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    PCNA及 PTEN在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義

    2010-04-18 05:29:36余繁榮胡玉紅陳鳳云盧北燕
    黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2010年2期
    關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞異位內(nèi)膜

    余繁榮,胡玉紅,陳鳳云,盧北燕,楊 微

    (佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,黑龍江 佳木斯 154003)

    子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMS)是婦科常見病和多發(fā)病,其發(fā)病率有逐漸上升的趨勢,其雖是良性病變,但具有惡性病變的生物學(xué)行為。近年來,細(xì)胞的增殖與凋亡失衡學(xué)說已成為人們研究的熱點。PCN A是一種細(xì)胞周期增生核抗原,能客觀的反映細(xì)胞的增殖能力,是目前應(yīng)用比較廣泛的細(xì)胞增殖標(biāo)記之一。PTEN是一種抑癌基因,在細(xì)胞增殖周期中,主要參與細(xì)胞周期的調(diào)控,發(fā)揮抑制細(xì)胞過度增殖和促進(jìn)凋亡的作用。本實驗通過檢測 PCN A及 PTEN在EM S組織中的表達(dá),探討 EM S的發(fā)病機(jī)制及二者在 EM S發(fā)展中的相關(guān)性。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    2007— 12~ 2009— 11在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院行手術(shù)治療的 EMS患者的異位內(nèi)膜48例,EM S患者的在位內(nèi)膜36例,通過開腹手術(shù)取得異位病灶組織及其在位內(nèi)膜。取正常的子宮內(nèi)膜組織 30例作為對照內(nèi)膜。患者年齡 28~ 55歲,平均 (32.8±5.6)歲 ,月經(jīng)周期規(guī)律,無其他內(nèi)科疾病,術(shù)前半年均未使用激素類藥物治療。所有診斷均經(jīng)術(shù)后病理證實,內(nèi)膜分期依據(jù)月經(jīng)周期的時間結(jié)合病理切片確定。

    1.2 試劑

    鼠抗人 PCNA單克隆抗體、兔抗人 PTEN多克隆抗體、S-P試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

    1.3 方法

    采用免疫組化染色(SP法):標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,5μm厚連續(xù)切片,實驗步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

    1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

    光學(xué)顯微鏡下 PCN A和 PTEN的染色陽性信號均為細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒,在10× 40高倍視野下,隨機(jī)選10個視野,依陽性細(xì)胞數(shù)占觀察同類細(xì)胞數(shù)的百分比分為4級。無陽性細(xì)胞為陰性(-),陽性細(xì)胞數(shù)≤50%為弱陽性(+ ),陽性細(xì)胞數(shù)> 50%為陽性(++ ),陽性細(xì)胞數(shù)≥75%為強(qiáng)陽性(+++)。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

    SPSS13統(tǒng)計軟件分析 ,采用 i2檢驗、Fisher’s精確檢驗及 Spearman等級相關(guān)分析,P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 PCN A與 PTEN在異位子宮內(nèi)膜與正常內(nèi)膜中的表達(dá)

    見表 1。PCNA、PTEN主要表達(dá)分別定位于子宮內(nèi)膜細(xì)胞的胞核與胞漿中。在子宮內(nèi)膜異位癥的異位內(nèi)膜,在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜的陽性表達(dá)依次減弱,分別為93.8%,63.9%,26.7%,兩兩之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P <0.05)。PTEN在異位內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率明顯降低為10.4%,在正常內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為76.7%,在位內(nèi)膜中的陽性表達(dá)介于兩者之間為47.2%,有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05)。

    表1 PCNA與 PTEN在異位子宮內(nèi)膜與對照子宮內(nèi)膜中的表達(dá)

    2.2 PCNA與 PTEN子宮內(nèi)膜中增生期及分泌期的表達(dá)

    見表2。PCN A在子宮內(nèi)膜的增生期的表達(dá)顯著高于分泌期的表達(dá),而 PTEN在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)分泌期高于增生期,兩者在 EMS患者的異位內(nèi)膜的增生期及分泌期中的表達(dá)均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P> 0.05)而在 EM S患者的在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜的增生期與分泌期中的表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.05)。

    表2 PCN A與 PTEN子宮內(nèi)膜中增生期及分泌期的表達(dá)

    3 討論

    細(xì)胞內(nèi)的增殖和凋亡過程幾乎涉及所有的病理生理過程,二者的失衡可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖。EM S的異位內(nèi)膜的持續(xù)存在不僅與其內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡能力降低有關(guān),也與異位細(xì)胞增殖能力改變有關(guān)[1]。PCNA是 DNA復(fù)制時所必需的調(diào)節(jié)蛋白,其表達(dá)在 G1期開始增高,S期達(dá)到高峰,G2期和 M期明顯下降[2]。PCNA的陽性程度可直接反應(yīng)出 DNA復(fù)制的活躍程度,反映了細(xì)胞的增殖情況。本研究發(fā)現(xiàn),EMS在位內(nèi)膜 PCNA表達(dá)百分?jǐn)?shù)明顯高于正常內(nèi)膜,而異位內(nèi)膜PCN A表達(dá)百分?jǐn)?shù)又高于在位內(nèi)膜。說明 EM S的發(fā)生與細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)有關(guān)。本實驗的結(jié)果與 Nakayama等[3]研究一致,顯示:EM S異位內(nèi)膜中 PCN A陽性細(xì)胞數(shù)量明顯高于在位內(nèi)膜。PCN A在 EMS中的異位內(nèi)膜的增生期和分泌期的陽性表達(dá)率分別為96.4%,90.0%,其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),在在位內(nèi)膜的增生期與分泌期的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2= 5.063,P> 0.05),PCN A在正常子宮內(nèi)膜組織中的增生期和分泌期的陽性表達(dá)率分別為44.4%,0%,其差別有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.01),此結(jié)果與 Fujishita A等[4]的研究相一致。表明 EM S患者內(nèi)膜細(xì)胞增殖數(shù)量增加,這些增殖能力升高的內(nèi)膜有利于在異位灶種植、生長。研究表明 PTEN通過作用于 PKB信號傳導(dǎo)通路的中心環(huán)節(jié),使細(xì)胞周期阻斷在 G1期或促使細(xì)胞凋亡[5],從而影響細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移。本試驗中 PTEN在 EM S異位內(nèi)膜的陽性表達(dá)率低為10.4%,而在正常內(nèi)膜中的表達(dá)較高為76.7%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P<0.05),本試驗結(jié)果與 Mutter等[6]試驗結(jié)果大致相同。PTEN在 EM S的異位內(nèi)膜的增生期與分泌期的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義 (P> 0.05),但在在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜中的增生期與分泌期的表達(dá)均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,P <0.05)。本研究結(jié)果同時顯示,PCN A與PTEN之間存在負(fù)相關(guān),提示二者之間可能以負(fù)反饋調(diào)節(jié)方式參與 EM S的發(fā)生發(fā)展。

    綜上所述,EM S中的 PCNA的上調(diào),使異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng) ,而 PTEN在 EM S中的缺失,促凋亡能力減弱從而使細(xì)胞增生和凋亡之間的平衡破壞,導(dǎo)致這些細(xì)胞的種植、生長,促發(fā) EMS。通過檢測 EM S患者中的 PCNA及PTEN的表達(dá)水平,為其診斷、治療及其預(yù)后提供一種新的思維方法。

    [1]Beliard A,Noel A,Foidart JM.Reduction of apoptosis and proliferation in Endometriosis[J].Fertil Setril,2004,82(l):80-85

    [2]Taftachi R,Ayhan A,Ekici S,et al.Proliferating-cell nuclear anti-gen(PCN A)as an independent prog nostic marker in patients after prostatectomy:a comparison of PCNA and Ki67[J].BJU Int,2005,95(4):650-654

    [3]LiSF,Nakayama K,Masuazawa H,et al.The number of proliferating cell nuclear Natigen Positive cells in endometriotic lesions differs from that in the Nedometium.Analysis of PCNA positive cells during the menstrual cycle and in post一menopause[J].Virchows Arch A Pathol Anat H istopathol,1993,423(4):257-263

    [4]Fujishita A,H asuo A,Khan KN,et al.Immunohistochemical study of angiogenic factorsin endometrium and endometriosis[J].Gynecol Obstet Invest,1999,48:36-44

    [5]YamadaKM,Araki M.Tumor suppressor PTEN:modulator of cell signaling,g rowth,Migration and apoptosis[J].J Cell Sci,2001,114(13):2375-2382

    [6]M utter GL,Ming CL,Fitzg erald JT,et al.Changes in endometrial PTEN expression throughout the human menstrual cycle[J].Clin Endocrinol Metab,2000,85:2334-2338

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