肝動脈移植 hUCMSCs短期對終末期肝硬化肝纖維指標(biāo)的影響

何 晶,杜永國,周 云,周貴忠,林 洪,賀東平,何秀清

(海南醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院,海南 ?？?570311)

肝纖維化發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)是肝星狀細(xì)胞的活化,活化的肝星狀細(xì)胞分泌組織金屬蛋白酶抑制劑(Tissue inhibitor of Metall-oproteinases,TIMPs)增加,抑制 MMPs的活性,導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)降解減少,使細(xì)胞外基質(zhì)在肝內(nèi)沉積。肝纖維化及肝硬化是多種慢性肝病的終末期病理表現(xiàn),傳統(tǒng)的治療手段難以從根本上修復(fù)肝臟的纖維化。各種干細(xì)胞用于治療終末期肝硬化是新的研究方向,而且臨床也取得一定的效果。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human unbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)應(yīng)用于治療終未肝病是新的研究熱點,目前尚未應(yīng)用于臨床,只有少數(shù)應(yīng)用于其他疾病的治療研究[1]。因此我們應(yīng)用 hUCMSCs治療終末期肝硬化,探討該治療方法短期內(nèi)對終末期肝硬化患者肝纖維的治療作用。

1 資料與方法

1.1 選擇 2009年1月至 2010年 2月在我科住院患者 52例,臨床診斷為肝硬化失代償期(Child B或 C級)。隨機(jī)分為兩組,一組為 hUCMSCs干細(xì)胞治療組,共 26例,均為男性,年齡 29-67歲,平均 46歲,25例為乙型肝炎肝硬化患者,1例為丙型肝炎肝硬化患者。另一組為對照組,共 26例,為常規(guī)護(hù)肝治療,其中男性 25例,女性 1例,年齡 32-65歲,平均 48.6歲,26例均為乙型肝炎肝硬化患者。所有患者診斷均符合 2000年病毒性肝炎防治方案診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.2 方法

1.2.1 hUCMSCs治療組

1.2.1.1 術(shù)前準(zhǔn)備 患者術(shù)前 1 d做碘過敏實驗,雙側(cè)腹股溝備皮。

1.2.1.2 hUCMSCs制備 由深圳北科公司提供經(jīng)提純培養(yǎng)符合要求的 hUCMSCs,hUCMSCs懸液8-10 ml,鏡下干細(xì)胞數(shù)達(dá) 1.0×107-1.0×108/ml。

1.2.1.3 動脈導(dǎo)管介入干細(xì)胞移植 在 X光透視下,經(jīng)股動脈插管至肝固有動脈,注射造影劑,觀察肝內(nèi)血管情況及有無占位性病變后,將 hUCMSCs懸液注入肝內(nèi),輸注完畢拔出導(dǎo)管,予穿刺點加壓包扎,要求患者術(shù)后 24 h內(nèi)平臥休息,插管側(cè)髖關(guān)節(jié)限制活動,進(jìn)行肝動脈導(dǎo)管治療后常規(guī)護(hù)理。26例患者手術(shù)全部成功,順利在肝動脈內(nèi)輸入 hUCMSCs。

1.2.1.4 觀察指標(biāo) 治療組在術(shù)前及術(shù)后的第 8周分別用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢查肝纖維化標(biāo)志物:HA(透明質(zhì)酸)、LN(層粘連蛋白)、PCIII(Ⅲ型前膠原)、IV-C(IV型膠原);對照組則在治療前及治療第 8周檢查肝纖維化標(biāo)志物,兩組進(jìn)行對比。

1.2.2 對照組 常規(guī)予多烯磷酯酰膽堿、甘草酸二胺等護(hù)肝治療。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,組間比較應(yīng)用獨立樣本 t檢驗,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 臨床檢驗結(jié)果比較 治療組治療兩個月前后比較 HA、LN、PCⅢ、IV-C四組標(biāo)志物變化均有顯著改善,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);對照組治療兩個月前后比較只有 HA項有顯著改善,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),LN、PCⅢ、IV-C三項指標(biāo)治療前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表 1。

表1 兩組治療 2個月肝纖維標(biāo)志物的變化 (x±s)

2.2 不良反應(yīng) 26例做干細(xì)胞移植患者未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)及并發(fā)癥,術(shù)后有 1例出現(xiàn)發(fā)熱(37.8℃),無過敏、消化道癥狀加重、肝區(qū)疼痛、出血等并發(fā)癥。

3 討 論

hUCMSCs是具有自我更新和分化能力的細(xì)胞,它的增殖及定向分化具有巨大的應(yīng)用潛能。hUCMSCs在國內(nèi)外動物試驗中均證實具有誘導(dǎo)分化為肝臟細(xì)胞的能力,并且具備肝細(xì)胞功能和作用[3-5]。研究表明,間充質(zhì)干細(xì)胞是一種多潛能干細(xì)胞,不僅支持造血系統(tǒng),還可向中胚層和外胚層來源的組織分化,在一定的實驗條件控制下可分化為肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞等[3-5]。國內(nèi)高蕾等[6]研究亦證實 hUCMSCs能夠向肝細(xì)胞分化,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的生物學(xué)特性與骨髓 MSCs非常相似,尤其是流式檢測結(jié)果更是與骨髓、臍血、胎肺等其他組織來源的 MSCs免疫表型一致[7]。

因此我們探索 hUCMSCs在晚期肝硬化患者中的抗肝纖維化作用,臨床 hUCMSCs已有部分學(xué)者應(yīng)用于治療再生障礙性貧血等研究[1]。但應(yīng)用于肝病的治療尚無報道,hUCMSCs用于治療終末期肝病具有無法比擬的優(yōu)勢,其來源廣泛,采集方便,無倫理學(xué)問題等,因此,我們應(yīng)用 hUCMSCs治療終末期肝硬化,觀察 hUCMSCs短期治療對終末期肝硬化的肝纖維化標(biāo)志物的影響,間接了解 hUCMSCs肝移植治療肝纖維效果。

hUCMSCs治療肝纖維化的具體機(jī)制尚不清楚,當(dāng)前推測主要有以下幾個方面:(1)hUCMSCs分化形成正常肝細(xì)胞,補(bǔ)充肝細(xì)胞數(shù)量,改善肝功能,維持人體正常肝臟功能(約需 2.5×1010個肝細(xì)胞)。在肝纖維化特別是肝硬化時,因過量纖維結(jié)締組織增生擠壓,正常功能的肝細(xì)胞數(shù)量大大減少,hUCMSCs通過體外誘導(dǎo)然后輸注體內(nèi),可隨循環(huán)植入肝臟,增殖分化成肝細(xì)胞,從而改善肝功能[8]。(2)hUCMSCs分泌細(xì)胞因子、生長因子,抑制炎癥反應(yīng)。hUCMSCs分泌多種細(xì)胞因子和生長因子,如干細(xì)胞生長因子(HGF)等。HGF不但具有誘導(dǎo) hUCMSCs自身向肝細(xì)胞分化的功能,還抑制轉(zhuǎn)化生長因子 β1(TGF-β1)產(chǎn)生,阻止肝臟纖維化,抗肝細(xì)胞凋亡的活性,從而提高存活率[9-10]?？傊?在肝損傷環(huán)境中,hUCMSCs分泌不同水平的細(xì)胞因子相互影響,表現(xiàn)出抗纖維化、抗炎癥反應(yīng)作用,目前機(jī)理尚未明確,人們?nèi)栽谔接懼小?/p>

從我們所進(jìn)行的治療觀察中可見,用 hUCMSCs移植治療組與常規(guī)治療對照組的比較可見,治療組的 HA、LN、PCⅢ、IV-C四項肝纖維化標(biāo)志物,治療兩個月前后對比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);而對照組治療兩個月前后對比只有 HA差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),LN、PCⅢ、IV-C三項肝纖維化標(biāo)志物治療前后對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示用 hUCMSCs肝動脈移植治療終末期肝硬化能顯著改善肝臟纖維化,有積極的治療意義。hUCMSCs移植治療肝纖維化短期療效是肯定的,我們在移植患者的治療過程中未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)及并發(fā)癥。

晚期肝病的治療一直以來沒有令人滿意的進(jìn)展,臨床上主要以保肝對癥處理及預(yù)防并發(fā)癥為主,尤其是終末期肝病的治療總體效果不甚理想。近年來肝移植已成為終末期肝病最理想的治療選擇,但是供體的緊缺、移植后的免疫排斥反應(yīng)以及高額的治療費用限制了其臨床應(yīng)用。重癥肝病患者進(jìn)行骨髓干細(xì)胞移植治療過程,因病情限制穿刺及短期不能反復(fù)多次穿刺,影響其持續(xù)治療。終末期肝硬化的治療需要連續(xù)性、短期內(nèi)多次的干細(xì)胞移植治療方能達(dá)到較佳效果。而 hUCMSCs功能作用類似骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,用于治療終末期肝硬化的治療不存在這些問題,因此成為一個新的研究熱點,并已經(jīng)引起廣泛關(guān)注。

由于我們進(jìn)行研究的是短期 hUCMSCs移植治療肝纖維的作用,遠(yuǎn)期效果尚不清楚,需要我們進(jìn)一步的研究觀察。

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