為條黨參（甘肅隴西），No.8為野黨參（山西興縣固賢鄉(xiāng)），No.9為黨參（甘肅定西市通渭縣水坑村），No.10為黨參 （甘肅省天水市甘谷縣大石鄉(xiāng)王灣村），No.11為黨參 （甘肅省天水市甘谷縣大石鄉(xiāng)榆川村），No.12為黨參 （甘肅省定西市通渭縣雞川鎮(zhèn)），No.13為黨參 （四川省龍泉山），No.14為川黨（四川成都）；黨參炔苷對(duì)照品購(gòu)自上海友思生物技術(shù)有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Grace Smart RP C18柱 （250 nm×4.6 nm，SHM）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%醋酸；檢測(cè)波長(zhǎng)：268 nm。流動(dòng)相梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取黨參炔苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶液，稀釋為一定濃度，備用。

2.3 樣品溶液的制備

黨參樣品0.3 g，加無(wú)水乙醇5 mL，超聲提取25 min，濾過(guò)，再加無(wú)水乙醇5 mL超聲提取15 min，濾過(guò)，再加無(wú)水乙醇4 mL超聲提取10 min，濾過(guò)，合并3次濾液，濃縮，用無(wú)水乙醇洗滌并定容到5 mL，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 精密度試驗(yàn)

取8號(hào)樣品藥材，按“2.3”樣品制備方法制備供試品1份，進(jìn)樣量10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得指紋圖譜中黨參炔苷峰的保留面積分別為1.90，1.86，1.85，1.88，1.93，1.83，RSD 為 1.9%。 結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取8號(hào)樣品藥材，按“2.3”樣品制備方法制備供試品 6 份， 進(jìn)樣量 10 μL， 分別在 0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、8 h測(cè)定其指紋圖譜，測(cè)得指紋圖譜中黨參炔苷峰的保留面積分別為 1.81，1.92，1.89，1.89，1.84，1.82，RSD為2.3%。結(jié)果表明，供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取8號(hào)樣品藥材，按“2.3”樣品制備方法制備供試品5份，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)得指紋圖譜中黨參炔苷峰 的 保 留 面 積 分 別 為 1.88，1.91，1.89，1.77，1.87，RSD為2.9%。結(jié)果表明，該測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.7 14種黨參樣品HPLC圖的共有峰

按2.3的方法提取14種黨參樣品，采用2.1中表1的流動(dòng)相梯度洗脫程序進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)樣量10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)268 nm。黨參炔苷標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的HPLC圖，結(jié)果見(jiàn)圖1～圖4。14種黨參的HPLC圖進(jìn)行比較，其共有峰統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 黨參炔苷標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖

圖2 No.2 HPLC圖

圖3 No.12 HPLC圖

圖4 No.13 HPLC圖

表2 黨參共有峰的統(tǒng)計(jì) （min）

由表2可知，42 min黨參炔苷的峰為14個(gè)黨參樣品所共有，但含量差異較大，No.4、No.7、No.14的黨參炔苷峰面積較小，No.12的黨參炔苷峰面積較大。21.4 min、28.4 min、37.0 min為黨參的共有峰，但強(qiáng)度各不相同，因此可作為黨參的特征峰。此外還有一些非共有峰有鑒別意義。

3 討 論

對(duì) 210 nm、254 nm、268 nm、272 nm 掃描的各波長(zhǎng)下的色譜圖進(jìn)行分析比較，結(jié)果在268 nm波長(zhǎng)下各峰分離良好，峰數(shù)目較多，且黨參炔苷在此波長(zhǎng)下有最大吸收，故以此波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

對(duì)樣品采用甲醇、50%甲醇、無(wú)水乙醇、75%乙醇、無(wú)水乙醇與氯仿1∶1的混合溶劑，無(wú)水乙醇與乙酸已酯1∶1的混合溶劑等進(jìn)行提取、比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)水乙醇的效果最好，提取量高，干擾少，重復(fù)性好。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)不同的梯度洗脫程序進(jìn)行了比較，結(jié)果表明使用文中所選擇的梯度洗脫程序樣品的分離度和峰的數(shù)目都較為合適。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)采用不同濃度的酸以及水做流動(dòng)相進(jìn)行了比較，用水做流動(dòng)相檢測(cè)不到黨參炔苷的峰，而用0.3%醋酸和0.1%醋酸兩種不同酸度的酸效果相差不明顯，文中選擇0.1%醋酸做流動(dòng)相。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)采用1.0 mL/min，0.8 mL/min，0.6 mL/min的不同流量進(jìn)行比較，流量為1.0 mL/min和0.8 mL/min時(shí)，黨參炔苷的峰分別在33.38 min和37.66 min處；而流量在0.6 mL/min時(shí)，黨參炔苷的峰在42.0 min處，實(shí)驗(yàn)表明0.6 mL/min的流量較為合適。

不同產(chǎn)地的黨參由于地理環(huán)境、氣候、土壤等生長(zhǎng)條件不同以及采收后加工炮制方法不同，黨參藥材中各成分的有無(wú)以及含量有明顯的差異。通過(guò)黨參指紋圖譜的對(duì)比，可明顯顯示其差別，有利于黨參質(zhì)量的進(jìn)一步評(píng)價(jià)和臨床鑒別用藥。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：199.

［2］趙曉華，劉養(yǎng)清，裴曉麗.黨參中黨參炔苷的HPLC分析［J］.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，7（5）：49-50.

［3］宋丹，程雪梅，李隆云，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地川黨參中黨參炔苷的含量［J］.中國(guó)中藥雜志 2008，33（17）：2133-2135.

［4］宋丹，程雪梅，李隆云，等.川黨參的高效液相色譜指紋圖譜研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43（15）：1136-1139.

［5］封士蘭，胡芳弟，劉欣，等.HPLC研究甘肅產(chǎn)白條黨參指紋圖譜［J］.中成藥，2005，27（7）：745-748.