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    多項目特種蛋白復(fù)合凍干質(zhì)控品的研制

    2010-03-28 02:11:42林建軍徐成國盛小宗何燕武謝海寶
    實驗與檢驗醫(yī)學(xué) 2010年6期
    關(guān)鍵詞:凍干特種實驗室

    林建軍,徐成國,盛小宗,何燕武,謝海寶

    (浙江省寧波市象山第一人民醫(yī)院,浙江 寧波 315700)

    臨床實驗室要獲得可靠的測定結(jié)果,需要建立一個全面的質(zhì)量管理體系。其中,實驗室內(nèi)質(zhì)量控制(以下簡稱室內(nèi)質(zhì)控)是一個重要的環(huán)節(jié),而質(zhì)控品是保證質(zhì)控工作的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[1]。與液體質(zhì)控品和混合血清等相比較,凍干品穩(wěn)定性較好,便于長期保存與運輸,是開展質(zhì)控活動更理想的質(zhì)控品[2]。

    隨著特種蛋白基礎(chǔ)研究的深入和臨床治療實踐經(jīng)驗的積累,特種蛋白的檢測得到了從事腫瘤基礎(chǔ)和臨床工作者的重視,已成為臨床檢測的重要項目之一,快速準(zhǔn)確地檢測特種蛋白有重要的臨床價值。

    但目前國內(nèi)臨床實驗室特種蛋白檢測質(zhì)控品主要來自國外進(jìn)口或是國內(nèi)實驗室配置非商品化生產(chǎn)。上述質(zhì)控品存在諸多問題,比如:單一項目質(zhì)控品操作繁瑣、進(jìn)口產(chǎn)品價格昂貴、多項目水平質(zhì)控品使用成本明顯增加,在實際使用中推廣困難、非商品化生產(chǎn)的質(zhì)控品產(chǎn)品的質(zhì)量及供應(yīng)無法保證等。本研究旨在研制多項目特種蛋白復(fù)合凍干質(zhì)控品,用于對多種臨床檢測項目同時進(jìn)行質(zhì)控。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑 HITACHI 7170全自動生化分析儀 (日本,HITACHI),Bio-Rad 質(zhì)控品 (美國,Bio-Rad),Scientz-12N冷凍干燥機。

    1.2 質(zhì)控品的制備

    1.2 .1血清基質(zhì)的制備 正常人血清中每1000ml血清中加入 50%CaCl2溶液 10ml,36~37℃孵育 2~3h,4000~4500g/min,離心 5min,過濾除去血漿中的纖維蛋白,制得質(zhì)控品血清基質(zhì)。

    1.2 .2質(zhì)控品的制備 (1)收集日常工作中檢測出的特種蛋白高濃度、無溶血、無黃疸、無細(xì)菌污染剩余血清標(biāo)本,用國家衛(wèi)生部門認(rèn)可的方法檢測標(biāo)本攜帶傳染病的可能性。檢測項目包括乙型肝炎表面抗(HBsAg)、丙型肝炎抗體、艾滋病抗體(HIV 1/2抗體)、梅毒螺旋體特異性抗體。結(jié)果均為陰性的標(biāo)本經(jīng)56℃加熱10h滅活,離心或過濾去沉淀,-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。特種蛋白質(zhì)控品包括下列檢測項目:載脂蛋白A1(Apo-A1)、載脂蛋白B(ApoB)、前白蛋白(PA)、β2微球蛋白(β2-MG)、IgG、IgA、IgM、補體 C3、補體C4、類風(fēng)濕因子(RF)、抗鏈球菌溶血素O(ASO)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)。(2)正常人血清中加入不同濃度的特種蛋白陽性血清調(diào)整至合適的濃度(水平1和水平2),并加入0.5%疊氮鈉作為防腐劑和穩(wěn)定劑溫和混勻。精密分裝貼簽后低溫真空干燥。所得凍干質(zhì)控血清取出后立即加蓋封口,2~8℃保存?zhèn)溆?。制得低濃度指控?水平1)和高濃度質(zhì)控品(水平2)。使用前加入域分裝時同體積的去離子水復(fù)溶。

    1.3 定值 HITACHI 7170全自動生化分析系統(tǒng)校準(zhǔn)(采用可溯源至CRM470的校準(zhǔn)品)在儀器系統(tǒng)保養(yǎng)校正、項目試劑、定標(biāo)試劑均為新批號重新定標(biāo)及熟練操作人員的最佳工作條件下,隨機標(biāo)本檢測20次以上,統(tǒng)計分析得出平均值和期望區(qū)間值。

    1.4 穩(wěn)定性檢測 質(zhì)控品制備后于2~8℃保存,每個工作日隨機標(biāo)本檢測一次,統(tǒng)計分析檢測結(jié)果在常規(guī)條件下的變異情況。與進(jìn)口伯樂質(zhì)控品進(jìn)行比較,并作統(tǒng)計學(xué)分析。

    1.5 瓶間差檢測 取10瓶質(zhì)控品,每瓶測試1次,計算測試結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差S1;另取上述質(zhì)控品中的一瓶連續(xù)測試10次,計算測試結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差S2;計算瓶間CV%,一般瓶間CV(%)≤5%。

    2 結(jié)果

    2.1 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品的均值(x)及批內(nèi)重復(fù)精確度見表1。

    2.2 穩(wěn)定性

    表1 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品13項目的批內(nèi)重復(fù)(CV)和均值

    自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品第一個月、第六個月 和第十二個月結(jié)果比較見表2、3,不同時間段結(jié)果比較均無明顯差異(P>0.05)。

    表2 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品(水平1)第1、6和12個月結(jié)果比較(n=20)

    自制質(zhì)控品與伯樂質(zhì)控品第1、6和12月變異情況比較見表4、表5,不同時間段結(jié)果比較均無明顯差異(P>0.05)。

    2.3 瓶間差

    使用上述1.4中的方法測得自制質(zhì)控品水平1瓶間CV為1.86%,水平2瓶間CV為1.57%,伯樂質(zhì)控品瓶間CV為1.55%。

    3 討論

    作為較理想的質(zhì)控品至少應(yīng)具備以下一些特性(以臨床化學(xué)質(zhì)控品為例):(1)人血清基質(zhì),分布均勻;(2)無傳染性;(3)添加劑和調(diào)制物的數(shù)量少;(4)瓶間變異?。?5)凍干品復(fù)溶后穩(wěn)定,2~8℃ 時≥24h,-20℃ 時≥20d;某些不穩(wěn)定成分(如膽紅素、ALP等)在復(fù)溶后前4 h的變異應(yīng)<2%;(6)到實驗室后的有效期應(yīng)在1年以上[1]。其中,穩(wěn)定性和瓶間差是質(zhì)控品的兩個重要性能,只有兩者據(jù)符合要求,室內(nèi)質(zhì)控品才能發(fā)揮其檢測和控制實驗室精密測定工作的作用[3]。本研究以日常工作中檢測出的特種蛋白高濃度血清為基礎(chǔ),以正常人血清為基質(zhì),調(diào)整至適當(dāng)濃度,經(jīng)精密分裝和真空冷凍干燥,自制了多項目特殊蛋白復(fù)合凍干質(zhì)控品,以達(dá)到同時對多種臨床檢測項目進(jìn)行質(zhì)控、降低醫(yī)療成本的目的。制備的質(zhì)控品定制準(zhǔn)確,批內(nèi)重復(fù)好,分裝差異僅為1.86%和

    表3 自制凍干特殊蛋白質(zhì)控品(水平2)第1、6和12個月結(jié)果比較(n=20)

    表4 自制質(zhì)控品(水平1)與伯樂質(zhì)控品13個項目變異情況比較(CV%)

    1.57 %;第1、6和12月結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),2~8℃至少可保存 12 個月,穩(wěn)定性較好;各時間段與同類進(jìn)口質(zhì)控品變異情況比較,均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),可以滿足日常室內(nèi)質(zhì)控品的要求。臨床實驗室的成本核算是一個非常現(xiàn)實的問題,特別是2006年特種蛋白的收費價格調(diào)整后,使用原廠質(zhì)控品高昂的代價更是讓一些中小型醫(yī)院的實驗室望而卻步[4]。本實驗結(jié)果表明,自制特種蛋白質(zhì)控品完全能夠滿足實驗室日常室內(nèi)質(zhì)控的要求,解決了特種蛋白質(zhì)控成本偏高的問題,為特種蛋白檢測的全面質(zhì)量控制提供了技術(shù)和經(jīng)濟(jì)上的保證。自制質(zhì)控品含有多種特種蛋白項目,使儀器分析系統(tǒng)僅使用一個質(zhì)控樣本就能達(dá)到對其不同檢測項目的質(zhì)控,克服了單項目質(zhì)控品操作繁瑣的弊端,明顯降低醫(yī)療成本,同時結(jié)合目前實驗室情況,使用方便,有利于實驗室內(nèi)質(zhì)控扎實地開展,提高檢測質(zhì)量,具有較高的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。

    表5 自制質(zhì)控品(水平2)與伯樂質(zhì)控品13個項目變異情況比較(CV%)

    [1]王治國,李小鵬.臨床檢驗定量測定室內(nèi)質(zhì)控系統(tǒng)的建立[J].檢驗醫(yī)學(xué),2004,19(1):6-7.

    [2]張 林,劉延齡.現(xiàn)代實用臨床檢驗質(zhì)量控制學(xué)[M].陜西天則出版社,1990:187-191.

    [3]任愛英,王 凡.臨床實驗室定量測定項目室內(nèi)質(zhì)控品的評價方法進(jìn)展[J].中國社區(qū)醫(yī)師,2008,10(2):97.

    [4]謝科杰,王 凱,張麗紅.特種蛋白室內(nèi)質(zhì)控品制備及應(yīng)用評價[J].檢驗醫(yī)學(xué),2009,34(5):381-383.

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