70例嚴(yán)重少精癥和無精癥患者 Y染色體微缺失檢測

王喜良,郝冬梅,侯開波,張寧,閆素文

(中國人民解放軍第 202醫(yī)院全軍計(jì)劃生育優(yōu)生優(yōu)育技術(shù)研究所,遼寧 沈陽 110003)

嚴(yán)重少精癥和無精癥是男性不育的主要原因之一[1]。導(dǎo)致嚴(yán)重少精癥和無精癥的因素有很多,包括染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常,微生物感染、藥物影響等。近年發(fā)現(xiàn) Y染色體長臂存在微缺失現(xiàn)象,本文采用多重 PCR技術(shù)檢測染色體正常的嚴(yán)重少精癥和無精癥患者的 Y染色體微缺失,探討嚴(yán)重少精癥和無精癥與 Y染色體微缺失之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 70例嚴(yán)重少精癥和無精癥患者均來自本院 2009年1月至 12月不育門診就診患者。年齡 22～39歲,平均 30歲。按 WHO精液常規(guī)分析標(biāo)準(zhǔn)確定為嚴(yán)重少精癥或無精癥,其中嚴(yán)重少精癥 39例,無精癥 31例。對照組 20例為在本院就診,并經(jīng)至少 1次精液常規(guī)分析滿足 WHO(精子密度正常)標(biāo)準(zhǔn)者。

1.2 方法 用血液 DNA提取試劑盒提取 DNA,運(yùn)用多重 PCR技術(shù)檢測 Y染色體 AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc三個區(qū)域中的 6個序列標(biāo)簽位點(diǎn)微缺失。每個樣品做 A組和 B組兩個多重 PCR反應(yīng),A組包括 sY 254、sY127、sY86三個位點(diǎn),B組包括 sY134、sY84、sY255三個位點(diǎn)。每組設(shè)置一對擴(kuò)增 SRY基因 (位于 Y染色體短臂上的性別決定基因)的引物,作為內(nèi)對照。Y染色體微缺失試劑盒來自于透景生命科技有限公司。按照試劑盒操作說明擴(kuò)增 DNA,擴(kuò)增條件為:95℃ 3 min;95℃ 30 s,59℃ 30 s,72℃ 30 s,35個循環(huán),最后 72℃延伸 10m in。產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后,用凝膠成像系統(tǒng)觀察分析條帶。

2 結(jié)果

39例嚴(yán)重少精癥患者中發(fā)現(xiàn) 5例存在 Y染色體微缺失,均為 AZFc缺失,缺失率為 12.82%。31例無精癥患者中發(fā)現(xiàn) 6例存在Y染色體微缺失,其中 AZFb+AZFc缺失 2例,AZFb缺失 3例,AZFc缺失 1例,缺失率為 19.35%。70例嚴(yán)重少精癥和無精癥患者共檢出 11例 Y染色體微缺失,總?cè)笔蕿?15.71%。20例精液正常患者 Y染色體均未發(fā)現(xiàn)微缺失。

3 討論

1976年,Tiepolo和 Zuifaidi首先提出 Y染色體上有多個基因參與生精過程[2],30多年來的研究發(fā)現(xiàn)男性特有的 Y染色體上面存在一個關(guān)鍵的與生育相關(guān)的因子的區(qū)域,稱為 AZF區(qū)。目前認(rèn)為在 AZF區(qū)上存在三個精子發(fā)生亞區(qū) (AZFa、AZFb、AZFc),各亞區(qū)包含的位點(diǎn)在男性生殖細(xì)胞發(fā)育的不同時期起著不同的作用,位點(diǎn)的缺失可致患者表現(xiàn)為少、弱精癥或無精癥從而引發(fā)不育。一般認(rèn)為,Y染色體的近端缺失 (涉及 AZFa和 AZFb),表現(xiàn)以唯支持細(xì)胞綜合癥為主的嚴(yán)重生精障礙,Y染色體的遠(yuǎn)端缺失 (涉及 AZFb遠(yuǎn)段和 AZFc),可殘留島狀的生精正常區(qū)域[3]。

無精癥和少精癥 AZF總的缺失率不同實(shí)驗(yàn)室報(bào)道差別很大 1%～55%[4],可能是選擇的對象不同導(dǎo)致結(jié)果不同。本文中選擇的病例是排除了染色體異常的患者后檢測的結(jié)果。31例無精癥患者中發(fā)現(xiàn) 6例存在 Y染色體微缺失,其中 AZFb+AZFc缺失 2例,AZFb缺失 3例,AZFc缺失 1例,缺失率為 19.35%,而 39例嚴(yán)重少精癥患者中發(fā)現(xiàn) 5例存在 Y染色體微缺失,均為 AZFc缺失,缺失率為 12.82%?？梢钥闯鰺o精癥患者的微缺失率高于嚴(yán)重少精癥,且缺失情況更嚴(yán)重。

Y染色體微缺失的檢測具有非常重要的意義,不同的位點(diǎn)缺失其治療方法是不一樣的,檢測的結(jié)果將指導(dǎo)臨床醫(yī)生決定是否采用供精人工授精或移植前遺產(chǎn)學(xué)診斷 (PGD)實(shí)施輔助生育。

AZFa,AZFb,AZFb+AZFc,AZFa+b+c這四種類型缺失的患者,一般表現(xiàn)為無精子癥。即使通過睪丸穿刺,獲得精子的機(jī)會也幾乎為零,故不建議進(jìn)行穿刺手術(shù)和施行卵胞漿內(nèi)單精子注射 ICSI。這類患者可以通過人類精子庫供精生育后代。

AZFc區(qū)域缺失的少精子癥患者,其精子數(shù)目有進(jìn)行性下降的趨勢,部分患者最后發(fā)展為無精,所以應(yīng)及早進(jìn)行治療,對暫不需要后代的患者,可將其精液冷凍保存。

20世紀(jì) 90年代始,卵胞漿內(nèi)單精子注射技術(shù)的應(yīng)用使嚴(yán)重少精癥甚至無精癥不育男性實(shí)現(xiàn)了生育的可能。但無精癥和嚴(yán)重少精癥患者存在遺傳缺陷的幾率是很大的,Y染色體微缺失可通過輔助生殖技術(shù)傳給男性子代,子代有可能在成年后表現(xiàn)出與父親相同的異常缺陷,應(yīng)建議患者實(shí)施移植前遺傳學(xué)診斷 (PGD)來獲得后代。因此嚴(yán)重少精癥和無精癥患者在進(jìn)行輔助生育治療前應(yīng)常規(guī)進(jìn)行遺傳咨詢,并應(yīng)把 Y染色體微缺失檢測應(yīng)作為常規(guī)的檢查項(xiàng)目[5]。

開展 Y染色體微缺失檢測,可全面評價男性不育遺傳缺陷,從而更好的解釋發(fā)病原因,提供遺傳咨詢和指導(dǎo)臨床診療。

[1]Krausz C,Mc Elreavey K.Y chromosome and male infertility[J].Front Biosci,1999,15(4):1-8.

[2]Tiepolo L,Zuffardi O.Localization of factors controlling spermatogenesis in the nonfluorescent portion of the human Y chromosome long arm[J].Hum Genet,1976,34(2):119-124.

[3]Maurer B,Simoni M.Y chromosome m icrodeletion screening in infertilemen[J].JEndocrinol Invest,2000,23(10):664-670.

[4]Dada R,Gupta NP,Kucheria K.Yq microdeletions-azoospermia factor candidate genes and spermatogenic arrest[J].J Biomol Tech,2004,15(3):176-183.

[5]Liow SL,Yong EL,Ng SC.Prognostic value of Y deletion analysis:How reliable is the outcome of Y deletion analysis in providing a sound prognosis?[J].Hum Reprod,2001,16(1):9-12.