子宮內(nèi)膜病變組織中脆性組氨酸三聯(lián)體基因的表達(dá)及臨床研究

安云婷 于小紅 喬志強(qiáng) 李漢萍 魏寶秀

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma)是女性生殖器三大惡性腫瘤之一，在某些歐美國家子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率已居女性生殖道惡性腫瘤首位，嚴(yán)重危害著女性的健康。

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生是1個(gè)多步驟的復(fù)雜過程，其確切病因仍不清楚，許多學(xué)者一直在尋找在腫瘤初期甚至在癌前期就有結(jié)構(gòu)和功能異常的基因。脆性組氨酸三聯(lián)體蛋白FHIT是新近發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，在人類多種腫瘤中表達(dá)缺失[1～3]。在病理情況下，抑癌基因的異常表達(dá)及細(xì)胞異常增殖在腫瘤發(fā)生上起著相當(dāng)重要的作用[4，5]。因此，了解子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞抑癌基因的異常及細(xì)胞增殖的特點(diǎn)，探討其內(nèi)在規(guī)律，對(duì)尋找更為客觀可靠診斷指標(biāo)，用以監(jiān)測(cè)病變的進(jìn)展及指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。本研究通過檢測(cè)FHIT在不同程度子宮內(nèi)膜病變組織中的表達(dá)，探討FHIT在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

隨機(jī)選取江西省婦幼保健院腫瘤科2003年1月～2009年12月收治的、經(jīng)病理檢查證實(shí)為子宮內(nèi)膜腺癌、子宮內(nèi)膜不典型增生患者各75例，將其作為研究組，以同期因其它疾病就診并行子宮切除的正常子宮內(nèi)膜患者60例作為對(duì)照組。研究組及對(duì)照組全部患者手術(shù)前均未行放療、化療以及激素治療。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)(2000年)手術(shù)-病理分期，75例子宮內(nèi)膜腺癌患者分為：高分化腺癌(G1)13例；中分化腺癌(G2)47例；低分化腺癌(G3)15例。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學(xué)SP法。兔抗人FHIT多克隆抗體購自北京中山公司，SP試劑盒購自北京中山公司。操作按產(chǎn)品說明書進(jìn)行。陽性對(duì)照為已知FHIT基因表達(dá)陽性的乳腺組織，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

參照文獻(xiàn)方法[6]觀察FHIT蛋白的分布、陽性強(qiáng)度和陽性率。高倍鏡下綜合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行半定量測(cè)定，主要為胞質(zhì)染色。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：每例切片隨機(jī)選取腫瘤細(xì)胞密集的5個(gè)高倍鏡(400×)視野，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)，取均值，以百分率(%)表示。陽性細(xì)胞數(shù)≤10%者1分;11%～50%者2分;51%～75%者3分;>75%者4分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積≥2分為免疫反應(yīng)陽性(+)，<2分為陰性(-)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 11·0軟件包進(jìn)行Pearson χ2檢驗(yàn)、Fisherman精確概率檢驗(yàn)、Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌組織中FHIT陽性表達(dá)率分別為96.67%、57.33%、34.67%(表1)。75例子宮內(nèi)膜腺癌中，不同病理分化程度患者FHIT陽性率分別為61.54%、34.04%、13.33%，差異具有顯著性(P<0.05)(表2)，不同病理分期患者FHIT表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。不同增生程度子宮內(nèi)膜不典型增生患者FHIT陽性率分別為64.71%、57.57%、52.00%(表3)。FHIT在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜腺癌組織中表達(dá)情況，F(xiàn)HIT表達(dá)主要定位于宮內(nèi)膜腺體及淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞和組織細(xì)胞的胞核及胞質(zhì)。

表1 不同子宮內(nèi)膜病變組織中FHIT表達(dá)情況

表2 FHIT在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況

表3 不同增生程度子宮內(nèi)膜不典型增生患者FHIT表達(dá)情況

3 討論

脆性組氨酸三聯(lián)體基因( fragile histidine triad gene)，即FHIT基因是1996年Ohta等[7，8]用定位克隆技術(shù)及外顯子捕獲法在3p14.2區(qū)分離鑒定出1個(gè)新的抑癌基因，在正常情況下，F(xiàn)HIT存在于大多數(shù)正常組織中。國外研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤組織中FHIT蛋白表達(dá)存在頻繁地降低或丟失，并發(fā)現(xiàn)與FHIT基因轉(zhuǎn)錄及缺失有關(guān)，故提示FHIT基因?yàn)槎喾N腫瘤的候選抑制基因[9～11]。

FHIT是第1個(gè)將脆性位點(diǎn)與腫瘤相聯(lián)系的腫瘤抑制基因。該基因在多種腫瘤中有異常表達(dá)。它有促進(jìn)凋亡、抑制腫瘤生長(zhǎng)的功能，在所有的組織包括淋巴細(xì)胞中都有表達(dá)。國內(nèi)王野等[12]認(rèn)為，F(xiàn)HIT基因與乳腺癌組織分化程度、病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。大量研究證實(shí)，F(xiàn)HIT不僅與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切聯(lián)系，而且與肺癌、乳腺癌、腎癌、宮頸癌、卵巢癌等發(fā)生有關(guān)，這些異常主要表現(xiàn)為1個(gè)或數(shù)個(gè)外顯子的缺失或不明內(nèi)含子序列的插入，較少發(fā)生突變。

本研究結(jié)果顯示,FHIT蛋白表達(dá)水平在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜腺癌中逐漸下降。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示子宮內(nèi)膜由良性到惡性的轉(zhuǎn)變過程中,在不典型增生階段,可能已有FHIT蛋白表達(dá)的變化,因此，若形態(tài)學(xué)上的不典型增生同時(shí)伴有FHIT蛋白表達(dá)的減少則可能具有發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌的高危險(xiǎn)性。不同級(jí)別的內(nèi)膜不典型增生及不同期別的內(nèi)膜癌中，均存在一定比例的FHIT表達(dá)異常，且有增高的趨勢(shì)，但FHIT表達(dá)異常無顯著性差異。而不同分化的內(nèi)膜樣癌FHIT的表達(dá)異常有顯著性差異，隨著內(nèi)膜樣癌分化的降低，癌組織中FHIT陽性細(xì)胞數(shù)量及強(qiáng)度明顯減少或缺失。提示FHIT低表達(dá)，可能在子宮內(nèi)膜不典型增生發(fā)展至子宮內(nèi)膜腺癌的過程中起作用，而與癌變后的疾病進(jìn)展無關(guān)。因此，檢測(cè)FHIT表達(dá)對(duì)了解子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為及判斷預(yù)后有重要的臨床參考價(jià)值。

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