大皰性類天皰瘡皮損中Th1/Th2趨化因子及其受體的表達(dá)①

耿士玲 單士軍 吳 劍 王志華 肖 汀 高興華 陳洪鐸

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科,沈陽(yáng) 110001）

大皰性類天皰瘡皮損中Th1/Th2趨化因子及其受體的表達(dá)①

耿士玲 單士軍 吳 劍 王志華 肖 汀 高興華 陳洪鐸

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科,沈陽(yáng) 110001）

目的:研究Th1趨化因子CXCL9/MIG、CXCL10/IP-10、CXCL11/I-TAC和Th2型趨化因子CCL22/MDC及其受體CXCR3、CCR4在大皰性類天皰瘡（BP）皮損中的表達(dá)。方法:應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)30例 BP患者皮損及20例正常皮膚中CXCL9、CXCL10、CXCL11、CCL22、CXCR3和CCR4的表達(dá)。結(jié)果:BP皮損中4種趨化因子及其受體的表達(dá)均高于正常皮膚。其中,Th1趨化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11及其受體CXCR3的陽(yáng)性率分別為50%（15/30）、46.7%（14/30）、46.7%（14/30）和53.3%（16/30）,Th2趨化因子CCL22及其受體 CCR4的陽(yáng)性率分別為66.7%（20/30）、56.7%（17/30）。正常對(duì)照中 CXCL9、CXCL10、CXCL11及其受體CXCR3的陽(yáng)性率分別為10.0%（2/20）、10.0%（2/20）、15.0%（3/20）和15.0%（3/20）,CCL22及其受體CCR4的陽(yáng)性率分別為20.0%（4/20）和25.0%（5/20）。結(jié)論:Th1趨化因子 CXCL9、CXCL10、CXCL11和Th2趨化因子CCL22及其受體CXCR3和CCR4在BP皮損中表達(dá)升高,提示它們可能在BP的發(fā)病機(jī)制中起一定作用。

大皰性類天皰瘡;CXCL9;CXCL10;CXCL11;CCL22;CXCR3;CCR4

大皰性類天皰瘡（bullous pemphigoid,BP）是一種好發(fā)于老年人的自身免疫性大皰性皮膚病,其皮損中有大量的Th2淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。多種趨化因子參與了BP皮損部位Th2細(xì)胞的聚集。有研究表明[1,2],在BP皮損中,不僅有Th2趨化因子TARC及其受體CCR4的表達(dá),也有Th1趨化因子受體CXCR3的表達(dá)。我們檢測(cè)了30例BP患者皮損中的Th1趨化因子 CXCL9、CXCL10、CXCL11及其受體CXCR3和Th2趨化因子CCL22及其受體CCR4的表達(dá),探討這些趨化因子及其受體在BP發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例與標(biāo)本 30例BP患者均來(lái)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科,經(jīng)臨床、組織病理、直接和間接免疫熒光檢查確診為大皰性類天皰瘡。其中女11例,男 19例。年齡28～87歲,平均63.3±16.9歲。取材部位軀干8例,四肢22例。于常規(guī)局麻下取皮損活檢,深達(dá)皮下,用OCT復(fù)合物（Sakura,USA）包埋,凍存于-80℃的冰箱中待檢。正常對(duì)照皮膚20例,系我院整形外科非皮膚疾病的患者。女9例,男11例。年齡50～76歲,平均62.6±8.9歲。

1.1.2 試劑 兔抗人CXCL11/I-TAC多抗、山羊抗人CXCR3多抗、山羊抗人CXCL9/MIG多抗、山羊抗人CXCL10/IP-10多抗、山羊抗人CCL22/MDC多抗、山羊抗人CCR4多抗,購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology,USA。山羊抗兔IgG的SP試劑盒、兔抗山羊IgG的SP試劑盒,購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法 S-P法免疫組化染色:按SP試劑盒操作說(shuō)明。角質(zhì)形成細(xì)胞及真表皮浸潤(rùn)細(xì)胞和/或細(xì)胞間質(zhì)呈桔紅色染色為陽(yáng)性。染色結(jié)果分析以染色強(qiáng)度為準(zhǔn),無(wú)色為（-）,細(xì)胞和/或細(xì)胞間質(zhì)染成淺桔紅色為（+）、桔紅色為（++）、深桔紅色為（+++）,所有強(qiáng)度分級(jí)均由同一實(shí)驗(yàn)者操作。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用非參數(shù)檢驗(yàn),P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

BP皮損中CXCL9、CXCL10主要在真皮乳頭層表達(dá),乳頭層血管內(nèi)皮細(xì)胞也有表達(dá)（圖A1和B1）。CXCL11和CCL22主要表達(dá)于基底層細(xì)胞胞漿、細(xì)胞間質(zhì)和真皮乳頭層,尤其是淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)部位,乳頭層血管內(nèi)皮細(xì)胞也有表達(dá)（圖C1和D1）。CXCR3和CXCR4主要表達(dá)于表皮下大皰下方、真皮乳頭層浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞胞膜（圖E1和F1）。具體的表達(dá)部位見(jiàn)表1。正常對(duì)照皮膚不表達(dá)上述趨化因子及受體（圖A2-F2）。

表1 4種趨化因子及其受體在BP皮損中的表達(dá)部位（n=30）Tab.1 The expression sites of four kinds of chemokines and their recep tors in BP lesions（n=30）

在所有30例BP皮損中,14例表達(dá)CXCL11;其中3例主要表達(dá)于表皮的基底細(xì)胞層;6例主要表達(dá)于真皮乳頭層;5例在表皮基底細(xì)胞層和真皮乳頭層均有明顯表達(dá)。20例表達(dá)CCL22;其中7例主要表達(dá)于表皮的基底細(xì)胞層;10例主要表達(dá)于真皮乳頭層;3例表皮基底細(xì)胞層和真皮乳頭層均有明顯表達(dá)。CXCL9、CXCL10、CXCR3和CCL22陽(yáng)性的BP皮損共分別為15、14、16和17例,均表達(dá)于真皮乳頭層（表1）。BP皮損中,Th1趨化因子CXCL9-11及其受體CXCR3的表達(dá)、Th2趨化因子CCL22及其受體CCR4的表達(dá)均明顯升高。與正常對(duì)照皮膚相比較,CXCL11組和CCR4組 χ2值分別為5.36和4.89,兩組P均小于 0.05;CXCL9組、CXCL10組、CXCR3及CCL22組 χ2值分別為 8.56、7.41、7.48和10.47,四組P均小于0.01（表2）。

圖1 BP皮損及正常對(duì)照皮膚中4種趨化因子及其受體免疫組化結(jié)果Fig.1 Immunohistochem istry of four kinds of chemokines and their recep tors in BP lesions and normal control skins

表2 4種趨化因子及其受體在BP皮損和正常對(duì)照皮膚中的表達(dá)Tab.2 Expressions of four kinds of chemokines and their receptors in BP lesions and normal controls

3 討論

趨化因子是能吸引白細(xì)胞發(fā)生定向運(yùn)動(dòng)的小分子蛋白質(zhì),包括CXC、CC、C和CX3C四個(gè)亞族。CXCL9、CXCL10和CXCL11均為T(mén)h1趨化因子,主要由活化的成纖維細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和激活的T細(xì)胞合成和分泌,可以誘導(dǎo)CXCR3+T細(xì)胞向炎癥部位遷移,引起炎癥反應(yīng)[2-4]。它們共同的受體是CXCR3,主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞及NK細(xì)胞[5]。本研究中,CXCL9和CXCL10主要表達(dá)于真皮乳頭層和小血管,而表皮基底層細(xì)胞未見(jiàn)表達(dá),我們推測(cè)CXCL9和CXCL10主要由活化的T細(xì)胞、單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌。有研究表明[3,6],CXCL9和CXCL10對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞也有趨化作用,我們推測(cè)這可能是BP皮損中有大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的原因之一。

CXCL11主要表達(dá)于表皮基底細(xì)胞和真皮乳頭層,我們推測(cè)CXCL11由基底層細(xì)胞合成和分泌,呈濃度梯度向真皮淺層彌散,趨化表達(dá)CXCR3的Th1細(xì)胞。

CCL22是Th2趨化因子,主要由巨噬細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞分泌,能誘導(dǎo)Th2細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞的趨化移動(dòng)。CCL22在Th2細(xì)胞向炎癥部位的補(bǔ)充以及Th2相關(guān)免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)中起著重要的作用[7]。CCL22及其受體CCR4在Th2占主導(dǎo)的皮膚病如特應(yīng)性皮炎皮損中表達(dá)升高[8]。本研究顯示,CCL22在表皮基底細(xì)胞、真皮乳頭層高表達(dá)。推測(cè)CCL22的來(lái)源主要有:（1）由角質(zhì)形成細(xì)胞分泌后向真皮淺層尤其是炎細(xì)胞浸潤(rùn)部位呈梯度彌散,趨化Th2細(xì)胞向真皮淺層移動(dòng)。（2）在大量Th2型細(xì)胞因子的作用下,朗格漢斯細(xì)胞可分泌CCL22或CCL17,趨化Th2細(xì)胞向炎癥部位浸潤(rùn)[9,10]。（3）真皮血管內(nèi)皮細(xì)胞和附屬器上皮細(xì)胞分泌CCL22,引起血管和附屬器周圍炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

本研究顯示,Th1趨化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11和Th2趨化因子CCL22及其受體在BP皮損中表達(dá)升高,提示它們可能在BP的發(fā)病機(jī)制中起一定作用。

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2 Flier J,Boorsma D M,Bruyrmeel D Petal.The CXCR3 activating chemokines lP-10,M ig and IP-9 areexpressed in allergic butnot in irritant patch test reactions[J].JInvest Dermatol,1999;113（4）:574-578.

3 劉倫飛,鄭 敏.CXCR3及其配體與皮膚病[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·皮膚性病學(xué)分冊(cè),2002;28（3）:166-169.

4 Ono S J,Nakamura T,Miyazaki Detal.Chemokines:roles in leukocyte development,trafficking,and effector function[J].JAllergy Clin Immunol,2003;111（6）:1185-1199.

5 Ruehlmann JM,Xiang R,Niethammer A Getal.Mig/CXCL9 chemokine gene therapy combines with antibody cytokine fusion protein to suppress growth and dissem ination ofmurine colon carcinoma[J].Cancer Research,2001;61（23）:8498-8503.

6 李 群,譚錦泉,黃保軍etal.IP-10和Mig通過(guò)趨化因子CXC受體3激活嗜酸性粒細(xì)胞NFAT[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2001;21（5）:510-515.

7 劉海娜,吳春玲,蔣 莉etal.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿巨噬細(xì)胞衍生趨化因子水平及臨床意義[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2005;3（9）:142-144.

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9 Hashimoto S,Nakamura K,OyamaNetal.Macrophage-derived chemokine（MDC）/CCL22 produced by monocyte derived dendritic cells reflects the disease activity in patientswith atopic dermatitis[J].JDermatolSci,2006;44（2）:93-99.

10 Xiao T,Fujita H,Saeki Hetal.Thymus and activation-regulated chemokine（TARC/CCL17）produced by mouse epidermal Langerhans cells is upregulated by TNF-alpha and IL-4 and downregulated by IFN-gamma[J].Cytokine,2003;23（4-5）:126-132.

[收稿2009-08-29 修回2009-12-28]

（編輯 許四平）

Expression of Th1/Th2 chemokines and their receptors in the lesions of bullous pemphigoid

GENGShi-Ling,SHANShi-Jun,WUJian,WANGZhi-Hua,XIAOTing,GAOXing-HuaCHENHong-Duo.Department ofDermatology,theFirstAffiliatedHospital,ChinaMedicalUniversity,Shenyang110001,China

Objective:To investigate the expression of Th1 chemokine CXCL9,CXCL10,CXCL11,Th2 chemokine CCL22 and their recep tors in the lesionsof bullouspemphigoid（BP）.Methods:Immunohistochemicalassaywas performed to detect theexpression ofCXCL9,CXCL10,CXCL11,CCL22 and their receptors CXCR3 and CCR4 in BP lesions and normal control skin.Results:CXCL9,CXCL10,CXCL11,CCL22,CXCR3 and CCR4were overexp ressed in BP lesions than those in normal control skin（P＜0.01）.The positive rates of CXCL9,CXCL10,CXCL11 and CXCR3 in BP lesionswere 50%（15/30）,46.7%（14/30）,46.7%（14/30）and 53.3%（16/30）,respectively.The positive rates of CCL22 and CCR4 were 66.7%（20/30）and 56.7%（17/30）.Conclusion:The overexpression of Th1 chemokine CXCL9,CXCL10,CXCL11,Th2 chemokine CCL22 and their receptorsmay play important roles in the pathogenesis of BP.

Bu llous Pemphigoid;CXCL9;CXCL10;CXCL11;CCL22;CXCR3;CCR4

R758.66

A

1000-484X（2010）03-0270-03

①本文受國(guó)家自然科學(xué)基金（30400389）、教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金（20060159014）、教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（IRT0760）、遼寧省創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（2008T192）資助

耿士玲（1979年-）,女,在讀碩士,主要從事皮膚免疫細(xì)胞與趨化因子的研究;

及指導(dǎo)教師:肖 ?。?971年-）,男,博士,副主任,主任醫(yī)師,教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事皮膚免疫細(xì)胞與趨化因子的研究,E-mail:cmuxt@126.com。

·實(shí)用臨床免疫學(xué)·