IRIS iQ200與Sysmex UF-1000i自動尿沉渣分析儀檢測尿液紅、白細(xì)胞的性能評價

謝文鋒，林 川，嚴(yán)海燕，梁穆興，黃松音，鮑藴文

(1、中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州 510120；2、浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎病中心實驗室，浙江 杭州 310003)

尿液中有形成分的檢查對臨床診治泌尿系統(tǒng)疾病及全身相關(guān)疾病具有極其重要的作用。沉渣中有形成分檢查的經(jīng)典方法是顯微鏡人工判別。人工鏡檢的不足之處是速度慢、敏感度低、重復(fù)性差，在當(dāng)前臨床尿液檢查標(biāo)本不斷增加的情況下，每份尿液標(biāo)本都進(jìn)行人工鏡檢難以做到。為此，尿沉渣自動分析儀應(yīng)運(yùn)而生，自動化尿液分析儀在幾分鐘之內(nèi)就能將尿液的有形成分進(jìn)行定量分析，從而大大提高了臨床上尿液檢測的速度。歷經(jīng)多年發(fā)展，現(xiàn)今已形成兩大類型產(chǎn)品：一類是以IRIS iQ200為代表的采用平面流式成像分析技術(shù)原理的自動尿沉渣分析儀；另一類是采用流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光染色技術(shù)的Sysmex UF系列自動尿沉渣分析儀。目前由于UF-1000i是其系列的最新產(chǎn)品，國內(nèi)尚未有對其進(jìn)行性能評價和與iQ200比對分析的報道。故我們通過對RBC和WBC的檢測參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，對iQ200與UF-1000i自動尿沉渣分析儀檢測性能進(jìn)行評價，為實驗室尿沉渣檢查的復(fù)檢提供參考。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 隨機(jī)收集2009年10月20日至2009年11月29日中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院就診患者和健康體檢人群尿液標(biāo)本102例，年齡6～78歲，男性62例，女性40例。

1.2 實驗方法

1.2.1 儀器 iQ200和UF-1000i自動尿沉渣分析儀、XE-2100血細(xì)胞分析儀及相關(guān)配套試劑。

1.2.2 方法 用一次性潔凈塑料杯收集我院患者送檢尿液標(biāo)本20ml以上，充分混勻后分3管，分別用于iQ200、UF-1000i自動尿沉渣分析儀和尿沉渣人工鏡檢計數(shù)。尿沉渣人工鏡檢：用毛細(xì)吸管吸取混勻后的尿液滴入牛鮑氏定量計數(shù)板中鏡檢，計數(shù)10個大方格體積(1μl)尿液中的紅、白細(xì)胞等有形成分，結(jié)果以個數(shù)/μl報告(此法部分參考全國臨床檢驗操作規(guī)程第3版[1])；iQ200和UF-1000i尿液分析按儀器操作說明書進(jìn)行檢測。iQ200、UF-1000i及人工鏡檢對尿沉渣的判讀以雙盲方式進(jìn)行。以人工鏡檢作為標(biāo)準(zhǔn)，對兩種儀器的3類結(jié)果(iQ200自動分析結(jié)果、iQ200人工修正后結(jié)果、UF-1000i自動分析結(jié)果)進(jìn)行分析比較。

1.3 有關(guān)性能指標(biāo)評估

1.3.1 精密度 取RBC數(shù)約為4～5×1012個/L新鮮EDTA抗凝全血及經(jīng)裂解液裂解RBC制得的高濃度WBC懸液，用血細(xì)胞稀釋液配成RBC數(shù)約為220個/μl、WBC 數(shù)約 60 個/μl的細(xì)胞懸液， 分別在iQ200與UF-1000i上重復(fù)檢測10次進(jìn)行精密度檢查。

1.3.2 準(zhǔn)確性和線性 取RBC數(shù)為5.0×1012個/L新鮮EDTA抗凝全血用血細(xì)胞稀釋液配成高值RBC懸液，經(jīng)稀釋換算和人工計數(shù)得該RBC懸液含RBC為4932個/μl。取10ml該懸液用血細(xì)胞稀釋液倍比稀釋 2、4、8、16、32、64、128、256、512 倍共10個濃度，各濃度分成2管，每管約5ml，由RBC懸液低值到高值分別在iQ200與UF-1000i儀器上進(jìn)行檢測，以評價檢測RBC的線性和準(zhǔn)確性。挑選含WBC大于20×109個/L且中性粒細(xì)胞超過90%的新鮮EDTA抗凝全血2ml，加入10ml的RBC裂解液15min后用1200r/min離心5min，棄上清后加入5ml PBS，1200r/min離心5min，重復(fù)洗滌2次，最后用血細(xì)胞稀釋液配成WBC數(shù)為3150個/μl的WBC懸液。取10m l該懸液用血細(xì)胞稀釋液倍比稀釋2、4、8、16、32、64、128、256、512 倍共 10 個濃度， 各濃度分成2管，每管約5ml，由WBC懸液低值到高值分別在iQ200與UF-1000i儀器上進(jìn)行檢測，以評價檢測WBC的線性和準(zhǔn)確性。

1.3.3 攜帶污染率 用新鮮EDTA抗凝全血加血細(xì)胞稀釋液配成高值RBC懸液3份，與3份空白管(均為血細(xì)胞稀釋液)。先取高值樣品連續(xù)測定3次，隨后立即連續(xù)測定低值樣品3次，計算攜帶污染率。

計算公式：攜帶污染率 (%)＝L1-L3/H3-L3×100%。其中的L1、L3分別為第1次和第3次低值樣品的測定結(jié)果，兩者相減所得的差取其絕對值；H3為第3次高值樣品的測定結(jié)果[2]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 各組資料采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度

UF-1000i和 iQ200測定RBC和WBC 10次均值(個/μl)、標(biāo)準(zhǔn)差(個/μl)和變異系數(shù)(%)結(jié)果見表 1。

表1 UF-1000i和 iQ200測定 RBC、WBC 精密度結(jié)果±s，n=10)

表1 UF-1000i和 iQ200測定 RBC、WBC 精密度結(jié)果±s，n=10)

組別 RBC(CV%) WBC(CV%)UF-1000i iQ200 iQ200修正后216.57±12.12(5.6)198.67±11.50(5.8)217.20±7.60(3.5)57.74±2.83(4.9)55.40±2.60(4.7)60.20±0.85(1.4)

2.2 準(zhǔn)確性和線性

UF-1000i和 iQ200測定RBC和WBC準(zhǔn)確性和線性結(jié)果見表2。

表2 UF-1000i和iQ200測定RBC、WBC的準(zhǔn)確率和線性關(guān)系(n=10份梯度濃度)

2.3 攜帶污染率

iQ200 測得 RBC 3 個高值(個/μl)為 3987、4069、3983，3 個低值 (個/μl) 為 1、0、0， 攜帶污染率為0.025%，結(jié)果與文獻(xiàn)報道相近[3]。UF-1000i測得RBC 3 個高值(個/μl)為 4097、4037、4428，3 個低值(個/μl)為 2、0、0，攜帶污染率為 0.045%。

2.4 102 例尿液標(biāo)本 UF-1000i和 iQ200測定RBC和WBC與人工鏡檢比較

UF-1000i、iQ200和iQ200修正后的RBC與人工鏡檢RBC的相關(guān)性分別為(相關(guān)系數(shù)γ為0.845，0.897，0.952)，UF-1000i、iQ200 和 iQ200 修 正 后 的WBC與人工鏡檢WBC的相關(guān)性分別為 (相關(guān)系數(shù)γ 為 0.983，0.981，0.995)， 而 UF-1000i和 iQ200 測定RBC和WBC的相關(guān)性分別為 (相關(guān)系數(shù)γ為0.862，0.968)。

102 例尿液樣本檢測結(jié)果(見表3)經(jīng)兩兩配對的秩和檢驗，UF-1000i測得RBC的含量明顯高于iQ200與人工鏡檢測得的 RBC含量 (P＜0.01)，而iQ200修正后的RBC與人工鏡檢結(jié)果相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 UF-1000i、iQ200 和人工鏡檢三者檢測WBC的含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表3 102例尿液標(biāo)本UF-1000i、iQ200和人工鏡檢測定RBC和WBC的含量的比較(M，P25～P75)

3 討論

目前，自動尿沉渣分析儀主要有兩種類型：一類是根據(jù)成分檢測的電阻及對光散射的變化，結(jié)合熒光染色技術(shù)，間接分析尿液中的有形成分含量，稱為流式熒光技術(shù)；另一類是運(yùn)用數(shù)碼攝影成像技術(shù)，通過計算機(jī)形態(tài)識別軟件，根據(jù)有形成分圖像的形態(tài)、大小和對比度等參數(shù)進(jìn)行定量分析，稱之為成像分析技術(shù)。采用流式熒光技術(shù)的儀器，可在計算機(jī)屏幕上顯示各成分的直方圖和光學(xué)散點(diǎn)圖，操作者可根據(jù)圖形參數(shù)判斷樣本是否應(yīng)進(jìn)行人工鏡檢。而采用成像分析技術(shù)的儀器，在計算機(jī)屏幕上可顯示各成分的形態(tài)圖像，操作者可根據(jù)圖像對分類成分進(jìn)行人工復(fù)核，直接修正計算機(jī)錯判或誤判的分類成分，一定程度上實現(xiàn)了人工鏡檢的功能。

通過實驗，我們對采用流式熒光技術(shù)的UF-1000i和采用成像分析技術(shù)的iQ200自動尿沉渣分析儀進(jìn)行了RBC和WBC檢測性能的評價。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，iQ200修正后的 RBC、WBC準(zhǔn)確率高于 UF-1000i和iQ200自動分析結(jié)果；iQ200自動分析檢測的RBC結(jié)果準(zhǔn)確率較低，為57.4%；UF-1000i和iQ200測定RBC、WBC的精密度、線性良好，攜帶污染率低。結(jié)果見表1、表2。

通過對102例臨床尿液標(biāo)本的檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，UF-1000i測定RBC的含量明顯高于iQ200與人工鏡檢測定RBC的含量，iQ200修正后測定的RBC含量與人工鏡檢結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而UF-1000i、iQ200和人工鏡檢三者在檢測WBC的結(jié)果上差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但經(jīng)修正后的iQ200測定結(jié)果的準(zhǔn)確率有提高。說明兩類儀器測定的結(jié)果上，自動分析的WBC結(jié)果準(zhǔn)確性高，可以互認(rèn)；RBC方面，由于UF-1000i測定RBC的含量明顯高于iQ200與人工鏡檢測定的RBC含量，這樣我們有必要結(jié)合干化學(xué)等參數(shù)，判斷是否對樣本進(jìn)行人工鏡檢[4]。

綜上所述，UF-1000i、iQ200和iQ200修正后的WBC與人工鏡檢結(jié)果具有良好的相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；iQ200修正后的RBC與人工鏡檢結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且iQ200修正后的RBC和WBC的準(zhǔn)確性明顯好于UF-1000i和iQ200自動分析結(jié)果；UF-1000i、iQ200測定RBC和WBC的精密度、線性良好，攜帶污染率低。故我們可以對UF-1000i、iQ200測定WBC的結(jié)果直接進(jìn)行互認(rèn)；而RBC方面，我們不能直接確認(rèn)這兩臺儀器的自動分析結(jié)果，必須結(jié)合干化學(xué)等參數(shù)進(jìn)行人工復(fù)核。iQ200采用的成像分析技術(shù)，由于能在計算機(jī)屏幕上顯示有形成分的圖像信息，一定程度上實現(xiàn)了鏡檢功能，給人工復(fù)核帶來了便利。

[1]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜,等.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版,南京:東南大學(xué)出版社,2006:293-294.

[2]England JM.Guidelines for evaluation of blood cell analysers including those used for differential leucocyte and reticulocyte counting and cellmarker applications.International council for Standardization in Hematology[J].Clin Lab Heam,1994,50(16):154-175.

[3]陳 津,王 德,王 丹,等.IRIS iQ200全自動尿沉渣分析儀與SysmexUF-100分析儀及人工鏡檢的比較和評價[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2006,29(4):374-375.

[4]叢玉隆.尿液沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化的建議[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2002,25(4):249-250.