Sysmex KX-21血液分析系統(tǒng)校準(zhǔn)周期的建立及其應(yīng)用

李劍珉，顏 簫，李南華，涂永紅

(1、江西寄生蟲病防治研究所，江西 南昌 330046；2、江西特康科技有限公司)

校準(zhǔn)(Calibration)是指“在規(guī)定條件下，為確定測(cè)量?jī)x器或測(cè)量系統(tǒng)所指示的量值，或?qū)嵨锪烤呋騾⒖嘉镔|(zhì)所代表的量值，與對(duì)應(yīng)的由標(biāo)準(zhǔn)所復(fù)現(xiàn)的量值之間關(guān)系的一組操作。是指建立分析物的濃度或活性與檢測(cè)方法/檢測(cè)系統(tǒng)間相應(yīng)關(guān)系的過程[1]，相當(dāng)于確定了用來丈量物體的尺子的長(zhǎng)度。”因此，分析系統(tǒng)的校準(zhǔn)是保證病人檢測(cè)結(jié)果可靠的基礎(chǔ)。全血細(xì)胞分析項(xiàng)目5項(xiàng)，試劑種類為溶血?jiǎng)?、稀釋液兩種。暴露在空氣中的血液分析儀使用試劑，因水分蒸發(fā)造成有效組分濃縮，也會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心已實(shí)施我國(guó)血細(xì)胞分析參考系統(tǒng)的建立[2]工作。本文就血細(xì)胞分析系統(tǒng)校準(zhǔn)周期進(jìn)行探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

日本Sysmex公司生產(chǎn)的KX-21型全自動(dòng)血液分析儀，具有定期自動(dòng)清洗與保養(yǎng)功能；校準(zhǔn)物為Sysmex SCS-1000血液校準(zhǔn)品，批號(hào)：990662。遵循《血液分析儀校準(zhǔn)要求》，對(duì)KX-21血液分析儀校準(zhǔn)允許偏差符合 WBC±15%、RBC±5%、Hb±5%、Hct±5%、Plt±15%。伯樂質(zhì)控品為美國(guó)Bio-Rad公司生產(chǎn)的LiquichekTMHematology Control中值水平血液學(xué)-21參數(shù)控制品，批號(hào)：Normal-99122。血液分析儀試劑：KX-21血液分析儀使用特康科技生產(chǎn)的“雪球”牌配套試劑，溶血?jiǎng)?、稀釋液批?hào)分別為：1001002、1002010，供全血質(zhì)控品作血細(xì)胞分析系統(tǒng)校準(zhǔn)周期測(cè)試試驗(yàn)；另取五個(gè)批次生產(chǎn)留樣試劑稀釋液/溶血?jiǎng)?：LOT-1 (0809001/0809004)、LOT-2(0902001/0905002)、LOT-3(0910005/0910005)、LOT-4(1001002/1002010)，LOT-5(1004002/1004005)分 別 對(duì) 同 一 全血質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)試。

1.2 所檢測(cè)的項(xiàng)目

儀 器 測(cè) 定 項(xiàng) 目 WBC、Lymph#、Mid#、Gran#、RBC、HGB、MCV(HCT)、PLT 八項(xiàng)指標(biāo)，使用軟件計(jì)算 參 數(shù) 為 ：Lymph% 、Mid% 、Gran% 、MCH、MCHC、RDW、MPV等。

1.3 方法

1.3 .1全血質(zhì)控品參考值范圍：伯樂中值水平質(zhì)控品參考值范圍：WBC、RBC、HGB、MCV、PLT 等指標(biāo)分別為 10.1±0.6×109/L、4.12±0.2×1012/L、128±4.0g/L、94±6fl、273±30×109/L。

1.3 .2首次檢測(cè)試驗(yàn)按說明書要求對(duì)血液分析儀進(jìn)行保養(yǎng)和寶石孔清洗，更換試劑后，參照血液分析儀校準(zhǔn)規(guī)范化的建議[3]，用全血校準(zhǔn)品對(duì)KX-21血液分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)[4]，，每間隔5d(120h)檢測(cè)同一批質(zhì)控品，重復(fù)檢測(cè)3次取均值統(tǒng)計(jì)分析；美國(guó)CLIA’88對(duì)血細(xì)胞分析的質(zhì)量要求為：WBC：靶值±15%、RBC 和 MCV 是：靶值±6%、HGB：靶值±7%、PLT：靶值±25%，以累積CV小于CLIA’88允許誤差的1/3作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[5]，連續(xù)監(jiān)測(cè)6個(gè)月。從校準(zhǔn)完畢后開始計(jì)時(shí)，至累積CV大于1/3 CLIA’88允許誤差時(shí)結(jié)束，此間隔時(shí)間作為該項(xiàng)目的校準(zhǔn)周期。

2 結(jié)果

同批號(hào)稀釋液、溶血?jiǎng)┰赟ysmex公司生產(chǎn)的KX-21血液分析儀上檢測(cè)結(jié)果歸納如下：

2.1 WBC、RBC、HGB、MCV、PLT 等五項(xiàng)測(cè)量指標(biāo)監(jiān)測(cè)到151d(33次測(cè)試)仍然處于允許值范圍，其x、SD及CV見表1。

表1 中值水平質(zhì)控品監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.2 監(jiān)測(cè)到111d Mid%為1.1%首次超出允許范圍，往后在允許值范圍上下波動(dòng)，至161d后均處于允許值范圍之外。

2.3 監(jiān)測(cè)到165d PLT測(cè)定值為309×109/L首次超出允許范圍，往后5次測(cè)試又處于正常范圍，至181d后超出允許值范圍。

2.4 HGB超出允許值范圍的時(shí)間是181d，WBC和RBC監(jiān)測(cè)到191d才超出允許值范圍，而MCV監(jiān)測(cè)到191d仍然處于規(guī)定要求。

2.5 各項(xiàng)目判斷標(biāo)準(zhǔn)及校準(zhǔn)周期見表2。使用不同批次的稀釋液、溶血?jiǎng)?，用同一全血質(zhì)控品分別在KX-21血液分析儀上檢測(cè)結(jié)果見表3。

表2 各參數(shù)判斷標(biāo)準(zhǔn)及校準(zhǔn)周期

表3 不同批次試劑檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)前對(duì)KX-21血液分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，其各項(xiàng)指標(biāo)百分?jǐn)?shù)誤差均在一列范圍以內(nèi)[6]，外部校準(zhǔn)系數(shù)：HGB為100.0、HCT為100.0，內(nèi)部系數(shù)WBC為 98.9、RBC 為 100.0、HGB 為 99.3、PLT 為 98.0等。擁有自動(dòng)清洗與定期保養(yǎng)功能的血液分析儀定期校準(zhǔn)周期較長(zhǎng)。

3.2 從表 1可以看出，Mid%不穩(wěn)定，CV值21.48%，其余指標(biāo)重復(fù)測(cè)試結(jié)果穩(wěn)定性好；表2結(jié)果顯示，血液分析儀校準(zhǔn)周期較長(zhǎng)，白細(xì)胞分類校準(zhǔn)周期最短，RBC、MCV校準(zhǔn)周期較長(zhǎng)，大于191d。從表3結(jié)果表明，更換不同批次的試劑其檢測(cè)結(jié)果未發(fā)現(xiàn)超出規(guī)定范圍。值得提醒的是：由于試劑的批間差，可能會(huì)導(dǎo)致相關(guān)指標(biāo)出現(xiàn)偏離質(zhì)控范圍，溶血?jiǎng)┯绊慔GB、白細(xì)胞及其分類，稀釋液影響MCV或HCT。所以，在確立檢測(cè)系統(tǒng)的校準(zhǔn)周期時(shí)，一定要分析各種影響校準(zhǔn)周期的因素，選擇合適的校準(zhǔn)時(shí)機(jī)。

3.3 影響血細(xì)胞分析系統(tǒng)校準(zhǔn)周期的因素有：

3.3 .1不同批次的試劑：溶血?jiǎng)┡c稀釋液有效組分濃度改變，如溶血表面活性劑、與HGB相結(jié)合的成分、滲透壓等會(huì)導(dǎo)致白細(xì)胞分類、HGB、MCV等指標(biāo)的變化；試劑pH明顯改變也會(huì)引起白細(xì)胞分類、HGB、MCV等指標(biāo)不同程度的變化。

3.3 .2儀器保養(yǎng)與維護(hù)的頻次：一般而言血液分析儀均具備自動(dòng)清洗與定期保養(yǎng)功能，Sysmex公司生產(chǎn)的KX-21血液分析儀開機(jī)時(shí)將自動(dòng)進(jìn)行清洗，關(guān)機(jī)時(shí)用濃縮清洗液自動(dòng)清洗與保養(yǎng)，起到清洗計(jì)數(shù)池、寶石孔與管道的效果，防止賭孔發(fā)生，起到延長(zhǎng)校準(zhǔn)周期的作用。

3.3.3比色光源的使用壽命：使用540±2nm波長(zhǎng)的發(fā)光二極管其實(shí)際壽命一般為50000h，供電電壓不穩(wěn)定有一定影響，受溫度影響較小。

3.3 .4 關(guān)鍵部件的更換或維修：如光源、寶石孔、分血閥、吸樣針、真空泵、試劑或樣品管道等部件的更換或維修需要重新校準(zhǔn)。

3.3 .5儀器本身的漂移或壽命：儀器機(jī)械部件的磨損，電子元器件與管道系統(tǒng)的老化，直接影響儀器的使用壽命或性能指標(biāo)的漂移，一般血液分析儀使用壽命為5~8年，其使用壽命又受使用頻率和樣本量的影響。

3.3 .6校準(zhǔn)周期受儀器性能的影響：血液分析儀即使?jié)M足YY/T0653-2008血液分析儀標(biāo)準(zhǔn)，不同檔次的儀器也有一定差異，尤其是PLT重復(fù)性指標(biāo)小于8.0%，接近CLIA’88的1/3，所以，本次實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)到PLT156d超出范圍后，又回復(fù)到正常。意味著到了校準(zhǔn)時(shí)期。

3.4 本次監(jiān)測(cè)MCV較為穩(wěn)定，直到191d仍然處于允許值范圍，可能是由于質(zhì)控品紅細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)處理的原因，其形態(tài)相對(duì)穩(wěn)定。

3.5 由于KX-21血液分析儀白細(xì)胞分群采用浮動(dòng)界標(biāo)，從表3可以看出Mid%106d就出現(xiàn)異常，往后又回復(fù)正常，至111d再次出現(xiàn)異常，表明浮動(dòng)界標(biāo)存在分類的不確定性。在實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)過程中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不分類的現(xiàn)象；即使某項(xiàng)分類結(jié)果超出質(zhì)控范圍，也不主張輕易調(diào)整分類界標(biāo)或改變白細(xì)胞增益。

3.6 如果采用低值或高值質(zhì)控品，其校準(zhǔn)周期可能前移或滯后，理由是根據(jù)CLIA’88允許誤差，參考值越大允許值范圍隨之放大，檢測(cè)值越不易超出規(guī)定范圍，故選擇中值質(zhì)控品確立校準(zhǔn)周期較為合適。至于低值或高值質(zhì)控品確立校準(zhǔn)周期實(shí)驗(yàn)有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

總之，血細(xì)胞分析系統(tǒng)校準(zhǔn)周期受諸多因素影響，臨床實(shí)驗(yàn)室有3個(gè)月、6個(gè)月甚至更長(zhǎng)的校準(zhǔn)時(shí)間；無例外的情況下，至少半年校準(zhǔn)一次。確立血細(xì)胞分析系統(tǒng)校準(zhǔn)周期既能節(jié)省檢驗(yàn)工作的時(shí)間和成本，避免不必要的校準(zhǔn)，又可保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。科學(xué)地建立校準(zhǔn)周期、對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行定期校準(zhǔn)，是保證血細(xì)胞分析結(jié)果可靠性的基本要求。必須指出的是：①血細(xì)胞分析系統(tǒng)監(jiān)測(cè)到異常后，又可能回復(fù)正常；②不能忽視校準(zhǔn)品或及質(zhì)控品的質(zhì)量對(duì)校準(zhǔn)周期的影響；③當(dāng)室內(nèi)或室間質(zhì)控信息出現(xiàn)異常的趨勢(shì)或偏移，超出實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控規(guī)定的接受限，應(yīng)分析原因，采取相應(yīng)的預(yù)防糾正措施后，仍不能識(shí)別問題和糾正問題時(shí)，需重新進(jìn)行校準(zhǔn)[7]。因此，在做好“定期校準(zhǔn)監(jiān)測(cè)”工作的基礎(chǔ)上，確立適宜、有效的校準(zhǔn)周期，才不致于失控。

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