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    Twist基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

    2010-04-18 05:29:34鮑文華魏士剛閻紅娥宿海峰
    黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2010年2期
    關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞上皮分化

    鮑文華,魏士剛,閻紅娥,宿海峰

    (佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科,黑龍江 佳木斯 154003)

    Twist是存在于果蠅、鼠和人等生物體內(nèi)的一種堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,正常情況下主要表達(dá)于胎盤、胚胎中胚層和成人的某些中胚層來源的未分化組織[1]。近期在多種人類上皮來源腫瘤中發(fā)現(xiàn) Twist表達(dá)增高,如乳腺癌、前列腺癌、胃癌等,這可能與 Twist能介導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 (epithelial mesenchymal transition,EM T)有關(guān) ,但 Twist基因在非小細(xì)胞肺癌中的作用如何卻少見報道。我們利用免疫組織化學(xué)方法檢測了非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)組織中Twist基因的表達(dá),以探討其在肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源

    隨機(jī)選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 2007— 02~ 2009—02手術(shù)切除 NSCLC組織標(biāo)本45例,其中鱗癌 26例,腺癌19例;高、中分化30例,低分化15例;按 UICC1997肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)分期 ,Ⅰ 、Ⅱ 期 32例 ,Ⅲ 期 13例 ;男 28例 ,女 17例。均為原發(fā)性肺癌,且術(shù)前未接受放化療,取 12例癌旁正常肺組織作為對照。

    1.2 試劑

    Twist兔抗人多克隆抗體 Twist(H-81,SC15393)購自美國 Santa Cruz生物技術(shù)公司,SP免疫組織化試劑盒(KIT-9710)和 DAB顯色試劑盒 (DAB-0031)均購自福州邁新生物技術(shù)公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    肺癌標(biāo)本經(jīng)福爾馬林液固定、常規(guī)石蠟包埋。每例連續(xù)切片 3張 ,切片厚4μ m,供常規(guī) HE染色和 Twist免疫組織化學(xué)染色。Twist兔抗人多克隆抗體濃度為1∶150。參照檢測試劑盒說明進(jìn)行。

    1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

    Twist蛋白表達(dá)于細(xì)胞漿,呈清晰的棕黃色為陽性表達(dá)。在 10×40高倍視野下 ,隨機(jī)選10個視野,計數(shù)腫瘤細(xì)胞中陽性比例計算百分率,陽性細(xì)胞 <10%記為(-);陽性細(xì)胞數(shù)在10%~25%記為(+);陽性細(xì)胞數(shù)在25%~50%記為(++ );陽性細(xì)胞數(shù)>50%記為(+++)。結(jié)果判定采用雙盲對照法。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

    應(yīng)用 SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。據(jù)不同需求分別進(jìn)行了χ2檢驗(yàn)及 Fisher確切概率法,P <0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 Twist的表達(dá)

    在45例 N SCLC組織中,31例癌細(xì)胞 Twist呈陽性 [(+)-(+++)]表達(dá) ,陽性率為 68.9%;12例癌旁正常肺組織有2例為陽性表達(dá),陽性率為 16.7%,兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2= 10.599,><0.01)。Twist陽性表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿中,為棕黃色,間質(zhì)和血管未見表達(dá) (見圖1、2)。

    2.2 肺癌組織中 Twist蛋白的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

    Twist的表達(dá)水平與肺癌的分化程度相關(guān) (P<0.05),與患者的性別、年齡、病理類型、腫瘤直徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和 TNM分期無明顯相關(guān)性 (P> 0.05),見表1。

    表1 肺癌組織 Twist蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系[n(%)]

    鱗癌 26 20(76.9) 6(23.1)腺癌 19 11(57.9) 8(42.1)腫瘤直徑 0.652 <0.05≤3cm 11 6(54.5) 5(45.5)>3cm 34 25(73.5) 9(26.5)分化程度 7.407 <0.05高9 4(44.4) 5(55.6)中21 13(61.9) 8(38.1)低15 14(93.3) 1(6.7)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 0.254 >0.05陽性 25 18(72.0) 7(28.0)陰性 20 13(65.0) 7(35.0)TNM分期 0.105 >0.05Ⅰ~Ⅱ 32 23(71.9) 9(28.1)Ⅲ13 8(61.5) 5(38.5)

    3 討論

    Twist基因首先在果蠅中被發(fā)現(xiàn),隨后相繼在水母、文昌魚、斑馬魚、非洲、蟾蜍、小鼠、大鼠以及人類中被確認(rèn)。人的Twist基因位于7p21.2,編碼由202個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。Twist在胚胎生長發(fā)育階段誘導(dǎo)細(xì)胞遷移過程中起關(guān)鍵的調(diào)控作用,廣泛表達(dá)于中胚層起源的組織細(xì)胞,在出生后降至極底水平。2004年 Weinberg在小鼠乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型中發(fā)現(xiàn) Twist基因的重要作用[2],從而引發(fā)了研究人員對于腫瘤事件中 Twist的作用關(guān)注。近期研究證實(shí),Twist參與了多種上皮來源的腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EM T)并促進(jìn)其侵襲轉(zhuǎn)移[3],其可在轉(zhuǎn)錄水平上通過影響 E-box啟動子的表達(dá),誘導(dǎo) EM T的形成[4],從而抑制 E-cadherin轉(zhuǎn)錄,使由 E-cadherin所調(diào)控的細(xì)胞黏附作用失效,使腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶上脫落,從而侵入周圍組織[5]。此外,Twist還可以通過抑制分化、通過阻斷 p53通路、阻礙 N-M yc的促凋亡作用和抑制 NF-κB/TN F通路等多種途徑引起惡性腫瘤的發(fā)生[6,7]。本試驗(yàn)通過對非小細(xì)胞肺癌組織中 Twist基因的表達(dá)進(jìn)行檢測分析,發(fā)現(xiàn) Twist在 NSCLC組織中陽性率為68.9%,顯著高于癌旁組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,提示Twist蛋白可為肺癌與非癌的鑒別提供參考。本實(shí)驗(yàn)通過Twist與臨床病理資料相關(guān)分析發(fā)現(xiàn) Twist基因的高表達(dá)與肺癌分化程度相關(guān) (P<0.05),這與惠林萍等[8]的研究結(jié)果相似 ,提示通過檢測肺癌組織中 Twist的表達(dá)情況,可能對腫瘤的惡性程度做出判斷和預(yù)測。

    綜上所述,Twist在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用,Twist很可能是肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的一個新的重要基因,但其參與肺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后的機(jī)制及其與其他相關(guān)基因的關(guān)系方面,尚需進(jìn)一步研究。

    [1]Kang Y,Massague J.Epithelial-mesenchymal transitions:twist in development and metastasis[J].Cell,2004,118(3):277-279

    [2]Yang J,Mani S A,Donaher J L,et al.Twist,a master regulator of morphogenesis,plays an essential role in tumor metastasis[J].Cell,2004,117:927-939

    [3]Elias M C,Tozer KR,Silber JR,et al.TWIST is expressed in human gliomas and promotes invasion[J].Neoplasia,2005,7(9):824-837

    [4]Ansieau S,Bastid J,Doreau A,et al.Induction of EM T by twist proteins as a collateral effect of tumor-promoting inactivation of premature senescence[J].Cancer Cell,2008,14(1):70-89

    [5]Vesuna F,van Diest P,Chen JH,et al.Twist is a transcriptional repressor of E-cadherin g ene ex pressionin breast cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2008,367(2):235-241

    [6]Sosic D,Richardson JA,Yu K,et al.Twist regulates cytokine gene expression through a negativ e feedback loop that represses N F-κ B activity[J].Cell,2003,112(2):169-180

    [7]Sandrine Valsesia-Wittmann,Maud Magdeleine,Sebastien Dupasquier,et al.Oncogenic cooperation between H-Twist and NMyc overrides failsafe programs in cancer cells[J].Cancer Cell,2004,6(6):625-630

    [8]惠林萍,劉冰冰,趙蕾,等.Twist在肺癌中高表達(dá)并與肺癌的分化有關(guān) [J].中國肺癌雜志,2009,12(4):294-299

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