201例成人急性白血病免疫學(xué)表型分析

李 媛，胡正軍

(1浙江省義烏市疾病預(yù)防控制中心，浙江 義烏322000；2浙江省中醫(yī)院，浙江 杭州310006)

白血病是嚴(yán)重危害人類身心健康的惡性疾病，臨床上長期以來根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及組織化學(xué)染色對其進(jìn)行分型診斷，雖然發(fā)揮了巨大作用，但其分型結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了目前臨床對白血病診斷的要求。近年來隨著多參數(shù)、高分辨流式細(xì)胞儀的應(yīng)用，許多不能單憑形態(tài)學(xué)來確診的白血病能被準(zhǔn)確鑒定[1]，對各類急性白血病(Acute leukemia，AL)的診斷、治療和預(yù)后判斷有重要的臨床意義。為進(jìn)一步提高白血病的診斷水平，并指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后,我們對201例急性白血病免疫分型結(jié)果進(jìn)行回顧性總結(jié)和分析，并和形態(tài)學(xué)分型進(jìn)行比較。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2002年10月～2008年10月在浙江省中醫(yī)院血液科初診為急性白血病的患者201例，其中男136例，女65例，平均年齡35.5歲。按我國白血病診斷標(biāo)準(zhǔn)分型[2]，其中急性髓細(xì)胞白血病(acutemyeloblastic leukemia，AML)132 例，急性淋巴細(xì)胞白血病 (acute lymphoblastic leukemia，ALL)54例，形態(tài)學(xué)不典型無法準(zhǔn)確判斷者15例。

1.2 標(biāo)本準(zhǔn)備 取骨髓或外周血2m l，肝素或EDTA抗凝。根據(jù)骨髓增生程度及外周血白細(xì)胞數(shù)，部分樣本用生理鹽水稀釋至細(xì)胞數(shù) (1～10)×109/L備用。

1.3 儀器與試劑 流式細(xì)胞儀為美國貝克曼庫爾特公司XL-EPICS。所有單克隆抗體及紅細(xì)胞裂解液 (FACS Lysing Solution)均購自美國Coulter公司，抗體有淋巴細(xì)胞 T 系標(biāo)志 CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8，B 系 標(biāo) 記 CD10、CD19、CD20、CD22、CD22； 髓 系 標(biāo) 記 MPO、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、CD117；紅系候選單抗為GPA；巨核系候選單抗為 CD41、CD61；非系列特異性抗原 CD34、CD38、HLA-DR及白細(xì)胞共同抗原CD45。

1.4 方法 采用全血單抗三色標(biāo)記法檢測細(xì)胞表面抗原或胞漿內(nèi)抗原。首先調(diào)整骨髓細(xì)胞濃度至106/m l左右，分別取1ml加至每管，再分別加抗CD45單抗5μl和各類標(biāo)有不同熒光色素的單抗10μl，混勻，避光室溫下反應(yīng) 30min左右后，溶血，PBS洗滌后，靜置15～20min后上機(jī)檢測。胞漿內(nèi)抗原檢測：加入抗CD45單抗室溫孵育30min后，再按試劑盒所述步驟改變細(xì)胞膜滲透性，最后加相應(yīng)單抗孵育30min后上機(jī)檢測。

1.5 結(jié)果判斷 淋系標(biāo)志≥30%為陽性,髓系標(biāo)志≥20%為陽性，CD34，HLA-DR≥20%為陽性。My+ALL指形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)符合ALL，免疫分型以淋系為主，至少有1個(gè)髓系抗原表達(dá)；Ly+AML指形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)符合AML，免疫分型以髓系為主，至少有1個(gè)淋系抗原表達(dá)；同一白血病細(xì)胞同時(shí)表達(dá)髓系和淋系標(biāo)記稱為雙表型白血病；存在兩群或以上細(xì)胞群，免疫分型分別表達(dá)淋系和髓系標(biāo)記，稱為雙系列型白血病[3]。

2 結(jié)果

2.1 CD34及HLA-DR與FAB分型之間的關(guān)系

2.2 132例AML抗原表達(dá) 髓系抗原表達(dá)主要是CD33、CD13，陽性率分別是93.2%和77.3%；其次為CD11、CD15、CD14， 陽性率分別為 50%、29.5%和9.1%；56.8%AML患者伴淋巴系抗原表達(dá)，淋巴系抗原依次為CD4、 CD7、CD22、CD19，陽性率分別是22.7%、20.5%、18.2%、9.1%。 (見表 2)。

表1 AL各亞型CD34及HLA-DRA表達(dá)情況

2.3 54例ALL抗原表達(dá) ALL淋巴系抗原表達(dá)陽性率依次為 CD19(88.9%)、CD22(88.9%)、CD10(83.3%)、CD20(55.6%)。 50%ALL 患者伴髓系抗原表達(dá)，陽性率依次為 CD33(22.2%)、CD11(22.2%)、CD13(11.1%)(見表 3)。

表2 132例AML抗原表達(dá)情況

表3 54例ALL抗原表達(dá)情況

2.4 15例形態(tài)學(xué)無法分型的急性白血病患者經(jīng)免疫學(xué)檢查后6例診斷為急性混合細(xì)胞型白血??；3例診斷為ALL-L2；3例診斷為B-ALL；3例診斷為AML-M0。

3 討論

目前國內(nèi)許多醫(yī)院診斷白血病主要依靠形態(tài)學(xué)及組織細(xì)胞化學(xué)染色，但是單純的形態(tài)加細(xì)胞化學(xué)染色已遠(yuǎn)不能滿足臨床需要，尤其對于形態(tài)學(xué)不典型的復(fù)雜類型白血病的鑒定往往依靠形態(tài)分析人員的經(jīng)驗(yàn)，不同人員分析所得結(jié)論可能不同,甚至相反，因此上述方法存在相當(dāng)?shù)木窒扌?，有出現(xiàn)錯(cuò)誤判斷的可能性，并影響到下一步的治療。流式細(xì)胞免疫分型是應(yīng)用單克隆抗體熒光標(biāo)記技術(shù)對各種血細(xì)胞內(nèi)外的特異性抗原進(jìn)行精細(xì)的檢測和判定,具有高度的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，且能夠在短期內(nèi)對大量細(xì)胞定量分析，因而提高了白血病分型的準(zhǔn)確率，彌補(bǔ)了形態(tài)學(xué)分型的不足。

隨著免疫學(xué)單抗技術(shù)的不斷提高和對白細(xì)胞分化抗原研究的日趨深入，已認(rèn)識到有些白血病細(xì)胞抗原特異性強(qiáng)，很少發(fā)生交叉表達(dá)，如CD3，CD22，CD79，MPO等，有些曾被認(rèn)為屬于某系列特異性的抗原，實(shí)際在其它系列的某一階段或特殊情況下也能出現(xiàn)， 如 CD7，CD5，CD10，CD19，CD13，CD33 等[4]。

為了進(jìn)一步了解白血病細(xì)胞來源和生物學(xué)特性，我們分析了201例初診急性白血病患者的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)AML中除M3病型外，其他病型CD34和(或)HLA-DR相對較高的表達(dá)，與國內(nèi)外的報(bào)道基本一致，即M3型白血病CD34低表達(dá)，HLA-DR多陰性[5，6]。 CD14主要在M4、M5中表達(dá)， 表達(dá)率分別為100%、33.3%，其他白血病均不表達(dá)此抗原。已有研究證實(shí)CD14為單核細(xì)胞的特異性標(biāo)記抗原[7]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也支持這個(gè)結(jié)論，提示可以把CD14作為M4、M5較為特異的免疫分型標(biāo)志。另在AML中M4、M5的CD4陽性率為70%，提示CD4一定程度上也可以作為M4、M5的輔助分型指標(biāo)。AML部分亞型伴淋巴系抗原表達(dá)，Khalidi[8]等報(bào)道AML中48.1%伴淋系表達(dá) (CD20、CD7、CD19、CD2、 CD3、CD5、CD10)。本研究結(jié)果顯示：56.8%AML患者伴淋巴系抗原表達(dá)，表達(dá)率依次為 CD4、CD7、CD22、CD19。ALL B淋巴系抗原表達(dá)主要是CD19、CD22、CD10、CD20，T淋巴系抗原表達(dá)主要是CD7，本研究中ALL亞型主要是B型ALL；50%ALL患者伴髓系抗原表達(dá)，表達(dá)率依次為CD33、CD11b、CD13。

免疫分型在AL的診斷中的價(jià)值是近年研究的熱點(diǎn)之一，但不一致性甚至相反的結(jié)論使其至今尚無統(tǒng)一的國際分型標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)論各異的原因可能與單克隆抗體(McAb)的來源、檢測手段的靈敏性、抗原表達(dá)與否的判定標(biāo)準(zhǔn)、不同的病例組成等因素有關(guān)。相信隨著免疫學(xué)單抗技術(shù)的不斷提高和對白細(xì)胞分化抗原研究的日趨深入，在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上結(jié)合免疫學(xué)分析，可更精確地了解待檢測細(xì)胞的不同分化階段和類型，提高白血病的分型準(zhǔn)確性，具有補(bǔ)充和糾正診斷的臨床意義?？傊毙园籽∶庖叻中褪菍π螒B(tài)學(xué)分型的重要補(bǔ)充，對于復(fù)雜類型白血病的診斷有重要價(jià)值。

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