糞便鈣衛(wèi)蛋白在腸道疾病鑒別診斷中的價(jià)值

李昶，姜敏，于兆進(jìn)

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，沈陽(yáng) 110001）

糞便鈣衛(wèi)蛋白在腸道疾病鑒別診斷中的價(jià)值

Value of Fecal Calprotectin in the Differential Diagnosis of Intestinal Diseases

李昶，姜敏，于兆進(jìn)

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，沈陽(yáng) 110001）

采用ELISA方法檢測(cè)糞便中的鈣衛(wèi)蛋白濃度，鑒別腸道器質(zhì)性疾病和功能性疾病。

鈣衛(wèi)蛋白；炎癥性腸??；腸易激綜合征

炎癥性腸?。╥nflam matorybowel disease，IBD）、結(jié)腸癌、腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是消化道常見的3種疾病。癥狀上都有腹痛、排便習(xí)慣和糞便性狀的改變，需要借助一些輔助檢查加以鑒別。內(nèi)鏡較為準(zhǔn)確，但屬于侵入性的檢查。糞便潛血試驗(yàn)（fecaloccultbloodtest，F(xiàn)OBT）是通過(guò)檢測(cè)糞便中的血紅蛋白、血紅素等成分而判斷消化道疾病的，因此不能發(fā)現(xiàn)無(wú)出血的病變。C反應(yīng)蛋白（C-reactiveprotein，CRP）和紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sed imentation rate，ESR）敏感性低，易受全身多種因素影響，對(duì)腸道病變的特異性較差。近些年，對(duì)于鈣衛(wèi)蛋白的研究越來(lái)越引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。Bjarnason等［1］研究認(rèn)為：鈣衛(wèi)蛋白在鑒別IBD和IBS時(shí)，敏感度和特異度分別達(dá)到了100%和97%。Roseth等［2］研究表明：在預(yù)測(cè)結(jié)腸癌方面，鈣衛(wèi)蛋白敏感度達(dá)到了90%，超過(guò)了ESR、CRP、FOBT。本研究旨在利用鈣衛(wèi)蛋白檢測(cè)鑒別IBD、結(jié)腸癌、IBS及健康者。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

以我院2008年11月至2009年10月期間消化內(nèi)科門診及住院患者為入選對(duì)象，IBD組60例，結(jié)腸癌組60例，均經(jīng)結(jié)腸鏡檢查及病理證實(shí)。I B S組30例，為結(jié)腸鏡檢查無(wú)異常，且符合羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者。另選取體檢無(wú)任何異常者30例作為健康組。入選者均排除了上消化道疾病，均無(wú)心、肝、肺、腎等重要臟器病變，無(wú)神經(jīng)及精神疾病史，近期無(wú)糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑使用史，無(wú)長(zhǎng)期服用非甾體抗炎藥史，并排除了酗酒者、藥癮者、孕婦。所有受試者均知情同意。

1.2 標(biāo)本收集

結(jié)腸鏡檢查前3d內(nèi)的糞便約5g，低溫留置（≤30℃）送往醫(yī)院，密封后置于-20℃的冰箱內(nèi)保存。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

選用PhicalTest試劑盒（挪威CALPRO公司生產(chǎn)）。標(biāo)本室溫下解凍，無(wú)菌接種環(huán)取約100m g放入試管內(nèi)，加入1/50的提取緩沖液，漩渦儀上充分混勻，吸取1m l勻漿離心（10000g）25min，提取0.5m l上清液。再將上清液以1/50比例稀釋，常規(guī)ELISA流程。將酶標(biāo)儀置于405n m處，當(dāng)1000n g/m l標(biāo)準(zhǔn)品的光密度O D值達(dá)到2.0時(shí)，立即用自動(dòng)化酶標(biāo)儀測(cè)定。

1.4 鈣衛(wèi)蛋白濃度的計(jì)算方法

以試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品的鈣衛(wèi)蛋白濃度（n g/m l）及對(duì)應(yīng)O D值做曲線，將酶標(biāo)儀所得的樣本O D值帶入曲線函數(shù)中，乘以校正稀釋度（2.5）后得到各組鈣衛(wèi)蛋白的濃度值（m g/k g）。

1.5 統(tǒng)計(jì)處理

經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，各組鈣衛(wèi)蛋白濃度呈非正態(tài)分布，因此計(jì)算中位數(shù)、四分位間距、全距。用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組鈣衛(wèi)蛋白濃度值的分布趨勢(shì)見表1。

結(jié)果顯示，IBD組與結(jié)腸癌組、I B S組、健康組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)腸癌組與I B S組、健康組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而I B S組與健康組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.16）。

表1 各組糞便鈣衛(wèi)蛋白統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 討論

鈣衛(wèi)蛋白是1980年由Fagerhol等［3］從中性粒細(xì)胞中分離發(fā)現(xiàn)的一種雜合性的鈣結(jié)合蛋白，分子量為36000，由兩條重鏈M R P 14和一條輕鏈M R P 8非共價(jià)結(jié)合而成的異二聚體。每條鏈可以結(jié)合兩個(gè)鈣離子，因而具有抗蛋白酶的活性，因其具有螯合鋅離子的能力而具有抗熱性，因此可以在腸腔和外界環(huán)境中長(zhǎng)期保持穩(wěn)定而不被各種酶和細(xì)菌破壞。鈣衛(wèi)蛋白［4］是粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和角質(zhì)細(xì)胞的主要蛋白質(zhì)，是中性粒細(xì)胞更新的標(biāo)志物，在許多炎癥情況下都升高。

本研究結(jié)果顯示，鈣衛(wèi)蛋白濃度中位數(shù)從高到低依次為IBD組、結(jié)腸癌組、I B S組、健康組。IBD組和結(jié)腸癌組的鈣衛(wèi)蛋白的濃度分布比較離散，而I B S組和健康組濃度分布比較密集，且范圍都在0～100m g/k g之間。因此認(rèn)為鈣衛(wèi)蛋白主要在炎性細(xì)胞中表達(dá)，炎癥越重，濃度越高。這同以往研究結(jié)果較為一致［5］。

各組陽(yáng)性率顯示鈣衛(wèi)蛋白檢測(cè)同結(jié)腸鏡檢查結(jié)果具有較高的一致性，因此可為臨床診斷提供相對(duì)簡(jiǎn)便易行、無(wú)創(chuàng)、可靠的依據(jù)。檢測(cè)糞便中的鈣衛(wèi)蛋白濃度不僅可以將IBD、結(jié)腸癌同I B S與健康者區(qū)分開，而且在IBD與結(jié)腸癌的鑒別上也極具有參考價(jià)值。

鈣衛(wèi)蛋白的理化特性決定了其檢測(cè)結(jié)果可靠，但是它同樣受一定因素的影響，如藥物、年齡、環(huán)境等。P o u l l i s等［6］發(fā)現(xiàn)質(zhì)子泵抑制劑能夠使鈣衛(wèi)蛋白的含量增加。O l a f s d o t t i r等研究表明［7］：＜12周的健康嬰兒糞便鈣衛(wèi)蛋白含量明顯升高，含量與老年IBD患者的含量相似。S a v i n o等［8］近期的研究結(jié)果顯示嬰兒的喂養(yǎng)方式同樣會(huì)影響到糞便中鈣衛(wèi)蛋白的濃度，這可能與母乳中的促進(jìn)腸道免疫系統(tǒng)形成的激素（如瘦素）、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子（如表皮生長(zhǎng)因子、粒細(xì)胞集落刺激因子等）等有關(guān)。

綜上，鈣衛(wèi)蛋白是定量檢測(cè)，能發(fā)現(xiàn)早期不出血病灶，其方法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、無(wú)創(chuàng)，不僅能夠較準(zhǔn)確地區(qū)分腸道器質(zhì)性疾病和功能性疾病，而且在鑒別IBD和結(jié)腸癌方面同樣具有較高的參考價(jià)值。對(duì)于IBD急性發(fā)作期的重癥患者，結(jié)腸鏡檢查往往被視為禁忌，此時(shí)糞便鈣衛(wèi)蛋白檢測(cè)就顯得尤為重要。另外，對(duì)于已經(jīng)確診患者的病情監(jiān)測(cè)、藥物療效的評(píng)價(jià)、治療方案的調(diào)整等具有重要指導(dǎo)意義。

［1］Bjarnason I，Sherwood R.Fecal calprotectin：a significant step in the noninvasive assessment of intestinal inflammation ［J］.Pediatr Gastroenterol Nutr，2001，33（1）：11-13.

［2］Roseth AG，F(xiàn)agerhol MK，Aadland E，et al.Fecal calprotectin：a novel test for the diagnosis of colorectal cancer? ［J］.Scand J of Gastroenterol，1992，27（9）：793-798.

［3］Fagerhol MK，Dale I，Anderson T，et al.Release and quantitation of a leucocyte derived protein［J］.Scand J Haematol，1980，24（6）：393-398.

［4］Johne B，F(xiàn)agerhol MK，Lyberg T，et al.Functional and clinical aspects of the myelomonocyte protein calprotectin ［J］.Mol Pathol，1997，50（3）：113-123.

［5］Roseth AG，Aadland E，Jahnsen J，et al.Assessment of disease activity in ulcerative colitis by fecal calprotectin，a novel granulocyte marker protein［J］.Digestion，1997，58（3）：176-180.

［6］Poullis A，F(xiàn)oster R，Mendall MA，et al.Proton pump inhibitors are associated with evaluation of fecal calprotectin and may affect specificity［J］.Eur J Gastroenterol Hepatol，2003，15（5）：573-574.

［7］Olafsdottir E，Asknes I，F(xiàn)luge G，et al.Fecal calprotectin levels in infants with infantile colic，healthy infants，children with inflammatory bowel disease，children with recurrent abdominal pain and healthy children［J］.Acta Paediatr，2002，91（3）：45-50.

［8］Savino F，Castagno E，Calabrese R，et al.High fecal calprotectin levels in healthy，exclusively breast-fed infants［J］.Neonatology，2009，97（4）：299-304.

（編輯武玉欣，英文編輯鄭華川）

R574.1

B

0258-4646（2010）09-0770-02

李昶（1984-），女，碩士研究生.

姜敏，E-mail：jiang-min@163.com

2010-03-31