阿膠低肽不同給藥途徑的藥效學(xué)研究

付英杰，曲立生，田景振（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南市50355；.山東泰安市中醫(yī)醫(yī)院，泰安市71000）

前期研究利用酶解法等將阿膠進(jìn)行了酶解與純化制得阿膠低肽，并利用超濾法制取了不同分子量段的酶解阿膠低肽，且確定注射用阿膠低肽的安全范圍及有效范圍:分子量為1～3 kD，口服用有效范圍:分子量為＜5 kD；同時(shí)考察了有效范圍的量效關(guān)系。本研究擬通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)以證實(shí)阿膠低肽的升血、抗疲勞、免疫增強(qiáng)作用。

1 材料

1.1 儀器

一次性注射器（濟(jì)南誠(chéng)信化玻公司，規(guī)格:1、5、10 mL）；MTN-61型全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（長(zhǎng)春市曼特諾醫(yī)療器械有限公司）。

1.2 試藥

2%鹽酸苯肼（上海試劑三廠，批號(hào):060710）以注射用水配制成2%濃度后過0.22 μm微孔濾膜除菌；氫化可的松注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào):0411081）；阿膠（山東東阿阿膠股份有限公司，批號(hào):070367）；注射用分子量（MWt.）1～3 kD阿膠低肽（低肽含量:0.371g·mL-1）、ig用MWt.＜5kD阿膠低肽（低肽含量:0.042 g·mL-1）均由筆者自制。

1.3 動(dòng)物

家兔32只，♀♂兼用，體質(zhì)量2～2.5 kg；昆明種小鼠90只，♂，體質(zhì)量18～22 g，均由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK（魯）20050015）。

2 方法與結(jié)果

2.1 阿膠低肽對(duì)貧血模型家兔的藥效影響

實(shí)驗(yàn)分為5組，即空白、模型、阿膠灌胃（ig，5%阿膠水溶液1.55 mL·kg-1）、低肽灌胃（ig，阿膠低肽6.25 mL·kg-1）、低肽注射（ip，注射用阿膠低肽0.70 mL·kg-1）組。家兔脊背sc 32%鹽酸苯肼（30 mg·kg-1），每5天 1次，連續(xù)注射3次，復(fù)制家兔貧血模型。復(fù)制模型成功后，每天給藥1次，連續(xù)7 d，抗凝檢測(cè)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（Hb）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）[1]。

與模型組比較，阿膠灌胃、低肽注射組Hb、RBC、WBC顯著提高（P＜0.01），低肽灌胃組對(duì)于Hb及RBC只有提升趨勢(shì)但無顯著意義（P＞0.05）；阿膠灌胃組與阿膠注射組間WBC、RBC沒有顯著差別；與阿膠灌胃組比較，阿膠注射組Hb提升更顯著。阿膠低肽在模型家兔體內(nèi)的藥效學(xué)指標(biāo)見表1。

表1 阿膠低肽在模型家兔體內(nèi)的藥效學(xué)指標(biāo)Tab 1 Pharmacodynamic indicator of low peptide of E’jiao in anemic model rabbits

2.2 阿膠低肽對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

昆明種小鼠40只均分為4組，即阿膠灌胃（ig，5%阿膠水溶液，22.5 mL·kg-1）、低肽灌胃（ig，阿膠低肽22.5 mL·kg-1）、低肽注射（ip，注射用阿膠低肽2.5 mL·kg-1）、葡萄糖灌胃（ip，葡萄糖溶液2.5 mL·kg-1）組，每天給藥1次，連續(xù)14 d。于末次給藥物30 min后，將小鼠置于水深30 cm、水溫（25±0.5）℃的水箱中游泳，鼠尾根部負(fù)荷自身5%體質(zhì)量的鉛皮。記錄小鼠力竭時(shí)間（s）[2]，以判斷抗疲勞能力。結(jié)果表明，各組均具有一定的抗疲勞作用趨勢(shì)，但無顯著差異（P＞0.05）。小鼠負(fù)重游泳測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 小鼠負(fù)重游泳測(cè)定結(jié)果Tab 2 The results of load swimming test of mice

2.3 阿膠低肽對(duì)免疫低下模型小鼠脾重指數(shù)的影響

小鼠ip氫化可的松（25 mg·kg-1），每天1次，連續(xù)7d，以復(fù)制免疫低下小鼠模型。實(shí)驗(yàn)分為5組，即空白、模型、阿膠灌胃（ig，5%阿膠水溶液，22.5 mL·kg-1）、低肽灌胃（ig，阿膠低肽22.5 mL·kg-1）、低肽注射（ip，注射用阿膠低肽2.5 mL·kg-1）組。開始復(fù)制模型第2天起，各組分別給藥，每天1次，連續(xù)6 d。給藥后測(cè)定脾重和脾重指數(shù)（脾重指數(shù)＝脾重/體質(zhì)量×100%[3]）。與模型組比較，阿膠灌胃、低肽灌胃、低肽注射組脾指數(shù)顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果表明，阿膠各種給藥方式均有一定的免疫增強(qiáng)作用，但各種方法制取的阿膠制劑間沒有差別。小鼠脾重指數(shù)測(cè)定結(jié)果見表3。

3 討論

在家兔藥效學(xué)指標(biāo)測(cè)定中，與模型組比較，阿膠灌胃與低肽注射組均有良好的提升Hb、RBC、WBC的作用，低肽灌胃組對(duì)于Hb及RBC只有提升趨勢(shì)但無顯著意義。阿膠灌胃組與低肽注射組間WBC、RBC沒有顯著差別，但低肽注射組的Hb提升效果比阿膠灌胃組高；與空白組比較，阿膠灌胃組與低肽注射組均可以將Hb、WBC提升至正常水平，但均不能在短期內(nèi)將RBC提升至正常水平，低肽灌胃組在短期內(nèi)生血作用較差。其原因?yàn)榈碗脑谖竷?nèi)被降解為更小的分子，故作用下降，提示口服用低肽可能會(huì)對(duì)胃腸功能較差的患者起到良好作用。

表3 小鼠脾重指數(shù)測(cè)定結(jié)果Tab 3 The results of spleen weight index measurement of mice

在小鼠負(fù)重游泳時(shí)間測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，與空白組比較，各組均有提升的趨勢(shì)，但無顯著性差異。分析原因，可能是因?yàn)榻o藥時(shí)間較長(zhǎng)（長(zhǎng)達(dá)14 d），各組小鼠體質(zhì)量均有較大幅度的提升，造成游泳時(shí)間延長(zhǎng)。另外，由于葡萄糖可以轉(zhuǎn)化為較多能量，故也可能造成空白組結(jié)果偏大。提示設(shè)計(jì)小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)時(shí)需要適當(dāng)減少給藥時(shí)間，并將空白組改為生理鹽水。該設(shè)想需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

在小鼠脾重指數(shù)測(cè)定中，與模型組對(duì)照，各組均具有顯著的對(duì)抗氫化可的松所導(dǎo)致的小鼠免疫抑制作用，但各組間無顯著性差異；與空白組比較，各組均能回復(fù)到正常水平。提示阿膠藥材、口服用低肽及注射用低肽均有一定的免疫增強(qiáng)作用。在本研究中，需要注意的是實(shí)驗(yàn)溫度控制要求較高，若溫度過低，復(fù)制模型時(shí)小鼠容易死亡。

[1]韓麗莎，張國(guó)民，楊玉梅，等.增血素口服液對(duì)苯肼致家兔溶血性貧血的影響[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，15（2）:3.

[2]謝居樂，陳菊芳.對(duì)菊參抗疲勞耐缺氧作用的研究[J].中國(guó)藥房，1995，6（2）:10.

[3]楊 卉，王 倩，齊志敏.體外免疫法制備狗脾抗結(jié)核特異性轉(zhuǎn)移因子的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2000，10（9）:18.