USP對(duì)無(wú)菌檢驗(yàn)隔離器驗(yàn)證的技術(shù)要求

高海燕 丁恩峰 趙麗雅 張文英

(1. 石藥集團(tuán)恩必普藥業(yè)有限公司；2. 英國(guó)施達(dá)化學(xué)集團(tuán)公司中國(guó)代表處，河北石家莊 050031)

無(wú)菌藥品制造是涉及多學(xué)科、多工種的復(fù)雜制藥技術(shù)。其中，無(wú)菌檢測(cè)是評(píng)估產(chǎn)品是否符合無(wú)菌要求的關(guān)鍵手段。由于檢測(cè)條件的限制和人員操作技術(shù)的欠缺，無(wú)菌檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性受到很多質(zhì)疑。Isolator技術(shù)是國(guó)際上流行的無(wú)菌檢測(cè)保障手段，對(duì)于確保無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性具有重要意義。

在19世紀(jì)80年代中期，人類就開(kāi)始使用隔離器（isolator）來(lái)建立一個(gè)無(wú)菌檢驗(yàn)工作環(huán)境。隔離器可以通過(guò)密封的方法或者采用過(guò)濾除菌空氣保持正壓的方法，創(chuàng)造一個(gè)無(wú)菌的環(huán)境。當(dāng)隔離器處于密閉狀態(tài)時(shí)，僅僅能夠在隔離器內(nèi)部或者通過(guò)一個(gè)特殊的快速傳遞倉(cāng)來(lái)傳遞物品；當(dāng)隔離器打開(kāi)時(shí)，允許通過(guò)一個(gè)特殊設(shè)計(jì)并經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的可避免污染物進(jìn)入的開(kāi)口遞出物品。隔離器一般采用柔軟的塑料（例如：聚氯乙烯）、硬塑料、玻璃或不銹鋼來(lái)制造。

由于隔離器（isolator）系統(tǒng)從根本上避免了分析人員與物品的直接接觸，因此在無(wú)菌檢驗(yàn)時(shí)可以避免被檢驗(yàn)物品和輔助設(shè)備被污染。當(dāng)隔離器內(nèi)部與外部環(huán)境完全隔離時(shí)，隔離器內(nèi)部的物品是在無(wú)菌條件下進(jìn)行傳遞的。操作者穿著半身衣在隔離器內(nèi)部進(jìn)行無(wú)菌操作。半身衣是連接在隔離器墻體上的柔軟的部分，隔離器內(nèi)部有足夠的空間允許操作者穿著半身衣在隔離器內(nèi)部進(jìn)行操作；當(dāng)然，操作者也可以通過(guò)連接在隔離器璧體上的袖子和手套進(jìn)行操作。在使用隔離器的情況下，不要求操作者穿著特殊的潔凈服進(jìn)行操作，操作者穿著標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室服裝進(jìn)行操作就足夠了。為確保隔離器內(nèi)部無(wú)菌，一般使用殺孢子化學(xué)試劑對(duì)隔離器內(nèi)部滅菌來(lái)殺死全部活的生物。

1 隔離器的類別和使用范圍

隔離器系統(tǒng)（Isolator system）是無(wú)菌制藥領(lǐng)域的關(guān)鍵設(shè)備。隔離器系統(tǒng)最早從二十世紀(jì)八十年代開(kāi)始使用以來(lái)，逐漸完善和發(fā)展。在近十年中，獲得長(zhǎng)足技術(shù)進(jìn)步。在2002年5月，USP微生物方面的開(kāi)放會(huì)議中，僅有兩項(xiàng)無(wú)菌技術(shù)被冠予“高級(jí)的（advanced）”名號(hào)來(lái)進(jìn)行討論：隔離器技術(shù)（Isolator technology）和吹-填-封技術(shù)（Blow-fill-seal technology）。由此可見(jiàn)，隔離器技術(shù)在無(wú)菌制藥領(lǐng)域的地位。

目前，在無(wú)菌制藥領(lǐng)域中，主要有如下幾種隔離器在使用，分別是無(wú)菌取樣隔離器、無(wú)菌分裝隔離器，無(wú)菌檢驗(yàn)隔離器等。隨著隔離器技術(shù)的發(fā)展和完善，這項(xiàng)技術(shù)必將在無(wú)菌制藥行業(yè)的更多環(huán)節(jié)使用。另外，在和制藥行業(yè)相關(guān)的教學(xué)環(huán)節(jié)和科研環(huán)節(jié)，隔離器也在逐漸被采用。圖1展示了隔離器的目前使用情況和發(fā)展前景。

圖1 隔離器在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用和發(fā)展

2 隔離器的結(jié)構(gòu)和設(shè)計(jì)

2.1 空氣處理系統(tǒng)

用于無(wú)菌檢驗(yàn)的隔離器需要配備除菌過(guò)濾器（要求使用HEPA）。靜態(tài)時(shí)，要求隔離器內(nèi)部塵埃粒子項(xiàng)目符合美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209E的100級(jí)空氣質(zhì)量要求。動(dòng)態(tài)時(shí)，不要求隔離器內(nèi)部符合100級(jí)空氣質(zhì)量要求，也不要求隔離器內(nèi)部的空氣流速或者換氣次數(shù)達(dá)到某標(biāo)準(zhǔn)。隔離器系統(tǒng)是能夠防止泄漏的，然而，它不是通常意義上的防止隔離器與外界環(huán)境進(jìn)行空氣交換。當(dāng)與外界環(huán)境直接相連的門(mén)打開(kāi)時(shí)，隔離器內(nèi)部的正壓保證隔離器內(nèi)部的無(wú)菌環(huán)境不被污染。用于無(wú)菌檢驗(yàn)的隔離器內(nèi)部空氣流可以是單向流或者湍流。

2.2 傳遞接口及傳遞門(mén)

隔離器有一個(gè)附屬的“傳遞通路”殺菌器，通過(guò)傳輸通道殺菌器可以直接將無(wú)菌的培養(yǎng)基、無(wú)菌的稀釋液、無(wú)菌的裝備等傳遞進(jìn)隔離器系統(tǒng)。一般設(shè)計(jì)成快速傳遞倉(cāng)或門(mén)（RTP=rapid transfer port），通過(guò)快速傳遞倉(cāng)或門(mén)可以把兩個(gè)隔離器彼此相連，無(wú)菌的物品就能夠從一個(gè)隔離器傳遞到另一個(gè)隔離器。通過(guò)快速傳遞倉(cāng)，兩個(gè)隔離器或者一個(gè)隔離器和一個(gè)容器就可以在普通環(huán)境中連接。通過(guò)密封圈或法蘭，將傳遞倉(cāng)的非無(wú)菌表面連接。用墊圈壓緊來(lái)保證氣密性，避免微生物進(jìn)入。

當(dāng)兩個(gè)傳遞倉(cāng)法蘭連接形成一個(gè)密封通道時(shí)，存在一個(gè)狹長(zhǎng)的墊圈帶，這個(gè)部位可能存在微生物污染。因此一旦連接完，在使用傳遞倉(cāng)傳遞物品之前，必須立即用殺孢子殺菌劑對(duì)墊圈暴露部分進(jìn)行處理。并且在傳遞物品時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意無(wú)菌操作技巧的運(yùn)用，避免物品或手套接觸墊圈表面。

將墊圈裝配在法蘭上時(shí)，應(yīng)當(dāng)按照傳遞倉(cāng)生產(chǎn)商的建議進(jìn)行預(yù)防性的維護(hù)和潤(rùn)滑。傳遞倉(cāng)墊圈應(yīng)當(dāng)按照生產(chǎn)商建議的要求定期更換并且定期檢查，破損的墊圈不能夠保證真正的密封。

3 隔離器安裝位置的選擇

用于無(wú)菌檢驗(yàn)的隔離器不需要安裝在潔凈區(qū)，但是安裝在一個(gè)限制非授權(quán)人員進(jìn)入的區(qū)域仍然是重要的。安裝時(shí)，應(yīng)當(dāng)使隔離器周圍有足夠的空間，以便于移動(dòng)隔離器，傳遞物料，以及通常的維護(hù)。隔離器所在的房間不要求進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)。

隔離器房間溫度和濕度對(duì)于操作者的安全和舒適是重要的，溫濕度對(duì)于除菌和凈化技術(shù)的影響效果也很關(guān)鍵。如果隔離器位于空氣補(bǔ)給口的氣流通道中，當(dāng)隔離器采用蒸汽滅菌時(shí)，空氣氣流會(huì)使隔離器個(gè)別部位溫度較低形成冷凝水。當(dāng)采用對(duì)溫度敏感的滅菌方法時(shí)，隔離器所處房間的溫度應(yīng)當(dāng)是均一的。

4 隔離器和傳統(tǒng)潔凈技術(shù)的比較

無(wú)菌隔離器系統(tǒng)和傳統(tǒng)潔凈技術(shù)比較，具有明顯的優(yōu)勢(shì)。請(qǐng)參見(jiàn)下表：

無(wú)菌隔離系統(tǒng)與傳統(tǒng)潔凈技術(shù)的對(duì)比

當(dāng)然，采用無(wú)菌隔離器系統(tǒng)進(jìn)行無(wú)菌生產(chǎn)和無(wú)菌檢驗(yàn)，首次固定資產(chǎn)投資較大，在驗(yàn)證投入和技術(shù)維護(hù)方面需要較大精力和資金。

5 隔離器系統(tǒng)的驗(yàn)證

無(wú)菌檢驗(yàn)合格與否是產(chǎn)品放行的前提，在進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)之前，隔離器系統(tǒng)的驗(yàn)證必須完成。為了核實(shí)隔離器及其輔助設(shè)備能夠用于進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)，隔離器系統(tǒng)的驗(yàn)證可以分成三個(gè)部分：安裝確認(rèn)（IQ）、運(yùn)行確認(rèn)（OQ）、性能確認(rèn)（PQ）。在無(wú)菌檢驗(yàn)隔離器系統(tǒng)驗(yàn)證過(guò)程中，應(yīng)當(dāng)考慮到下面建議：在驗(yàn)證程序中，對(duì)特定階段（例如：IQ、OQ、PQ）而言，測(cè)試功能項(xiàng)目在那個(gè)階段進(jìn)行就不是關(guān)鍵的。只要在隔離器用于檢測(cè)前，隔離器的功能已經(jīng)被驗(yàn)證并且有書(shū)面記錄就可以了。

5.1 安裝確認(rèn)（IQ）

IQ階段包括隔離器系統(tǒng)詳細(xì)的外觀描述，例如：隔離器尺寸、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、所用的材料。關(guān)于接觸面和傳遞系統(tǒng)，要清晰的畫(huà)圖并標(biāo)注尺寸。設(shè)計(jì)的隔離器是否符合使用的規(guī)格需要被核實(shí)，例如：空氣補(bǔ)給、真空、外部排氣、溫濕度控制功能等。其他與隔離器系統(tǒng)一起使用的設(shè)備也要詳細(xì)描述；任何設(shè)計(jì)規(guī)格的修訂都應(yīng)當(dāng)詳細(xì)描述。設(shè)備指南和復(fù)印件應(yīng)當(dāng)編成目錄并保存，在需要的時(shí)候，操作者可以得到并重新查閱。一旦設(shè)計(jì)規(guī)格符合性被確認(rèn)，所有的圖紙、方法和設(shè)備圖要編成目錄，完善保存并能夠重新得到。

所有的文檔應(yīng)重新被審閱，便于核實(shí)能夠反映出安裝系統(tǒng)的關(guān)鍵屬性要求。這樣就建立了符合隔離器系統(tǒng)設(shè)計(jì)規(guī)格和安裝要求的技術(shù)基礎(chǔ)。

在故障模式下或高風(fēng)險(xiǎn)情況下進(jìn)行分析時(shí)，可能導(dǎo)致試驗(yàn)失敗的潛在的過(guò)程控制問(wèn)題和設(shè)備問(wèn)題可能被發(fā)現(xiàn)，這些問(wèn)題應(yīng)當(dāng)進(jìn)行核實(shí)并記錄在文件中。如果有必要，系統(tǒng)可以被修改以便將失敗的風(fēng)險(xiǎn)降到最低點(diǎn)，并且應(yīng)該建立關(guān)鍵點(diǎn)的控制方法。

IQ 的結(jié)果應(yīng)進(jìn)行匯總形成報(bào)告，報(bào)告應(yīng)包括以下內(nèi)容：

設(shè)備：設(shè)備應(yīng)符合設(shè)計(jì)規(guī)格并被列表記錄。IQ報(bào)告應(yīng)核實(shí)：符合設(shè)計(jì)規(guī)格的設(shè)備被接收，并且按照生產(chǎn)廠商的要求進(jìn)行安裝。

結(jié)構(gòu)材質(zhì)：隔離器系統(tǒng)關(guān)鍵部位的結(jié)構(gòu)材質(zhì)經(jīng)檢測(cè)是符合設(shè)計(jì)要求的。應(yīng)該核實(shí)隔離器材質(zhì)的殺菌方法兼容性。

儀表：系統(tǒng)儀表按照它們實(shí)際的校驗(yàn)狀態(tài)來(lái)列表記錄。

設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)：所有操作功能，例如：在操作手冊(cè)、流程、儀器圖表中指明的功能，都應(yīng)當(dāng)被核實(shí)能夠執(zhí)行并且符合規(guī)格要求。隔離器系統(tǒng)和其他系統(tǒng)的所有連接部分應(yīng)進(jìn)行審核，其功能應(yīng)被核實(shí)并符合設(shè)計(jì)要求。

過(guò)濾器：HEPA過(guò)濾器和其他微生物截留過(guò)濾器的測(cè)試和證書(shū)應(yīng)該存檔；測(cè)試結(jié)果和證書(shū)復(fù)印件應(yīng)包括在IQ報(bào)告中。核對(duì)采購(gòu)合同，核實(shí)空氣過(guò)濾系統(tǒng)是否符合規(guī)格要求。

計(jì)算機(jī)軟件：所有的和隔離器系統(tǒng)有關(guān)系的計(jì)算機(jī)軟件列出名稱、規(guī)格、文檔版本號(hào)碼。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)盤(pán)被檢查是否貼簽并安全保存。

5.2 運(yùn)行確認(rèn)（OQ）

運(yùn)行確認(rèn)階段將驗(yàn)證隔離器系統(tǒng)的運(yùn)行是否符合設(shè)計(jì)的功能要求。

運(yùn)行性能檢查：這個(gè)試驗(yàn)核實(shí)所有的警報(bào)和警報(bào)的功能是否符合說(shuō)明書(shū)要求。系統(tǒng)所有設(shè)置點(diǎn)和可調(diào)整的參數(shù)都應(yīng)當(dāng)被核實(shí)是否符合規(guī)定的要求。

隔離器完整性檢測(cè)：在通常的操作條件下，隔離器應(yīng)保持完整性。在隔離器裝載物品并使用化學(xué)殺菌劑滅菌前，一個(gè)泄露試驗(yàn)可以證明隔離器符合廠家說(shuō)明書(shū)要求并且是安全的。為了避免外界污染，隔離器通常在20-50Pa正壓下進(jìn)行操作。如果隔離器系統(tǒng)要求一個(gè)恒定的正壓，驗(yàn)證過(guò)程中必須核實(shí)：操作時(shí)的壓力設(shè)置值能夠維持恒定的正壓并且可以控制壓力數(shù)值。

滅菌周期確認(rèn)：執(zhí)行一個(gè)滅菌周期，以便核實(shí)操作的實(shí)際數(shù)值與滅菌周期的各個(gè)步驟情況和設(shè)置數(shù)值一致性。

可以采用幾種不同的滅菌方法來(lái)殺死隔離器和輔助系統(tǒng)的微生物?？梢杂糜诟綦x器滅菌的化學(xué)試劑包括：過(guò)氧乙酸、二氧化氯、臭氧、過(guò)氧化氫，不同的試劑有不同的使用條件和過(guò)程控制要求。選定的滅菌方法應(yīng)符合廠家的操作要求，并且在使用規(guī)程中對(duì)這些方法進(jìn)行詳細(xì)描述是十分關(guān)鍵的。使用過(guò)氧化氫蒸汽滅菌時(shí)，隔離器房間的溫度和濕度的控制是關(guān)鍵的。隔離器內(nèi)部的溫度也是重要的，尤其對(duì)使用過(guò)氧化氫蒸汽滅菌過(guò)程中的影響是非常重要的，關(guān)鍵在于保持過(guò)氧化氫的濃度，避免低于過(guò)氧化氫的冷凝點(diǎn)。一些化學(xué)試劑，例如二氧化氯和臭氧，要求在滅菌前預(yù)先增加隔離器的濕度。如果采用對(duì)濕度有較高的要求的滅菌方法，在OQ中，隔離器系統(tǒng)控制濕度的能力必須被核實(shí)。

滅菌劑的濃度和濃度分布情況也是重要的。當(dāng)滅菌劑以氣態(tài)或蒸汽狀態(tài)存在時(shí)，它的濃度可以通過(guò)化學(xué)指示劑、光譜方法或電子傳感器檢測(cè)。滅菌劑分布情況也可以使用化學(xué)指示劑測(cè)量。

采用滅菌劑在氣態(tài)或蒸汽的狀態(tài)下進(jìn)行滅菌時(shí)，要求隔離器內(nèi)部使用風(fēng)機(jī)來(lái)均勻分布滅菌劑。風(fēng)機(jī)的位置和方向可以進(jìn)行調(diào)節(jié)以保證適宜的氣流分布。由于架子、設(shè)備、手套、袖子裝置和半身衣等能夠影響氣流分配模式，必須對(duì)隔離器滿載狀態(tài)下的氣流分布進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)物品的擺放情況進(jìn)行詳細(xì)描述并以書(shū)面形式記錄。圖2就是OQ末期滿載狀態(tài)下對(duì)isolator進(jìn)行滅菌檢測(cè)的情況。

圖2 在OQ過(guò)程中對(duì)隔離器進(jìn)行滅菌檢測(cè)的狀況

有時(shí)使用較小的傳遞隔離器作為便攜式表面滅菌器，待驗(yàn)物品和輔助用具通過(guò)傳遞倉(cāng)進(jìn)入隔離器之前，這些物品和用具在便攜式表面隔離器中進(jìn)行化學(xué)滅菌。在OQ過(guò)程中，應(yīng)制定出便攜式表面滅菌器中物品和用具的擺放情況，審核擺放圖并記錄在OQ上。應(yīng)該注意：化學(xué)滅菌劑作用在設(shè)備表面，因此，一些被遮蓋的設(shè)備表面能夠殘留微生物并存活。

當(dāng)達(dá)到殺菌劑作用時(shí)間后，可以使用通過(guò)除菌裝置的新鮮空氣或其他方式處理過(guò)的新鮮空氣將殺菌劑從隔離器中移走。通過(guò)一個(gè)向外開(kāi)放的通道，氣體通過(guò)排風(fēng)口排入大氣；或者通過(guò)一個(gè)密閉的通道，在通道中使用一個(gè)殺菌裝置移走并破壞滅菌劑。如果使用一個(gè)向外開(kāi)放的排風(fēng)通道，排放系統(tǒng)的氣流和安全性應(yīng)當(dāng)被檢測(cè)。

滅菌周期的研究—當(dāng)OQ完成后，進(jìn)行滅菌周期的研究以便建立日常滅菌控制過(guò)程必要的參數(shù)。一些普遍使用在工業(yè)中的無(wú)菌工藝驗(yàn)證的方法是可行的，例如：控制生物負(fù)荷量和過(guò)度殺滅法。滅菌工藝應(yīng)該進(jìn)行生物指示劑挑戰(zhàn)試驗(yàn)。生物指示劑的孢子數(shù)和耐熱性是已知的。應(yīng)該盡量獲得生物指示劑真實(shí)的D值，從生物指示劑供應(yīng)商處獲得D值是可以接受的。如果不可能獲得準(zhǔn)確的D值，同時(shí)無(wú)法獲得滅菌劑濃度時(shí)，可以使用半滅菌周期的方法對(duì)滅菌周期進(jìn)行研究和確認(rèn)。

5.3 性能確認(rèn)（PQ）

性能確認(rèn)（PQ）是核實(shí)隔離器系統(tǒng)的功能是否符合操作者的要求。PQ過(guò)程完成后，如果可能的話，滅菌周期的有效性和排出口的滅菌劑應(yīng)該被檢測(cè)。所有的PQ過(guò)程的數(shù)據(jù)應(yīng)該被統(tǒng)計(jì)，分析和存檔。

清潔確認(rèn)—在通常情況下，對(duì)于無(wú)菌檢驗(yàn)來(lái)說(shuō)，清潔不是關(guān)鍵的，但是，殘留的產(chǎn)品可能會(huì)對(duì)檢驗(yàn)有影響，有殺菌效果產(chǎn)品的殘留對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響尤其顯著，在檢測(cè)低水平污染時(shí)，這些殘留的物質(zhì)會(huì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生影響。由于粉末容易擴(kuò)散，殺菌性粉末產(chǎn)品的殘留對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響是重要的。對(duì)于無(wú)菌檢驗(yàn)隔離器系統(tǒng)和操作者的要求來(lái)說(shuō)，沒(méi)有肉眼可見(jiàn)污染這種清洗水平是合適的。清潔方法、周期、設(shè)備和清潔隔離器中所用的材料應(yīng)該記錄在文件中。

無(wú)菌驗(yàn)證—隔離器內(nèi)表面、隔離器內(nèi)的設(shè)備、拿進(jìn)隔離器的各種物料都應(yīng)當(dāng)去除微生物。隔離器表面、無(wú)菌檢驗(yàn)設(shè)備、檢驗(yàn)物品的滅菌和產(chǎn)品接觸部位或者產(chǎn)品藥物成分接觸部位的滅菌是不同的。隔離器滅菌可以用過(guò)度滅菌的log降低值來(lái)評(píng)估。如果超過(guò)滅菌周期，無(wú)菌保證水平不再被確定。隔離器滅菌操作完成之后，通過(guò)空氣過(guò)濾系統(tǒng)的維持，良好的物品傳遞技術(shù)的采用，更重要的是，經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理的隔離器手套完整性的保持，隔離器的無(wú)菌性可以被保證。

通過(guò)陰性分?jǐn)?shù)法或者過(guò)度殺滅法可以證實(shí)用于隔離器、試驗(yàn)物品、無(wú)菌檢驗(yàn)用設(shè)備的滅菌方法可以使某種合適的、高抗性的生物指示劑來(lái)證實(shí)。過(guò)度殺滅分析法應(yīng)該采用每單位104孢子數(shù)的生物指示劑，而陰性分?jǐn)?shù)法應(yīng)該采用每單位孢子數(shù)大于等于105的生物指示劑。使用足夠數(shù)量的生物指示劑進(jìn)行試驗(yàn)可以從統(tǒng)計(jì)學(xué)上證明滅菌效果是可以再現(xiàn)的以及滅菌劑的分布是合適的。隔離器內(nèi)設(shè)備和物品滿載時(shí)，需要用更多的指示劑進(jìn)行試驗(yàn)。因此，沒(méi)有一個(gè)或者更多的足夠量的傳感器來(lái)測(cè)量殺菌劑的濃度時(shí)，增加生物指示劑的放置是可以考慮的。在連續(xù)三次滅菌試驗(yàn)中，六個(gè)log降的殺菌能力試驗(yàn)結(jié)果可以證明滅菌有效性。

操作者應(yīng)該建立隔離器再次滅菌的周期。這個(gè)周期可以是短短的幾天，也可以是幾周的時(shí)間，建立的依據(jù)是隔離器系統(tǒng)的無(wú)菌保持能力。

6 物料包裝完整性確認(rèn)

一些材料對(duì)殺菌劑有影響，這些材料能抑制微生物的生長(zhǎng)。我們關(guān)注的是殺菌劑在產(chǎn)品包裝上的穿透能力，在一些輔助設(shè)施，例如：過(guò)濾裝置和管道的穿透力、在一些能夠和產(chǎn)品、培養(yǎng)基、無(wú)菌試驗(yàn)的稀釋劑接觸的材料上的穿透力。在滅菌過(guò)程中，操作者有責(zé)任核實(shí)包裝物、培養(yǎng)基、輔助物品在被批準(zhǔn)使用的滅菌過(guò)程中沒(méi)有受到影響。帶旋轉(zhuǎn)帽的管狀容器、膠塞密封的小瓶、卷曲的褶皺已經(jīng)被證明能夠降低殺菌劑的穿透力。金屬箔包裝并且密封的容器能夠防止殺菌劑的進(jìn)入；然而，這些情況也能夠?qū)е乱恍┍砻娌槐粶缇?/p>

在多數(shù)情況下，在進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)之前，操作者使用殺菌劑處理產(chǎn)品包裝表面來(lái)減少進(jìn)入隔離器物品的生物負(fù)荷量。操作者有責(zé)任通過(guò)驗(yàn)證證明：使用殺菌劑處理產(chǎn)品包裝這個(gè)過(guò)程，存在于產(chǎn)品內(nèi)部的低水平的微生物污染沒(méi)有受到殺菌劑的影響，不會(huì)影響到檢驗(yàn)的檢出限度。建議用化學(xué)和微生物試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)包裝物對(duì)污染的抵制能力。經(jīng)過(guò)隔離器全部的滅菌過(guò)程后，殺菌劑對(duì)于細(xì)菌和真菌的抑制情況的驗(yàn)證需要進(jìn)行。對(duì)于醫(yī)療裝置的包裝、藥品的包裝和密封系統(tǒng)包裝的要求都是一致的。

驗(yàn)證研究可以確定，不論無(wú)菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基還是環(huán)境控制用的培養(yǎng)基，是否符合在無(wú)菌檢驗(yàn)時(shí)的需氧菌、厭氧菌、真菌的生長(zhǎng)促進(jìn)試驗(yàn)。

7 隔離器內(nèi)部無(wú)菌環(huán)境的維持

在一個(gè)無(wú)菌周期內(nèi)，隔離器系統(tǒng)保持內(nèi)部環(huán)境無(wú)菌的能力必須被驗(yàn)證。隔離器系統(tǒng)出現(xiàn)故障或者隔離器內(nèi)部的偶然污染情況下的微生物必須被檢測(cè)。微生物檢測(cè)通常包括一個(gè)例行的取樣程序，它可以包括這樣的時(shí)間點(diǎn)，例如：滅菌后的第一天和無(wú)菌保持期的最后一天。驗(yàn)證方法：就是放置在隔離器中的培養(yǎng)基被證明是無(wú)菌的。

隔離器內(nèi)部可以使用接觸碟監(jiān)控規(guī)則表面，或者使用棉簽擦拭監(jiān)控不規(guī)則表面。然而，因?yàn)榕囵B(yǎng)基殘留會(huì)使隔離器產(chǎn)生染菌的風(fēng)險(xiǎn)，因此，這些檢測(cè)最好在檢測(cè)周期快結(jié)束時(shí)進(jìn)行。如果環(huán)境監(jiān)控和檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行，而且有培養(yǎng)基殘留，要細(xì)心地從隔離器內(nèi)部清理干凈?？諝馊雍统两稻鷻z測(cè)可以使用，但它們?cè)跈z測(cè)隔離器內(nèi)部非常低水平的污染時(shí)不是很靈敏。

最可能污染的途徑是檢驗(yàn)用具和樣品進(jìn)入隔離器的過(guò)程。驗(yàn)證所有進(jìn)入隔離器內(nèi)部的物品是無(wú)菌的是關(guān)鍵的，也應(yīng)當(dāng)定期檢查墊圈，確保其完整，避免微生物的進(jìn)入。手套和半身衣是另一個(gè)可能產(chǎn)生污染的來(lái)源。因?yàn)椴僮髡叽髦痔滋幚頍o(wú)菌檢驗(yàn)物品，所以手套是應(yīng)當(dāng)特別關(guān)注的，手套上微小的破損很難檢查出來(lái)，手套在使用時(shí)，在拉伸情況下，手套上微小的破損可以體現(xiàn)出來(lái)。特別注意：培養(yǎng)基接觸法檢測(cè)手指菌落的方法，在檢測(cè)低水平的污染時(shí)靈敏度是不足的。用0.1%的蛋白胨水溶液浸泡手套，將溶液過(guò)濾，然后將濾膜放在生長(zhǎng)培養(yǎng)基碟子上檢測(cè)，這個(gè)方法可以檢測(cè)出其他方法檢測(cè)不出的泄露。

隔離器內(nèi)部進(jìn)行連續(xù)的塵埃粒子檢測(cè)是理想情況，這樣可以快速檢測(cè)到過(guò)濾器的泄露。第二個(gè)選擇是使用便攜式的塵埃粒子檢測(cè)器進(jìn)行周期檢測(cè)。塵埃粒子檢測(cè)取樣不能對(duì)隔離器內(nèi)部的無(wú)菌環(huán)境產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)。

8 無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果的解釋

如果人員沒(méi)有直接接觸工作區(qū)，驗(yàn)證過(guò)的傳輸通道沒(méi)有破損，隔離器內(nèi)部微生物被殺死并有一個(gè)高的無(wú)菌保證水平，那么，無(wú)菌檢驗(yàn)中的假陽(yáng)性是很難出現(xiàn)的。然而，隔離器是一種機(jī)械裝置，好的無(wú)菌操作技術(shù)仍然是必須的。如果出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，只有根據(jù)USP<71>《無(wú)菌檢驗(yàn)檢測(cè)和調(diào)查》進(jìn)行徹底調(diào)查，才能得出陽(yáng)性結(jié)果無(wú)效這樣的結(jié)論。

9 人員培訓(xùn)和安全要求

因?yàn)闊o(wú)菌檢驗(yàn)操作在潔凈室進(jìn)行，需要對(duì)操作者進(jìn)行關(guān)于隔離器專門(mén)程序培訓(xùn)。所有的培訓(xùn)記錄和操作者操作的評(píng)估應(yīng)有一個(gè)單獨(dú)的記錄并且存檔。對(duì)所有進(jìn)行操作或者維護(hù)隔離器的人員進(jìn)行必要的安全培訓(xùn)是必須的。

人員使用殺菌劑的安全性必須被評(píng)估。使用殺菌劑的最近區(qū)域，應(yīng)該保存原材料的安全數(shù)據(jù)或者一個(gè)類似安全數(shù)據(jù)文件供使用參考。貯藏和安全方面的預(yù)防措施應(yīng)當(dāng)符合規(guī)定。在隔離器使用之前，應(yīng)該對(duì)隔離器和所有連接的通道安全進(jìn)行檢查。

[1] USP<1208>《Sterility Testing—Validation of Isolator Systems》.

[2] USP<1116> 《Microbiological evaluation of clean rooms and other Environments》.

[3] UK《 Isolators for the aseptic preparation of Pharmaceuticals》.

[4] PIC/S recommendations to the inspectors for《Isolators used for aseptic processing and sterility testing》.

[5] PDA TR 34《Design and Validation of Isolator Systems for the manufacturing and testing of Health care Products》.