Ang-2、Cox-2及 VEGF在食管癌組織中表達(dá)的研究

卓 越,李敬巖

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化二科,黑龍江 佳木斯 154003)

血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (vascular endothelial growth factor,V EGF)為目前已知的兩個(gè)作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成促進(jìn)因子,在腫瘤的血管生成及發(fā)展中起著重要的作用[1]。V EGF是一類作用最強(qiáng)、特異性最高的可溶性血管生成促進(jìn)因子,與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移等特性密切相關(guān)。V EGF表達(dá)后,通過(guò)與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體結(jié)合,刺激內(nèi)皮細(xì)胞分化、增殖、遷移 ,促進(jìn)血管構(gòu)建[1]。環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)又稱前列腺素過(guò)氧化物合成酶-2(PGHS-2),是前列腺素(PGs)合成初始步驟中的關(guān)鍵限速酶,生理情況下無(wú)明顯表達(dá),當(dāng)細(xì)胞受到相應(yīng)刺激后便開(kāi)始合成表達(dá)。近期研究表明,Cox-2除了在炎癥中發(fā)揮重要作用外,還與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和腫瘤血管生成等有密切關(guān)系[2]。實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè) Ang-2、Cox-2和 V EGF在食管癌病理組織中的表達(dá),分析其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

所有標(biāo)本收集于2008-01～ 2009-06胸外科手術(shù)切除的食管癌病理標(biāo)本52例,患者男43例,女9例。年齡42～ 79歲,平均58歲。標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確診為鱗狀細(xì)胞癌。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者23例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例。所有患者送病理檢查前均未放療和化療,且均為該院病理科存檔標(biāo)本。另取隨機(jī)胃鏡檢查組織學(xué)相對(duì)正常的食管黏膜20例作為正常對(duì)照組。

1.2 主要試劑

采用免疫組化方法,兔抗人 Angiopoietin-2多克隆抗體、羊抗人 Cox-2多克隆抗體購(gòu)于武漢博士德生物技術(shù)公司,鼠抗人 VEGF單克隆抗體工作液、S-P免疫組化試劑盒購(gòu)于中山生物技術(shù)公司。

1.3 方法

收集相應(yīng)病例的存檔蠟塊,行 4μm厚連續(xù)切片,取 1張行HE染色,其余行免疫組化 SABC方法染色。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每次實(shí)驗(yàn)均以公司提供的陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定

以胞漿呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。在光鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野 (×400),平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥ 10%判斷為陽(yáng)性病例,＜10%為陰性病例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

兩組間率的比較采用 X2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn) α= 0.05,P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ang-2Cox-2及 VEGF在食管癌組織及正常組織中的表達(dá)

Ang-2陽(yáng)性著色主要位于腫瘤細(xì)胞和部分腫瘤微血管內(nèi)皮細(xì)胞,Cox-2及 VEGF蛋白表達(dá)主要在腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì),少部分在胞膜。在食管癌組織和正常對(duì)照組中 Ang-2陽(yáng)性率分別為55.76%(29/52)和5.00%(1/20),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。在食管癌組織和正常對(duì)照組中Cox-2陽(yáng)性率分別為 67.31%(35/52)和10.00%(2/20),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。在食管癌組織和正常對(duì)照組中 V EFG陽(yáng)性率分別為61.54%(32/52)和0.00%(0/52)兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。

2.2 Ang-2 Cox-2及 VEFG在食管癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)

在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌組織中 Ang-2陽(yáng)性率分別為82.61%(19/23)、37.04%(10/29),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌組織中 Cox-2陽(yáng)性率分別為 82.61%(19/23)、55.17%(16/29),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。在有、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌組織中 VEGF陽(yáng)性率分別為 86.96%(20/23)、44、44%(12/29),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。

3 討論

腫瘤性血管是高度不成熟的血管,依賴于腫瘤組織產(chǎn)生的促血管生成因子克服保持血管穩(wěn)定的因素。Ang-2是分泌性蛋白,由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生,與 Tie-2受體結(jié)合不能引起后者磷酸化而破壞血管完整性。病理狀態(tài)下,Ang-2主要表達(dá)于腫瘤、炎癥、創(chuàng)傷等部位 ,以新生血管網(wǎng)最為豐富。Cox-2在多種腫瘤中有較高表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制凋亡,增加腫瘤細(xì)胞侵襲力及促進(jìn)腫瘤血管生成。V EGF是最直接參與誘導(dǎo)腫瘤血管形成的因子之一,特異地誘導(dǎo)和激活血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂,直接刺激血管生成;又可使微血管通透性增加,導(dǎo)致大分子滲出,為新血管形成提供基質(zhì)支架。Inueo等研究表明,V EGF蛋白不僅在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)而且在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)[3]。我們實(shí)驗(yàn)證實(shí),Ang-2、Cox-2和 V EGF表達(dá)量在正常食管黏膜中明顯低于癌組織,在癌組織的表達(dá)集中于腫瘤浸潤(rùn)前緣,說(shuō)明食管癌的發(fā)生與浸潤(rùn)與 Ang-2、COX-2和 VEGF的高表達(dá)密切相關(guān)。分析顯示 Ang-2、Cox-2和 VEGF表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)有關(guān),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 Ang-2、Cox-2和 V EGF表達(dá)量明顯高于無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)的深度是與食管癌預(yù)后明顯相關(guān)的指標(biāo)。Tadahiro等發(fā)現(xiàn) Cox-2強(qiáng)表達(dá)的食管癌患者預(yù)后較弱表達(dá)的差,多因素分析中 Cox-2是預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[4]。綜上所述,Ang-2、Cox-2和 V EGF在食管癌組織中的過(guò)表達(dá)和腫瘤的血管及淋巴管生成密切相關(guān),參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和淋巴轉(zhuǎn)移。

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