血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在肝癌介入栓塞后的表達(dá)

丁 罡 邵 懌 劉合代 黃 燕 梁宏享 趙其德

肝動(dòng)脈栓塞化療(TACE)是目前被公認(rèn)為對(duì)不能手術(shù)切除肝癌的安全、有效、可重復(fù)的首選常規(guī)治療方法。它可使腫瘤細(xì)胞壞死，腫瘤縮小，癥狀緩解[1]，但其遠(yuǎn)期療效并不理想。除腫瘤未能控制外，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是主要原因[2]。影響介入療效的病理分析提示腫瘤血管形成和側(cè)枝循環(huán)建立是重要因素[3，4]。本文通過對(duì)肝細(xì)胞肝癌患者行血管造影及測(cè)定TACE前后血清VEGF水平，初步探討腫瘤血管形成因子(VEGF)對(duì)肝癌TACE的影響，并為聯(lián)合應(yīng)用血管生成抑制劑、提高腫瘤介入療效提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例資料

63例患者分別為2006年1月至2009年10月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院和長(zhǎng)航醫(yī)院收治的患者,病理診斷均為肝細(xì)胞肝癌。男性49例，女性14例；平均年齡54.7歲。所有患者診斷時(shí)均無手術(shù)指征，而行肝動(dòng)脈栓塞化療。

1.2 血清標(biāo)本采集

患者清晨空腹抽取2 ml靜脈血，在4℃下以2 000 r/min離心15 min。取上清液200 μl保存于-80℃超低溫冰箱,待集中后測(cè)定。發(fā)生溶血或渾濁的血清不宜用于測(cè)定。其中，隨機(jī)選擇40例肝細(xì)胞肝癌患者，在介入治療前及介入后第2天抽取靜脈血。

1.3 血清VEGF測(cè)定

采用雙抗夾心ELISA法檢測(cè)。人VEGF酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)試劑盒由深圳萊伯克生物科技有限公司生產(chǎn)，由上海美季生物科技有限公司提供,檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 治療方法

TACE采用Seldinger方法，先行肝總動(dòng)脈或腹腔動(dòng)脈造影，明確病灶位置數(shù)目、供血?jiǎng)用}，超選插管至肝固有動(dòng)脈或腫瘤供血?jiǎng)用}，注入化療藥物，常用藥物為表阿霉素 20～40 mg、順鉑20～40 mg、5-Fu 750～1 250 mg、MMC 5～10 mg 。栓塞劑為超液化碘油和明膠海棉細(xì)條。先用超液化碘油和表阿霉素或MMC混合，行腫瘤的外周性栓塞，后予明膠海棉細(xì)條行腫瘤中央動(dòng)脈栓塞。

1.5 腫瘤血管造影分類[5]

富血管型：腫瘤供血?jiǎng)用}增粗，瘤內(nèi)有豐富不規(guī)則的腫瘤血管，造影劑滯留于腫瘤血管內(nèi)，腫瘤染色明顯。

乏血管型：血管推壓移位、腫瘤血管稀疏及腫瘤染色不明顯。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù),樣本均數(shù)采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤患者血清VEGF水平與腫瘤血管關(guān)系

63例患者行血管造影，發(fā)現(xiàn)其中43例腫瘤富血管患者血清VEGF水平高于20例腫瘤乏血管患者(136.80±52.13 pg/ml vs 62.30 ±31.17 pg/ml,P<0.05)。

2.2 肝動(dòng)脈栓塞治療前后血清VEGF水平的變化

肝動(dòng)脈栓塞治療前后40例患者血清VEGF濃度分別為(87.41±43.16)pg/ml和(128.42±43.12)pg/ml,兩者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中有36例患者肝動(dòng)脈栓塞治療后血清VEGF水平升高，27例第二次血管造影發(fā)現(xiàn)新生腫瘤血管的患者血清VEGF濃度顯著升高(179.13±66.27)pg/ml (P<0.01)。

2.3 臨床隨訪結(jié)果

以上40例肝癌患者隨訪6個(gè)月，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4例血清VEGF水平降低的肝癌患者經(jīng)數(shù)次TACE治療后，碘油沉積良好(超過50%)，2例病灶縮小50%以上(PR)，2例病灶穩(wěn)定(SD)；36例血清VEGF水平升高的肝癌患者中4例病灶穩(wěn)定(SD)，32例病灶進(jìn)展(PD)，碘油沉積欠佳，其中27例出現(xiàn)肝內(nèi)播散和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(表1)。

表1 40例肝癌患者介入療效(例)

*為其中27例出現(xiàn)肝內(nèi)播散和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移

3 討論

肝細(xì)胞肝癌具有較豐富的動(dòng)脈血供,對(duì)腫瘤的血供特點(diǎn)的研究使得臨床治療有了顯著地進(jìn)步[6]。將腫瘤的血管栓塞的介入治療，特別是無法手術(shù)切除的肝癌的栓塞化療(TACE)，是目前公認(rèn)較理想的1種治療方法[5]。TACE的近期療效非常顯著，可使腫瘤細(xì)胞壞死，腫瘤縮小，患者癥狀得到緩解，部分病例甚至因腫瘤明顯縮小而重新獲得手術(shù)切除機(jī)會(huì)。但是，術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍很常見。TACE治療后3年復(fù)發(fā)率為30%～60%[7，8]。影響介入治療肝癌療效的因素包括腫瘤細(xì)胞類型、肝癌血供、側(cè)枝循環(huán)的建立、門脈癌栓的形成、栓塞后殘留的腫瘤細(xì)胞、合并肝硬化等[3]。

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，介入后的腫瘤血管形成對(duì)介入的影響成為新的研究方向。研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF是作用最強(qiáng)、特異性最高的血管形成因子之一[9]。VEGF特異性地誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，向腫瘤細(xì)胞遷移，最后形成新生腫瘤血管，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供病理基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了63例肝癌患者血清VEGF水平與腫瘤血管造影表現(xiàn)的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)43例腫瘤富血管患者血清VEGF水平明顯高于20例乏血管患者。提示VEGF的表達(dá)水平反映了腫瘤血管形成程度。

36例肝癌患者TACE后血清VEGF水平升高，其中有27例患者第二次血管造影發(fā)現(xiàn)新生的腫瘤血管，臨床療效較差，88.9%(32/36)患者病灶進(jìn)展，75%(27/36)患者出現(xiàn)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。而4例血清VEGF降低的患者，臨床療效相對(duì)較好。介入治療主要是通過化療藥物和阻斷供血?jiǎng)用}引起腫瘤死亡,同時(shí)也造成腫瘤局部的缺血和缺氧。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)缺氧誘導(dǎo)缺氧因子(HIF-1)表達(dá)是上調(diào)VEGF表達(dá)的最主要的因素[10,11]。腫瘤供血?jiǎng)用}栓塞后，腫瘤組織缺血，腫瘤細(xì)胞缺氧，上調(diào)VEGF的表達(dá)，誘導(dǎo)形成新生腫瘤血管，有利于殘留的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，從而影響臨床介入療效。TACE后殘留的腫瘤細(xì)胞處于增殖狀態(tài)，惡性程度更高，分泌更多的VEGF。TACE具有兩面性，它能使得腫瘤細(xì)胞死亡和凋亡，同時(shí)也能上調(diào)腫瘤血管形成因子(VEGF)的表達(dá)，出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

上述結(jié)果提示，腫瘤血管形成可能為腫瘤細(xì)胞逃避臨床栓塞化療的又一新的機(jī)制。肝癌介入前后血清VEGF的表達(dá)是有效的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)指標(biāo)。臨床通過血清學(xué)檢測(cè)VEGF來判斷介入治療的效果和預(yù)后。同時(shí)，聯(lián)合應(yīng)用腫瘤血管抑制劑和栓塞化療可望能更好得切斷肝癌的血供，殺滅腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤細(xì)胞復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

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