香菇多糖對肝癌患者化療栓塞前后T淋巴細胞亞群及IL-12、sIL-2R的影響及臨床意義*

孟慶民 夏玉軍

(1. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院解剖學(xué)教研室，山東 青島 266021；2. 泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院，山東 泰安 271000)

原發(fā)性肝癌(primary liver carcinomas, PLC)是原發(fā)于肝臟的惡性上皮細胞腫瘤，臨床常見，病死率較高，且一經(jīng)發(fā)現(xiàn)多為中晚期，失去手術(shù)機會，對放化療耐受性低，療效差。經(jīng)導(dǎo)管肝動脈栓塞術(shù)(TACE)已成為PLC的首選非手術(shù)治療方法。但TACE既殺傷惡性腫瘤細胞，也殺傷機體正常增殖和分化細胞，降低機體免疫。本研究通過檢測正常人群、肝癌患者單純TACE及TACE聯(lián)合香菇多糖(Lentinan,LNT)治療前后外周血T淋巴細胞亞群及IL-12和sIL-2R水平的變化，旨在探討肝癌患者免疫功能的狀態(tài)及LNT對肝癌TACE前后T淋巴細胞亞群，IL-12和sIL-2R的影響。

1 材料和方法

1.1 臨床資料:

將2008年5月～2009年5月我院介入科經(jīng)導(dǎo)管行肝動脈化療栓塞術(shù)(TACE)治療的原發(fā)性肝癌病人40例，其中包括男性30名，女性10名，年齡36～75歲，平均58歲，全部為初次治療病例。所有治療病例均經(jīng)過B超、CT以及病理或細胞學(xué)證實為原發(fā)性肝癌，4周內(nèi)未實行化學(xué)治療或放射治療，主要臟器(心、肺、腎) 無功能損害，所有入選病例均具備完整的臨床以及影像學(xué)資料和完整的實驗室檢查指標(biāo)。將40例患者隨機分為兩組(每組20例)，即單純TACE組(A組)、TACE聯(lián)合應(yīng)用香菇多糖(B組)，并以查體中心正常查體人群20人作為正常對照組(C組)。

1.2 方法

采用Seldinger方法，經(jīng)皮股動脈穿刺插管至腹腔干及腸系膜上動脈造影，明確腫瘤部位、大小、數(shù)目，確定腫瘤供血血管, 將導(dǎo)管選擇至肝固有動脈、肝左或肝右動脈進行治療，兩組患者分別經(jīng)導(dǎo)管灌注化療藥物及碘化油與化療藥物混懸液或乳劑。常用藥物有5-氟尿嘧啶(5-FU 1. 0～1.25 g)或5-氟尿嘧啶脫氧核苷(5-FU 1. 0～1. 25g)，多柔比星(ADM 30～50 mg)或表柔比星(EPI30～50 mg)或吡柔比星(THP 30～50 mg)，絲裂霉素(MMC 8～10 mg)，順鉑(DDP 40～60 mg)，應(yīng)用時多選擇2～3種藥物聯(lián)合,然后經(jīng)導(dǎo)管緩慢均勻推注碘化油10～20 ml與其中一種化療藥物混懸液或乳劑。聯(lián)合化療組同時應(yīng)用香菇多糖2mg入500ml 5%葡萄糖，靜滴，一周兩次。分別取治療前和治療后2周病人外周血，采用流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞亞群,包括: CD4+T細胞,CD8+T細胞, CD4+T/CD8+T比值。同時于治療前和治療后4周采用Elisa(酶聯(lián)免疫吸附試驗)對患者IL-12, sIL-2R進行檢測比較。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SAS 8. 2進行統(tǒng)計學(xué)分析。比較各組CD4+T細胞, CD8+T細胞,及CD4+/CD8+比值，和IL-12、sIL-2R等計量資料時，選用ANOVA過程作方差分析，取α=0.05；各組均數(shù)間的多重比較采用SNK法。

2 結(jié) 果

單純TACE組及TACE聯(lián)合應(yīng)用香菇多糖組與對照組各參數(shù)比較有統(tǒng)計學(xué)意義；單純TACE組及TACE聯(lián)合應(yīng)用香菇多糖組各組治療前后比較有統(tǒng)計學(xué)意義；TACE聯(lián)合應(yīng)用香菇多糖組與單純TACE組治療后各參數(shù)比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0. 05)；TACE聯(lián)合應(yīng)用香菇多糖組與單純TACE組治療前比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05) (見表1)。

表1 外周血T淋巴細胞亞群及IL-12、sIL-2R的測定值的

3 討 論

原發(fā)性肝癌患者免疫功能低下，已為一些實驗或臨床研究所證實[1]。其主要原因可能是肝癌細胞常分泌一些因子抑制機體免疫狀態(tài)，導(dǎo)致免疫細胞處于抑制狀態(tài)[2]。機體抗腫瘤免疫的主要方式是細胞免疫，其中T細胞亞群起主導(dǎo)作用。外周血T細胞主要為CD4+T細胞和CD8+T細胞兩大類，CD4+T細胞(Th細胞)為免疫應(yīng)答的主要反應(yīng)細胞，活化增殖并分化后發(fā)揮強大的抗腫瘤效應(yīng)。CD8+T細胞主要是抑制性T細胞(Ts細胞)，起免疫抑制作用。外周血T細胞亞群的數(shù)量比例，特別是CD4+/CD8+比值是反映細胞免疫平衡的敏感指標(biāo)，有助于反映機體免疫功能的調(diào)節(jié)能力[3]。

IL-12(白細胞介素-12)又稱細胞毒性淋巴細胞成熟因子、自然殺傷細胞(NK)刺激因子[4]。它是一種由單核巨噬細胞、B淋巴細胞等細胞產(chǎn)生的異二聚體的細胞因子。其對T細胞和NK細胞具有多種生物學(xué)活性：誘導(dǎo)細胞因子的轉(zhuǎn)錄和分泌；增強細胞毒性；誘導(dǎo)由其它刺激物活化的T淋巴細胞和NK細胞的增殖。目前認(rèn)為IL-12是抗腫瘤治療最有希望獲得良好療效的細胞因子。肝癌患者血清IL-12水平的升高有利于機體產(chǎn)生抗腫瘤免疫。sIL-2R(可溶性白細胞介素-2受體Soluble inter-leukin-2 receptor) ，可與膜白細胞介素2受體(membrane IL-2R, mIL-2R)競爭結(jié)合IL-2，從而間接抑制IL-2介導(dǎo)的各種免疫反應(yīng),現(xiàn)已成為某些惡性腫瘤診斷、預(yù)后和療效監(jiān)測的指標(biāo)。原發(fā)性肝癌患者血清中sIL-2R水平的變化會導(dǎo)致NK細胞活性降低，殺傷力下降，免疫監(jiān)視功能減弱,機體難以控制腫瘤的發(fā)展。

TACE作為一種重要的治療手段在原發(fā)性肝癌(PLC)的治療中具有舉足輕重的意義。但化療藥物均為細胞毒性藥物，在殺滅腫瘤細胞的同時也殺傷機體正常增殖和分化的細胞,包括免疫細胞。因此，Morikawa等[5]認(rèn)為腫瘤的治療過程中殺傷腫瘤細胞與保護機體的免疫功能具有同等重要作用。TACE的同時及早配合免疫治療，盡快恢復(fù)機體的免疫功能，提高機體特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答；抑制殘存病灶的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，在肝癌患者的治療中有著重要的意義。

香菇多糖(lentinan, LNT) 是從香菇的實體中分離出來的多糖，分離純化成6個多糖部分,其中活性最強的部分命名為香菇多糖。LNT是一種新型的兼有抑制腫瘤和提高免疫功能的可用做免疫治療的多糖類生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。LNT無直接的細胞毒作用，主要是通過宿主增強誘導(dǎo)活化的巨噬細胞及殺傷T細胞，提高NK細胞活性和增強抗體依賴性巨噬細胞毒作用來發(fā)揮抗腫瘤作用。LNT對實體瘤有抑制作用,可提高宿主免疫力，抑制腫瘤的生長。香菇多糖+TACE聯(lián)合治療對原發(fā)性肝癌患者肝臟腫瘤縮小, AFP降低，明顯優(yōu)于單用TACE治療(P< 0·01)，與日本村上等報告相同[6]。TACE對單個巨塊型肝癌效果較好,可能是由于腫瘤體積較大,多有包膜,一旦瘤體內(nèi)為碘油充盈且主要供血動脈被切斷易發(fā)生缺血，腫瘤壞死，瘤體縮小明顯[7-8]，而多發(fā)結(jié)節(jié)型和彌漫型肝癌常伴有肝硬化，肝功能較差,肝內(nèi)門靜脈癌栓多見,易發(fā)生肝內(nèi)、外轉(zhuǎn)移,故化療栓塞治療療效較差。TACE與香菇多糖聯(lián)合使用，香菇多糖具有增加原發(fā)性肝癌患者免疫功能及抗腫瘤活性的能力，它主要調(diào)節(jié)腫瘤患者外周血的NK細胞活性和Ic-Ⅱ活性，并可提高CD4活性[9]，從而增加肝癌患者的機體免疫功能，增加機體對肝癌細胞生長的抑制或/和對腫瘤抗原的識別能力。

本研究中，肝癌患者外周血CD4+T細胞數(shù)、CD4+/CD8+比值及IL-12水平顯著低于正常對照組, CD8+T細胞數(shù)、sIL-2R水平顯著高于正常對照組。說明肝癌患者體內(nèi)的細胞免疫功能呈明顯的抑制狀態(tài)。單純TACE組患者治療后2周肝癌患者CD4+T細胞數(shù)、CD4+/CD8+比值及IL-12水平與TACE前1天相比有一定提高, CD8+T細胞數(shù)、sIL-2R水平有所下降 ,提示TACE治療兩周后患者免疫狀態(tài)有所提高。聯(lián)合組TACE后外周血CD4+T細胞數(shù)、CD4+/CD8+比值及IL-12水平有顯著提高，CD8+T細胞數(shù)、sIL-2R水平顯著降低，且聯(lián)合組TACE后各組參數(shù)與單純TACE組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0. 05), 提示香菇多糖聯(lián)合TACE治療肝癌，可使患者免疫狀態(tài)明顯提高，優(yōu)于單純TACE治療。

綜上所述，肝癌患者細胞免疫功能低下，TACE治療兩周后可使患者免疫狀態(tài)有一定恢復(fù)。TACE聯(lián)合香菇多糖治療可明顯改善患者免疫狀態(tài)，促進免疫功能重建,減少治療的毒副作用，此治療方法較為理想、安全、可靠，值得臨床推廣應(yīng)用。

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